关键词:
微流控芯片
病毒检测
自动控制
荧光检测
电化学检测
摘要:
流感病毒每次爆发严重,都会引起高感染率和高死亡率,对人们生活以及社会经济造成毁灭性的打击。流感病毒亚型众多,其作为RNA分节段病毒,不同毒株间基因重组率非常高,具有极高的变异率,病毒类型的精确检测存在着很大的难度。流感病毒分型的主要依据是病毒的两种表面糖蛋白,即血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。基于这两种抗原的区别,甲型流感病毒亚型最多,对人类危害最大,其亚型可以分为16种H亚型和9种N亚型。本文研究对象主要针对甲型流感病毒亚型的HA进行检测分选,本课题设计了一种自动进样平台用于多种试剂的进样,以及针对病毒HA蛋白设计了两种微流控芯片,研究不同的病毒检测方式,为流感病毒的早期诊断提供了两种可行的检测途径,同时,检测平台高度集成化和自动化的操作,可以为检测人员的安全提供非常不错的保障。自动进样装置中设计了一种阀控微流控芯片,用于控制多路试剂的流通,通过Labview编写的上位机控制程序,控制阀控芯片中微阀的关闭和液体流通速度,从而实现多种试剂的自动进样。对于病毒HA的两种检测芯片设计,首先,在第一种检测方式中,结合了多个物理场,开发了一种磁性和尺寸介导的微流控芯片,使用大小不同的磁性微球作为多种流感病毒的捕获载体,用于磁性分离和尺寸分选,在检测实验中,采用H7N9 HA和H9N2 HA作为检测对象同时进行检测,采用量子点作为检测探针,通过量子点的荧光强度间接测定病毒类型和浓度,实验结果表现出良好的检测性能和高灵敏度,以及优异的特异性和良好的重现性,表明了这种检测方式可以应用于多种流感病毒的检测。其次,在第二种检测方式中,开发了一种基于电化学中三电极体系的微流控芯片,采用金作为电极材料,采用催化剂HRP(辣根过氧化物酶)作为检测探针,可以促进HQ(对苯二酚)和BQ(对苯醌)之间形成可逆的氧化还原反应,转化的BQ在电极的作用下再次转化为HQ时会产生还原电流,使用差分脉冲伏安法(DPV)检测电流变化,通过实验对H7N9HA病毒进行检测,最终结果表现出这种检测方式同样具有可行性。这两种检测方式,将电子技术与微流控芯片技术结合,充分发挥各自的优点,为早期高效检测多种流感亚型提供了新思路和新途径,在实际应用中,可以降低检测人员的操作难度和感染风险,在低浓度病毒检测中也具有巨大的应用潜力。