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关键词： 分离技术   食品工程系   苹果浓缩汁   浓缩果汁   师范大学   高等师范院校   实验室  

关键词： 葡激酶   水蛭素   高密度发酵   分离纯化   二聚体   甘露醇   ELISA  

摘要： 目的：溶栓与抗凝药物联合疗法是当前血栓相关性疾病的重要临床治疗方案。重组SFH是葡激酶（SAK）和水蛭素（HV）通过一个Xa因子连接起来的融合蛋白，编码该融合蛋白的重组基因插入温控型表达载体pBV220，转化感受态大肠杆菌，筛选出大肠杆菌工程菌株用来大量生产SFH。通过体内和体外药效学试验证明，融合蛋白SFH有着良好的溶栓和抗凝双功能，出血倾向大为降低，且有一定的血栓靶向性，效果优于SAK和HV联合用药，因而有着广泛的应用前景。但是SFH大肠杆菌工程株在低密度发酵的情况下，目的蛋白产量不到100mg／L，不能满足临床溶栓治疗大量用药的要求，而成为推广应用的瓶颈。因而通过对大肠杆菌进行高密度发酵来提高单位体积的目的蛋白产率也就成为大规模生产融合蛋白SFH的当务之急。 发酵产物的分离纯化是一个药物蛋白生产中比较棘手的问题，由于每种蛋白的性质不一样，如等电点、分子量大小、疏水性、极性、亲和性等，所以相应的分离纯化工艺也就不一样，需要反复的实验与探索。 已知HV存在两个结构域：与凝血酶相互作用的C端结合结构域和N端的催化结构域。发色底物（S-2251）法实验说明融合蛋白SFH失去了抗凝活性，即在水蛭素N端连接的SAK封闭了HV的N端的催化结构域，但可能仍保留有C端的与凝血酶结合的结合结构域功能，这是融合蛋白血栓靶向功能的基础。 方法与结果：通过结合前人的研究经验，采用易于控制的溶氧反馈的分批补料的培养方法高密度发酵重组大肠杆菌BL21（DE3）生产SFH融合蛋白。通过摇瓶培养对菌种和pH的筛选，采用溶氧反馈的流加补料策略，进行了5L发酵罐的合成培养基和复合培养基的发酵工艺的研究。通过对培养条件的不断优化，重组葡激酶-水蛭素融合蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）里得到了高效表达，菌体密度最终达到80OD600左右，菌体湿重达到115g／L以上，可溶性重组融合蛋白占菌体总蛋白的30％以上，含量约为1.2～1.3g／L，较优化前的目的蛋白表达量提高了10倍以上。5L发酵罐的发酵工艺参数在40L发酵罐中进行了放大培养，结果表明该工艺能有效的放大，可适用于工业生产。 本试验中通过对发酵后菌体的反复冻融提取目的蛋白，经多次实验后，选择采用离子交换和凝胶过滤层析对融合蛋白进行了分离纯化，纯化后回收的目的蛋白占总蛋

关键词： 生物脱硫   二苯并噻吩   脱硫基因   LY822   GFP  

摘要： 专一性微生物脱硫技术能选择地性脱除加氢脱硫技术难以脱除的芳香族含硫化合物，是实现石油及其产品深度脱硫有效的技术之一。分离筛选优良的菌株，构建高效的脱硫工程菌是提高微生物脱硫能力的重要途径。本文以此为研究目标，开展了专一性脱硫菌株的分离鉴定、脱硫基因克隆、启动子功能鉴定、表达载体和工程菌的构建以及脱硫活性评估等方面的研究。 采用以二苯并噻吩(DBT)为唯一硫源的培养基，经驯化培养，从我国山东胜利油田土样中分离到一株专一性脱硫菌株LY822。对该菌培养五天后的代谢产物高效液相色谱(HPLC)分析的结果表明，0.5mmol／L的DBT完全转化为2-羟基联苯(2-HBP)，证明该菌株是“4S途径”的专一性脱硫菌。菌株形态特征及16SrDNA序列分析表明，该菌属于红球菌属进化分枝，与红平红球菌Rhodococcus erythropolis同源性最高，达到99.7％，故将该菌初步鉴定为Rhodococcus ***822。 以LY822菌的质粒DNA为模板，PCR反应扩增了三个脱硫结构基因片段dszA、dszB和dszC，大小分别为1.3kb、1.0kb和1.2kb。利用表达质粒pET21a分别克隆了三个脱硫基因，并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，全细胞蛋白电泳分析发现有相应的清晰融合蛋白条带产生。 以带有报告基因gfp的质粒pEGH和大肠杆菌-红球菌穿梭载体pBS305为出发质粒，构建了三个带有不同启动子的表达质粒pBSGt、pBSGd和pBSGk，电击转化红平红球菌LY822。激光共聚焦显微镜检测结果表明，当gfp基因受tsr(硫链丝菌肽抗性基因)启动子调控时，gfp基因的表达效率最高，而且不再受硫酸盐的抑制。 以红平红球菌LY822的质粒为模板，扩增了脱硫基因的全片段，连接于经HindⅢ-Xbal酶切的pBSGd，pBSGk，pBSGt，得到带有脱硫基因的表达载体pBSDd、pBSDt和pBSDk。分别电击转化LY822菌和吖啶橙消除质粒的LY-0菌，脱硫活性测定结果表明，tsr启动子调控的工程菌株LYDt，脱硫能力提高最显著，即使在有硫酸盐存在的条件下，脱硫活性也不受抑制。这与用报告基因得到的研究结果一致。 在实际体系柴油(硫含量497ppm)的脱硫结果表明，带有pBSGt质粒的重组菌LYDt反应4小时的脱硫率达到82％以上，高于原始菌株的61％。

关键词： 超临界流体萃取   在线检测   联用  

摘要： 综述了超临界CO2流体萃取中的在线检测技术，介绍了超临界CO2流体萃取与超临界流体色谱、气相色谱、高效液相色谱、核磁共振、近红外光谱等技术的联用在线检测，阐述了在线检测技术的优越性，提出了如何发展超临界CO2流体萃取中的在线检测技术．[第一段]

关键词： 股份有限公司   科技   四川   西南化工研究设计院   气体分离技术   变压吸附   分离工程   上市公司   技术开发   工程设计  

摘要： 四川天一科技股份有限公司（天科股份，股票代码600378）是由西南化工研究设计院控股的上市公司。公司下属的变压吸附分离工程研究所是专业从事变压吸附（简称PSA）气体分离技术的研究、工程技术开发、工程设计、工程承包的机构。

关键词： 分离纯化方法   分离模式   基因工程   酶原   组织   规模化生产   疏水作用色谱   离子交换   排阻色谱   初分离  

摘要： 发展了一种基因工程人组织激肽释放酶原的分离纯化方法,首先对样品采用离子交换的分离模式进行初分离,进一步通过疏水作用色谱和体积排阻色谱进行纯化。新发展的方法样品的回收率超过50%,而且产品的纯度高,生产成本低,非常适宜于在规模化生产中应用。

关键词： 分离工程   再生铅   可持续发展道路   金   循环经济   试点单位   国务院  

摘要： 近日，豫光金铅10万吨再生铅分离工程正式奠基，标志着豫光金铅在被国务院定为国家循环经济试点单位后，在发展循环经济、走可持续发展道路上又迈出了可喜的一步。

关键词： 离子液体   复分解反应   电化学   化学分离   室温离子液体   溶剂   物化性能   有机阴离子   有机阳离子   合成方法   化学反应   分离工程   电化学  

摘要： 室温离子液体是由有机阳离子和无机或有机阴离子构成的、在室温或室温附近温度下呈液体状态的盐类。本文综述了离子液体的4种合成方法,重点介绍了离子液体的物化性能及影响物化性能的因素,同时还对离子液体作为绿色高效溶剂在化学反应、电化学及分离工程中的应用进行了简要介绍。

关键词： 空射反舰导弹   涡   格法   裁机分离  

摘要： 反舰导弹载机分离特性研究是论证和鉴定母机投放安全性和导弹可靠性的必要环节。采用涡格法等一系列理论,建立了载机流场计算模型,讨论了自由投放条件下反舰导弹离机状态特性,结果显示载机翼下流场对导弹气动干扰较大,应该使导弹尽快脱离干扰区域,故而建议采用弹射发射的方式。

关键词： 生物医学工程   微球体   生物相容性材料  

摘要： 背景:生物相容性是药物缓释系统的一个关键指标,除了材料本身具有生物相容性以外,微球的球形度和表面光洁度对生物相容性也有很大影响。目的:获得球形度较高且表面光滑的聚乳酸乙醇酸共聚物微球,提高微球的生物相容性。设计:开放性实验。单位:暨南大学生物材料研究室。材料:实验于2004-06/2005-01在暨南大学生物材料研究室完成。材料有聚乳酸乙醇酸共聚物,溶菌酶,聚乙烯醇,其他试剂均为分析纯。仪器:匀浆机,超声波清洗仪,机械搅拌机,扫描电镜,原子力显微镜。方法:①微球制备:采用双乳液法制备聚乳酸乙醇酸共聚物微球,溶菌酶为模型蛋白药物。采用3种分离方法(直接冷冻干燥法、过滤法、离心法)收集产品,洗涤,真空冷冻干燥。②扫描电镜观察:观察3种分离方法对微球形态的影响。所有的样品都经过镀铜台以及喷金处理,然后再进行电镜观察。③原子力显微镜观察:通过原子力显微镜对微球的表面形态结构进行分析。结果:①扫描电镜观察结果:与直接冷冻干燥法和过滤法相比,离心处理的方法对获取球形度较高且表面光滑的聚乳酸乙醇酸共聚物微球更为有效,而超声分散对微球的形态结构造成影响。②原子力显微镜观察结果:表明微粒表面光滑平整,平均粗糙度为48.55nm。结论:通过观察不同的下游处理过程对微球分离制备的影响,能够获得球形度高且表面光滑的产品。此外,根据实验过程中微粒的形成与支架的构建同步这一结果,提出了一步法这一新方法用于构建与微粒结合有关的组织工程支架材料。