关键词:
膝骨关节炎
脉冲电磁场
自噬
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
摘要:
目的:观察脉冲电磁场对膝骨关节炎大鼠软骨的影响,研究脉冲电磁场对软骨自噬、血清炎症及m TOR信号通路的作用。方法:1.24只300g左右的雄性SD大鼠随机分为三组,对照组(Control组),骨关节炎组(OA组)、骨关节炎+脉冲电磁场治疗组(PEMF组),每组各8只。对OA组及PEMF组大鼠进行前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transection,ACLT)模拟创伤性膝骨关节炎;***术后8周,将PEMF组的大鼠放置于脉冲电磁场中干预,设置频率、强度分别为8Hz,3.82m T,干预40分钟/天,5天/周,共8周。OA组和Control组的大鼠也放置于脉冲电磁场中,但不接通电源。3.连续干预8周后,三组大鼠取材,血清做ELISA检测炎性指标;右侧股骨软骨提取RNA做PCR检测m TOR、Beclin1、MMP13、ADAMTS5、Aggrecan、COL2A1、SOX9、LC3B基因的表达;右胫骨做免疫组织化学检测ADAMTS5、SOX9、COL2A1、Beclin1、P62蛋白的表达;左侧股骨做HE及番红固绿染色及OARSI评分。结果:1.血清学分析:ELISA显示,与Control组相比,OA组IL-1β表达增高,差异具有统计学意义(P<0.01);与Control组相比,OA组IL-10表达降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。***分析:与Control组相比,OA组的ADAMTS5及MMP13表达上调,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与OA组相比,PEMF组的ADAMTS5表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);与Control组相比,OA及PEMF组Aggrecan显著下调,且差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与Control组相比较,COL2A1在OA组中表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与Control组相比,Beclin1在OA组表达中增多,差异具有统计学意义(P<0.01);与Control组相比,m TOR在OA组中表达降低,具有统计学意义(P<0.05)。3.病理切片染色及评分:在光学显微镜下,Control组的大鼠股骨软骨大部分表层完整,少部分软骨局部浅层软骨番红失染,潮线完整,软骨细胞排列较紊乱。OA组的大鼠软骨破坏到中层,潮线不完整。局部可见新的胶原形成,软骨细胞死亡,中层软骨区域有骨赘形成。PEMF组的大鼠股骨软骨破坏较OA组减轻,未见明显骨赘形成,软骨表层有破坏,软骨边缘基本完整,染色清晰。软骨细胞有增生,但排列无明显紊乱。OA组的OARSI评分比Control组明显增高,且差异具有统计学意义(P<0.05),PEMF组OARSI评分显著下降,与Control组相比较差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。***切片:与Control组相比,OA组ADAMTS5表达增高,差异不具有统计学意义(P>0.05),与OA组相比,PEMF组ADAMTS5表达下降,差异具有统计学意义(P<0.05);与OA组相比,PEMF组SOX9表达增高,且差异具有统计学意义(P<0.05);OA组的大鼠COL2A1表达较Control组降低,差异具有统计学意义(P<0.05);OA组的大鼠Beclin1表达较Control组降低,且差异具有统计学意义(P<0.05),PEMF组Beclin1值较OA组增高,差异不具有统计学意义(P>0.05);与OA组相比,Control及PEMF组P62表达下降,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:脉冲电磁场可能通过调节m TOR信号通路表达调节软骨自噬及血清炎症水平,抑制软骨退变,延缓大鼠的膝骨关节炎进展。