关键词:
脉冲电磁场
骨质疏松
骨髓间充质干细胞
自噬
摘要:
目的:研究脉冲电磁场对去卵巢大鼠骨质疏松及骨髓间充质干细胞自噬的影响。方法:24只三月龄体质量为250g~300g的雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、去卵巢骨质疏松模型组(OVX组)、去卵巢骨质疏松模型+脉冲电磁场组(PEMF组),每组8只。OVX组和PEMF组均通过切除双侧卵巢构建骨质疏松动物模型,Sham组则切除双侧卵巢旁等体积的脂肪组织。PEMF组大鼠置于脉冲电磁场线圈中心区域干预,干预参数为频率8Hz,强度3.82 m T,每次干预40分钟,一天1次,一周5天,干预疗程共12周。Sham组和OVX组大鼠以同样方式放置在线圈中心区域,但不开启仪器,放置时间、次数同PEMF组。待干预结束后完成各组实验大鼠取材,使用ELISA法检测各组大鼠血清中E2、BALP水平,对各组左胫骨行HE染色,对右胫骨行Micro-CT骨扫描及骨微结构定量分析,对左股骨及第5腰椎行骨密度检测,对右股骨骨髓间充质干细胞采用RT-PCR检测Beclin 1、LC3B、P62、Runx-2的m RNA水平,采用Western blot检测Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、Runx-2的蛋白表达水平。结果:1.血清学分析:与Sham组对比,OVX组的E2和BALP水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.001);与OVX组对比,PEMF组的E2和BALP水平升高,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.001)。2.病理切片:Sham组骨小梁结构完整,相互连接成网状;与Sham组对比,OVX组骨小梁数目明显减少,骨小梁稀疏断裂;与OVX组对比,PEMF组骨小梁数目增多,骨小梁排列较规则并相互连接成网状。3.骨密度:与Sham组对比,OVX组左股骨及第5腰椎的骨密度均显著下降,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01);与OVX组对比,PEMF组左股骨和第5腰椎的骨密度均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。4.骨微结构定量分析:与Sham组对比,OVX组的Tb.N、BV/TV均明显减少,***显著增加,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.001),而***虽减少,但差异无统计学意义(P>0.05);与OVX组对比,PEMF组的Tb.N和BV/TV增加,***下降,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05),而***虽增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。***水平:与Sham组对比,OVX组的Beclin 1、LC3B、P62的m RNA水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001,P<0.001),Runx-2的m RNA水平下降,差异有统计学意义(P<0.001);PEMF组的Beclin 1、LC3B、P62的m RNA水平较OVX组显著降低,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001,P<0.01),Runx-2的m RNA水平则升高,差异有统计学意义(P<0.001)。6.蛋白表达水平:OVX组的Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ和P62的蛋白表达水平明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.01,P<0.001),Runx-2蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.001);与OVX组对比,PEMF组中的Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ和P62的蛋白表达水平显著下降,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05,P<0.01),Runx-2的蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脉冲电磁场可能通过抑制骨髓间充质干细胞自噬的机制,促进骨形成,发挥抗骨质疏松的作用。