关键词:
射频电磁场
氯化镉
人绒毛膜癌细胞
蛋白组学
代谢组学
摘要:
研究背景及目的射频电磁场(Radiofrequency electromagnetic fields,RF-EMF)是频率为 100 kHz-300GHz的电磁场,主要由基站、无线通讯装置、移动电话等产生。环境中射频电磁场暴露的生物学效应通常是低剂量长期暴露造成的慢性健康效应,而在长期电磁场暴露过程中往往会存在其他物理因素或化学因素的复合暴露。因此,开展电磁场与低剂量化学物复合暴露有助于进一步探索环境电磁场暴露生物学效应及机制。研究方法本学位论文拟采用来源于同一系统的不同细胞系JAR和JEG-3为研究模型,利用基于质谱的蛋白组学和代谢组学研究技术,分析1800MHz射频电磁场与低剂量镉单独或复合暴露对JAR和JEG-3细胞蛋白质表达谱与代谢图谱的影响,筛选差异表达的蛋白质和代谢物并进行验证,以阐释JAR和JEG-3细胞差异性响应1800 MHz射频电磁场和镉的机制。研究结果一、射频电磁场和低剂量镉对细胞蛋白质表达谱的影响本研究采用液质联用技术,分析了射频电磁场和低剂量镉单独或复合暴露对JAR和JEG-3细胞蛋白质表达谱的影响,以差异表达量变化超过1.2倍为标准,筛选差异表达蛋白质。1.射频电磁场和低剂量镉暴露对JAR细胞蛋白质表达谱的影响JAR细胞单独或复合暴露于4.0 W/kg的1800 MHz射频电磁场和2.5 μM镉6小时后,与假暴露组相比,射频电磁场单独暴露组筛选到29个差异表达的蛋白质,主要参与信号转导、翻译后修饰等;镉单独暴露组筛选到59个差异表达的蛋白质,主要参与核糖体结构和生物发生、翻译后修饰等;复合暴露组筛选到33个差异表达的蛋白质,主要参与DNA复制、重组和修复、信号转导等。与镉单独暴露组相比,复合暴露组筛选到35个差异表达的蛋白质,主要参与碳水化合物代谢、信号转导以及蛋白翻译等生物学过程。2.射频电磁场和低剂量镉暴露对JEG-3细胞蛋白质表达谱的影响JEG-3细胞单独或复合暴露于4.0 W/kg的1800 MHz射频电磁场和5.0 μM镉6小时后,与假暴露组相比,射频电磁场单独暴露组筛选到77个差异表达的蛋白质,主要参与翻译后修饰、蛋白转运等;镉单独暴露组筛选到36个差异表达的蛋白质,主要参与翻译后修饰、蛋白转运、RNA加工与修饰等;复合暴露组筛选到50个差异表达的蛋白质,主要参与翻译后修饰、蛋白转运、细胞周期调控等。与镉单独暴露组相比,复合暴露组筛选到9个差异表达的蛋白质,主要参与信号转导、RNA加工与修饰等生物学过程。***和JEG-3细胞差异性响应射频电磁场和低剂量镉暴露的蛋白质基于以上JAR细胞和JEG-3细胞蛋白质表达谱的数据结果,本研究进一步分析了差异表达的蛋白在JAR细胞和JEG-3细胞响的异同。结果显示,与假暴露组相比,射频电磁场单独暴露JAR和JEG-3细胞均引起BASP1蛋白表达下调;镉单独暴露时,SRXN1蛋白、金属硫蛋白MT2A和MT1X在两种细胞中表达一致性上调,而ZMYM2蛋白、HSP90AA4蛋白和MZT1蛋白表达一致性下调;射频电磁场与镉复合暴露时,SRXN1蛋白、TCEAL9蛋白、金属硫蛋白MT2A、MT1X和MT1F以及锌转运蛋白SLC30A1在两种细胞中均表达上调。与镉单独暴露相比,复合暴露可引起JAR细胞ATP5IF1蛋白表达上调,但诱导JEG-3细胞ATP5IF1蛋白表达下调,提示ATP5IF1在两种细胞响应复合暴露时存在差异性。同时,本研究采用Western Blot方法,分析了射频电磁场和低剂量镉单独或复合暴露对JAR细胞差异表达蛋白MT2A以及对JEG-3细胞差异表达蛋白Cyclin D3、TM2D3的表达水平影响,实验结果和定量蛋白质组学分析结果一致。二、射频电磁场和低剂量镉对细胞代谢图谱的影响本研究采用液质联用技术,分析了射频电磁场和低剂量镉单独或复合暴露对JAR和JEG-3细胞代谢图谱的影响,以差异表达量变化超过2倍为标准,筛选差异表达代谢物。1.射频电磁场和低剂量镉暴露对JAR细胞代谢图谱的影响JAR细胞单独或复合暴露于4.0 W/kg的1800 MHz射频电磁场和2.5 μM镉6小时后,与假暴露组相比,射频电磁场单独暴露组筛选到213个差异表达的代谢物,主要富集在泛醌和其他萜类-醌的生物合成以及氯烷烃和氯烯烃的降解通路等;镉单独暴露组筛选到194个差异表达的代谢物,主要富集在苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成通路等;复合暴露组筛选到200个差异表达的代谢物,主要富集在嘌呤代谢以及不饱和脂肪酸的生物合成通路等。与镉单独暴露相比,复合暴露筛选到216个差异表达的代谢物,主要富集在代谢途径、异喹啉生物碱生物合成通路等。2.射频电磁场和低剂量镉暴露对JEG-3细胞代谢图谱的影响JEG-3细胞单独或复合暴露于4.0 W/kg的1800 MHz射频电磁场和