关键词:
eIF4A2
结直肠癌
肿瘤侵袭
凋亡
肿瘤分化程度
摘要:
目的:RNA结合蛋白eIF4A2在结直肠癌的发生、发展过程中具有重要意义。本研究通过测定eIF4A2在结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)患者组织和细胞系中的表达情况,探究其与临床病理特征及患者生存预后的相关性。同时,转染si RNA敲低eIF4A2的表达水平,系统评估其对CRC细胞增殖能力、侵袭特性及凋亡过程的调控作用,为结直肠癌患者精准化治疗以及精准及个体化治疗提供理论依据。
方法:1.通过TCGA数据库获取结直肠癌患者的转录组测序数据及其对应的临床信息,采用Kaplan-Meier生存分析法构建生存曲线,探究其癌和癌旁表达差异,研究eIF4A2在结直肠癌中的表达水平与临床特征及患者预后的相关性。2.收集2019年6月至2021年1月宁夏医科大学总医院经病理确诊并行手术治疗的结直肠癌组织标本,采用免疫组织化学技术(IHC)检测,进一步验证eIF4A2的蛋白表达水平,并探讨其与患者临床病理特征及预后的相关性。3.在细胞水平,分别培养正常结肠上皮细胞系(NCM460)及结直肠癌细胞系(HCT116、SW620、SW480)作为研究对象,通过蛋白质印迹分析(Western Blot,WB)测定各细胞系中eIF4A2的蛋白表达情况。*** RNA转染下调结直肠癌细胞中eIF4A2的表达,分别采用q RT-PCR和WB验证基因敲除效果,建立eIF4A2低表达的细胞模型。通过CCK8细胞增殖实验、Transwell细胞侵袭实验以及流式细胞术检测细胞凋亡实验,系统评估eIF4A2表达下调对结直肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡过程的调控作用。
结果:
1.对TCGA测序数据库的生物信息学分析分析结果表明,eIF4A2在结直肠癌中的表达水平与不良预后存在显著关联,同时该基因在肿瘤组织中的表达显著高于邻近正常组织。2.对宁夏医科大学总医院结直肠外科60例患者的免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测并统计分析,结果提示eIF4A2在结直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001),eIF4A2表达水平与患者生存状态及分化程度有显著相关性,eIF4A2表达水平越高,分化程度越低,生存率越低。3.K-M曲线进一步证实其表达与预后存在关联,COX多因素回归分析揭示,eIF4A2是结肠患者预后的影响因素(P<0.05),但并非独立危险素(P>0.05),eIF4A2蛋白表达水平越高,预后越差。4.细胞WB实验结果显示,eIF4A2蛋白在结肠癌细胞系HCT116(P<0.01)、SW620(P<0.01)和SW480(P<0.001)中的表达显著高于正常结肠上皮细胞系NCM460。5.通过si RNA转染技术成功构建eIF4A2敲低细胞株,实验发现敲低eIF4A2后,HCT116细胞的增殖和侵袭能力较对照组显著下降(P<0.05)。
结论eIF4A2蛋白在结直肠癌中高表达,eIF4A2表达水平与结直肠癌患者生存状态和分化程度有关,eIF4A2表达是结直肠癌患者预后的影响因素,但并非独立影响因素,eIF4A2在结直肠癌的增殖、侵袭中起促进作用。