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关键词： 豆豉   溶栓酶   大豆蛋白   可溶性淀粉   分离纯化   酪蛋白   发酵条件   酶工程   过硫酸铵   摇瓶发酵  

摘要： 对豆豉溶栓酶工程菌株WB DFE5进行了摇瓶发酵条件的研究 ,确定了发酵的优化条件为 :可溶性淀粉 2 % ,酪蛋白 2 % ,大豆蛋白胨 0 5 % ,酵母粉 0 15 % ,K2 HPO40 2 5 % ,KH2 PO40 0 5 % ,CaCl2 0 0 2 % ,MgSO40 0 5 % ,pH7 0。通过硫酸铵分段盐析、离子交换和凝胶过滤 ,从 1L工程菌株WB DFE5的发酵液中分离纯化出 12 5mg重组豆豉溶栓酶 ,酶的比活为 5 918 7IU/mg。

关键词： 抗浮锚杆   抗拔力   油水分离器   FS厂房   地下结构  

摘要： 岭澳核电站油水分离器厂房FS为深11 7 m的海边地下结构, 周围地下水位较高且与海水相通, 故其抗浮稳定分析与抗浮措施选择是设计的控制因素。通过介绍岭澳核电站FS厂房抗浮锚杆的设计, 探讨了带锚杆底板的内力计算模型。工程实践表明: 在地质条件允许时, 打锚杆是解决地下结构抗浮问题的简单、有效措施。

关键词： 量价分离   工程量清单模式   造价管理  

摘要： 本文从造价管理的角度,对如何在工程量清单计价模式下顺应时代的要求,有效地进行造价管理进行了一些有益的探讨。

关键词： 中药化学成分-分离-高等学校-教材  

关键词： 工程菌   酯酶B1   纯化   固定化   农药  

摘要： 将抗性库蚊的解毒酶基因即酯酶B1 与含有强启动子PpsbA 的质粒pRL439 体外连接后,转化大肠杆菌DH5α,得到工程菌,该工程菌的表达产物酯酶B1 能高效降解有机磷、有机氯、氨基甲酸酯、菊酯等四大类农药。本研究将重组质粒pRL-B1 转入大肠杆菌DH5α,以5%的接种量转接到LB 液体培养基(含100μg/mL 氨苄青霉素)中,37℃,180rpm 震荡培养13h。5000rpm 离心收集菌体,超声波破碎工程菌,工程菌酯酶B1 降解酶经40%～80%的硫酸铵粗提,DEAE-Sepharose CL-6B 离子交换层析、Sephadex G-150 凝胶过滤,得到了分离纯化,SDS-PAGE 鉴定为单一组分。凝胶过滤法测得分子量为56KD,提纯倍数为33.3,收率为17.9%,比活力为74.7U/mg。该酶的最佳作用条件是37℃,pH=7.0,该酶作用于α-乙酸萘酯的Km 为1.35×10 mmol/L,Vmax 为2.7×104 U /mL。酶在pH6 范围内较稳定,金属Mg对该酶具有明显的促进作用,而SDS 对酶具有抑制作用,对有机磷农药对硫磷(1605)的降解率在90min 内达91.5%。 采用海藻酸钙将工程菌酯酶B1降解酶经40%～80%的硫酸铵沉淀后的粗提液进行固定化,并测定了固定化酶对其特异性底物α-乙酸萘酯的降解特性。酶的最佳固定化浓度为0.15g/L,最佳固定化时间为12h,固定化酶最佳反应pH 为7.0.5,最适温度为40℃, 固定化酶显示出很高的热稳定性和重复使用稳定性,在常温下其半衰期为12d,利用双倒数法确定固定化酶的Km 为1.8×10 mmol/L, Vmax 为1.45×10 U/g,固定化酶的Km 比液态酶(1.35×10 mmol/L)的大1.33 倍,Vmax 只有液态酶(2.7×10U/mL)的近一半。利用气相色谱测得其对对硫磷(1605)的降解率在30min 内达53.8%。

ISBN: (纸本)7502565396

关键词： 传质-化工过程-分离-化工过程  

摘要： 21世纪高等院校课程教材:本书主要介绍了混合材料的平衡关系和分离过程的传递机理，论述了物料通过单元设备的变化现象、变化规律、数学关系的建立以及单元设备的设计计算。具体内容包括传递现象简介、精馏、吸收、传质设备、萃取、干燥以及分离新技术。

ISBN: (纸本)7502562699

关键词： 成体干细胞   牙髓干细胞   组织工程   牙本质牙髓复合体   生长因子   支架材料  

摘要： 干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的未分化细胞,按来源分为胚胎干细胞和成体干细胞。成体干细胞因具有来源广泛、可塑性强、无排斥反应等优势成为近年来研究的热点之一。目前已经在机体几乎所有组织中发现了成体干细胞。这些成体干细胞的发现不仅为机体损伤修复机理研究提供了新的研究平台,而且将通过干细胞移植或构建人工组织或器官在人类多种疾病治疗史上产生划时代的影响。 牙髓干细胞属于成体干细胞,2000年由Gronthos首次提出。其主要特征之一是在一定条件下能形成牙本质牙髓样复合体,这将为其组织工程化研究提供理论依据和可靠的细胞来源。目前已有关于人、小鼠、大鼠、犬等牙髓干细胞培养成功的报道,但多仅限于对其生物学特性研究。最近虽有关于其表型、向成牙本质样细胞分化的研究,但尚处于起步阶段,缺乏对牙髓干细胞基础和应用方面较为全面而深入的研究。本研究在对人、大鼠牙髓干细胞培养、鉴定的基础上,进行了以其为种子细胞,构建组织工程化牙本质牙髓复合体的研究,并将其应用于大鼠牙齿部分去髓模型的修复再生治疗中,为牙本质牙髓复合体人工生物器官的构建和牙髓再生治疗进行了有益的探索,提供重要的理论和实验依据;并为牙本质形成机制和牙齿再生研究奠定了基础。 本研究的主要内容和结果如下:

关键词： 组织激肽释放酶   细胞培养   分离纯化  

摘要： 人组织激肽释放酶是一种丝氨酸蛋白酶。它在人体内重要的生理作用说明它有可能成为治疗肾脏病的有效药物。此外,它在血液中的含量与缺血性脑中风的相关性研究显示它可以作为该疾病体外诊断的重要指标。 本论文选用Sf-9及Hi-5两种昆虫细胞为载体,用基因工程的手段表达制备了人组织激肽释放酶原。对两种昆虫细胞的无血清适应及悬浮适应条件进行了系统研究,将基因工程人组织激肽释放酶原的表达量提高到25mg/L。对载有人组织激肽释放酶cDNA的CHO细胞进行了无血清悬浮适应。 采用色谱技术对细胞表达产物进行了分离纯化。探讨了不同流动相组成、pH值、离子强度以及分离介质的影响。分离纯化后的样品经检测为纯品,分子量约为40961Da,回收率约为57%。 对检测未知样本中组织激肽释放酶含量的ELISA方法进行了系统优化。开发了缺血性脑中风早期诊断试剂盒。考查了试剂盒的各种指标,并将其用于660例健康人及21例脑中风患者血液中组织激肽释放酶含量的检测。此外,与大连医科大学附属二院合作,用分离纯化后得到的人组织激肽释放酶原对糖尿病肾病大鼠进行了实验。结果显示,组织激肽释放酶对肾脏具有较好的保护作用。