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关键词： 肝细胞癌   淋巴结转移   分子病理学   危险因素  

摘要： 目的近年来,随着局部和系统抗肿瘤治疗手段的日益进步,肝细胞癌的总体预后不断改善,但伴有淋巴结转移的肝细胞癌,CNLC分期为晚期IIIb期,临床较为少见,术前诊断困难,且其治疗方式及预后尚存争议。本研究回顾就诊于我院并行根治性手术伴肝门淋巴结清扫术,术后经病理证实为淋巴结转移/非转移患者的相关资料,分析发生淋巴结转移的危险因素,并初步探讨淋巴结转移与肝细胞癌的预后关系。同时对部分患者进行基因测序,以期找到可能的致病突变。方法本研究选取2015年12月至2020年12月就诊于我院并行根治性肝癌切除术联合肝门淋巴结清扫术患者共126例,排除临床资料不完整、行肝移植术、既往或同时合并其他恶性肿瘤患者41人,最后纳入85例HCC患者,根据病理证实是否发生淋巴结转移分为病例组(35例)与对照组(50例),并选取7例非转移患者及10例转移患者的肿瘤组织切片进行基因检测,同时对所有入组患者进行随访。收集并整合所有患者的临床资料,将相关资料纳入Logistic回归分析中,分别进行单、多因素分析,探讨HCC淋巴结转移的相关危险因素。同时利用Kaplan-Meier生存分析判断淋巴结转移对HCC患者预后的影响,从而进一步指导临床工作。结果(1).85例HCC患者中,男性76例,女性9例,平均年龄56.5岁。通过与对照组比较分析,病例组CEA、CA199水平显著升高,嗜酸性粒细胞绝对值降低,肿瘤无包膜数更多,BCLC分期更差,差异具有统计学意义。(2).两组患者免疫组化指标比较,病例组CD10阳性表达率、β-catenin阴性表达率更高,差异具有统计学意义。(3).Logistic回归单因素、多因素分析显示,术前CA199>40 U/m L、肿瘤无包膜、CD10阳性表达、β-catenin阴性表达是影响HCC淋巴结转移的独立危险因素(β=2.030,-1.674,1.809,-1.425;P<0.05)。(4).本研究共发现四个具有明显差异的突变基因,分别为RB1、TP53、TERT、TSC2,可能与肝细胞癌淋巴结转移的发生相关。病例组RB1突变病例数为1例,平均突变丰度为6.06%,对照组突变病例数为2例,平均突变丰度为4.17%;对照组TP53突变病例数为5例,平均突变丰度为38.93%,病例组突变病例数为6例,平均突变丰度为28.03%;病例组TERT突变例数为1例,平均突变丰度为26.52%,对照组突变病例数为1例,平均突变丰度为43.43%;对照组TSC2突变例数为3例,平均突变丰度为28.48%,病例组突变病例数为1例,平均突变丰度为7.03%。(5).HCC伴淋巴结转移的1、3、5年无复发生存率分别为22%、9.8%、0%,无淋巴结转移患者1、3、5年无复发生存率分别为60%、48%、42.7%,病例组的中位无复发生存时间为6个月,较对照组的18.2个月明显缩短(P<0.05),差异具有统计学意义。HCC伴淋巴结转移患者的1、3、5年总生存率分别为70.8%、22.2%、11.1%,无淋巴结转移患者的1、3、5年总生存率分别为84%、62.3%、46.5%,病例组的中位总生存时间为24.1个月,较对照组的54.7个月明显缩短(P<0.05),差异具有统计学意义。结论(1).术前CA199>40U/m L、肿瘤无包膜、CD10阳性表达、β-catenin阴性表达是影响HCC淋巴结转移的相关独立危险因素。(2).RB1、TP53、TERT、TSC2基因突变可能与HCC发生淋巴结转移有关。(3).伴有淋巴结转移的HCC患者的术后无复发生存期及总生存期较HCC不伴淋巴结转移患者明显缩短,故淋巴结转移是影响患者总体预后的危险因素。

关键词： 3.0T磁共振成像   直肠癌   T分期   术前评估   病理  

摘要： 背景:直肠疾病可能是肠道系统最著名的危险生长物,也是疾病患者死亡的正常原因之一。在开始阶段,直肠恶性生长的患者经常没有不可否认的副作用或轻微的副作用,这是不难被忽视的。然而,当患者出现副作用时,疾病已发展到中晚期,给患者带来不幸的治疗影响和不幸的预测。对于直肠疾病患者,立体定向放射治疗、新辅助治疗、原子能指定治疗、细心切除是正常的治疗策略,而患者又特别担心在手术过程中伤势是否完全取出,是否挽救了追尾,如此精确的增长安排。治疗策略的选择和对患者猜测的评估非常重要,它决定了患者在医疗过程后的个人满意度。有吸引力的混响成像(MRI)常规评估对于直肠疾病的分析、术前安排和可视化感知具有难以置信的重要性。协助临床医生选择适当的谨慎方法。目的;探讨MRI在直肠疾病术前组织中的价值及其与神经症发现的一致性。方法:选取2018年1月至2020年1月在大理大学第一附属医院就诊的符合考虑模型的80例直肠疾病患者进行复查调查。所有患者都通过了3.0 T MRI并进行了表面循环成像。低堆积饮食(评估前2天),禁食时间>6小时(评估到达时),尽可能多地消耗消化物,以降低胃肠道的阻抗;评估前不使用蠕动抑制药物或消化差异专家。每位患者在活动前进行MRI总结,活动后进行强迫性分析,记录重要信息。最后,打破了TN排列、生长下缘到臀部中心缘的分离以及与所有患者术后神经质结论的一致性。使用SPSS 22.0事实编程来检查信息,估计信息以平均值±标准差(x±S)的形式传达。使用匹配示例t检验进行成对相关;MRI和病理学上T组织与肠旁淋巴中枢转移的一致性采用Kappa检验,Kappa>0.7认为是固体一致性;P<0.05显示出真正的巨大差异。结果;MRI分析T1期11例、T2期24例、T3期34例、T4a期16例、T4b期3例;病理分析T1期13例、T2期26例、T3期30例、T4a期18例、T4b期3例。3例MRI T1、T2、T3、T4a、T4b的症状反应性和特异性分别为69.2%和97.0%、75.0%和89.3%、87.1%和86.0%、77.8%和96.8%、100%和100%,个别。100%,两者的一致性很好(Kappa=0.713,P<0.05)。X线片显示肠旁淋巴中枢转移38例,术后神经症结果显示肠旁淋巴中枢转移33例。MRI诊断肠旁淋巴中枢转移的反应性和特异性分别为86.3%和84.5%(Kappa=0.711,P<0.05)。12例进行了臀部中心切除的患者中,MRI估计的癌下缘与臀部中心边缘的距离与术后大体样例的对比度≤7mm,重要的是不是很大(P>0.05)。结论3.0 T MRI可以在直肠恶性生长之前精确安排治疗,对临床治疗具有明显的指导意义。

关键词： 癌,导管,乳腺   乳腺X线摄影   钙化   组织病理学   生物学标记  

摘要： 目的:通过分析乳腺导管原位癌（ductal carcinoma in situ,DCIS）乳腺X线摄影钙化的影像学特征,探索其与临床、组织病理学、分子生物学的关系,进而从影像学角度评估DCIS的生物学行为,并在一定程度上指导临床治疗方案的选择。方法:回顾性分析从2017年1月至2021年1月在绵阳市中心医院经手术及病理证实为DCIS的182例女性患者,收集乳腺X线摄影及病理资料。术后标本行免疫组织化学分析测定雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,PR）、人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）、Ki-67表达情况及组织学分级,组织学分级分为高级别组和非高级别组,术前乳腺X线摄影中根据是否为钙化性病变分为钙化DCIS和非钙化DCIS,对DCIS的乳腺X线摄影表现和病理学特征进行统计学分析,分类变量比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。连续变量比较采用t检验或Mann-Whitney U检验。以α=0.05为检验水准,P<0.05差异有统计学意义。结果:（1）ER阴性（P=0.002）、PR阴性（P<0.001）、Her-2阳性（P=0.035）、Ki-67高表达（P=0.013）、高级别核级（P<0.001）、粉刺样坏死（P<0.001）、全乳切除术（P=0.002）更常见于钙化性DCIS,与非钙化DCIS相比,差异具有统计学意义。（2）钙化形态与DCIS组织学分级（P=0.016）、Her-2表达情况（P=0.002）有相关性,高级别DCIS以线样或线样分支样钙化（32.5%）最常见,Her-2阳性以线样或线样分支状钙化（41.2%）最常见;钙化形态与ER、PR、Ki-67表达情况均无相关性（P值均>0.05）。（3）钙化分布与Her-2表达情况有相关性（P=0.002）,Her-2阳性以钙化呈集群分布（31.4%）最常见;钙化分布与DCIS组织学分级、ER、PR、Ki-67表达情况均无相关性（P值均>0.05）。（4）乳腺腺体分类、钙化数量与DCIS组织学分级、ER、PR、Her-2、Ki-67表达情况均无相关性（P值均>0.05）。（5）ER阴性（P<0.001）、PR阴性（P<0.001）、Her-2阳性（P<0.001）、Ki-67高表达（P=0.026）更常见于粉刺样坏死,与非粉刺样坏死相比,差异具有统计学意义。结论:DCIS的乳腺X线摄影表现钙化征象与病理学特征之间存在相关性,可以初步预测组织学分级、分子生物学标志物表达情况,评估DCIS侵袭性潜能,有望为临床制定个体化治疗方案提供参考。

关键词： 宫颈癌   基底样   腺样分化   ACC   ABC   HPV   MYB基因  

摘要： 研究目的具有基底样特征和腺样分化的宫颈癌形态学表现具有独特性,腺样基底细胞癌(adenoid basal carcinoma,ABC)和腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)在形态学上具有此特点。宫颈ABC预后相对较好,被认为是人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)相关性的低级别恶性肿瘤;ACC侵袭性强,预后相对较差,且有文献认为宫颈ACC不是真正的ACC,只是模仿涎腺ACC的形态学表现。本文将对ABC与ACC的临床病理学特征,ACC中MYB基因断裂重排、HPV检测结果进行分析和探讨,提高病理医生对具有基底样特征和腺样分化的宫颈癌的认识。材料与方法收集吉林大学第二医院病理科2009年1月-2021年1月宫颈癌4370例,记录不同组织类型的病例数,选取其中具有基底样特征和腺样分化特点的宫颈癌(22例ABC和5例ACC),通过病历系统查询27例患者的临床病理学资料,并进行随访,回顾分析ABC与ACC的形态学特点、免疫组化染色结果、MYB基因断裂重排及HPV DNA检测结果。结果1.宫颈ABC、宫颈ACC占比分析:在4370例宫颈癌中,具有基底样特征和腺样分化的宫颈癌共27例,包括22例ABC和5例ACC,所占比例分别为0.50%和0.11%;其中4117例为HPV相关性宫颈癌,宫颈ABC和ACC分别占HPV相关性宫颈癌的0.53%和0.12%。2.宫颈ABC临床病理学特点:本研究中有22例宫颈ABC,年龄为45-75岁,平均年龄为63岁;临床症状为10例阴道流血,3例阴道流液,9例体检发现;宫颈大体检查,68%(15/22)ABC未见肿物。组织学上4例ABC伴鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC);18例ABC伴高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)/宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)3级:其中11例同时伴SCC,1例同时伴绒毛-管状腺癌,6例仅伴HSIL/CIN3级。FIGO分期上,64%(14/22)ABC为IA期,23%(5/22)ABC为IB1期,13%(3/22)ABC为IIA1期;治疗方式上,50%(11/22)ABC仅手术治疗;21例ABC随访时间5-124个月,中位随访时间35个月,IB1期最长随访时间110个月,IIA1期最长随访时间124个月,均未见复发及转移。免疫组化上,10例ABC的p16均呈弥漫阳性,10例ABC的CD117、S-100、Cg A、Syn、CD56均呈阴性。3.宫颈ACC临床病理学特点及分子特点:5例宫颈ACC年龄为41-72岁,平均年龄为64岁。临床症状为2例绝经后阴道流血,1例月经期延长,2例体检发现。组织学上2例为单纯性ACC,3例为混合性病变。1例FIGO IB期ACC伴HSIL/CIN3级手术+放疗,43个月无复发及转移;2例FIGO IIA期手术+放化疗:其中1例ACC伴高级别转化、ABC及HSIL/CIN3级,术后4个月肝转移,总生存12个月;另1例ACC伴基底样鳞状细胞癌(basaloid squamous cell carcinoma,BSCC),总生存25个月。免疫组化染色结果在ACC成分中表现为:5例CK7、4例CD117部分阳性;5例p63、S-100部分阳性;5例Syn、Cg A、CD56均呈阴性;5例p16均呈弥漫强阳性,4例ACC HPV16型阳性,1例ACC因组织有限未行HPV DNA检测。5例ACC MYB基因断裂重排阴性。结论1.宫颈ABC和宫颈ACC形态学表现相似,均具有基底样特征和腺样分化的特点,比较少见,占所有宫颈癌的比例小于1%。2.宫颈ABC是HPV相关性宫颈癌,临床病程呈惰性,是腺样基底样癌中的低级别恶性肿瘤。3.宫颈ACC虽与涎腺ACC具有相似的形态学和免疫组化特点,但无MYB基因断裂重排,多与HPV16型感染相关,是腺样基底样癌中的高级别恶性肿瘤,是HPV相关性多表型癌的一种形态学表现。

关键词： 伊丽莎白·盖斯凯尔   《玛丽·巴顿》   疾病   维多利亚时代  

摘要： 伊丽莎白·克莱格亨·盖斯凯尔是英国维多利亚时期最杰出的作家之一,因其作品生动呈现了维多利亚社会各阶层的真实生活而备受赞誉。1848年出版的《玛丽·巴顿》是盖斯凯尔的第一部小说,也是“工业小说”的代表作之一。盖斯凯尔将故事背景设置在十九世纪三四十年代——正值英国经济危机时期,再现了当时严重的社会问题。此外,疾病是该小说的一个重要线索。小说展现了疾病流行的曼彻斯特穷人和富人截然不同的生活状态,同时描写了底层人民为缓解身体和精神上的痛苦会采取一系列治疗手段,如酗酒、吸食鸦片等。故本文试从小说中的疾病现象入手,将《玛丽·巴顿》置于历史语境中,从病理学角度分析小说所展现的身体疾病与社会疾病,探究疾病的成因,并结合马克思主义理论分析疾病难以治愈的原因。论文主体主要分为五个章节。第一章主要梳理文学病理学批评的发展脉络及其常用的关键词如“身体”,“疾病”和“治疗”。第二章着重呈现小说的历史语境,描述维多利亚时期的公共卫生状况和社会现实,同时列举出小说中所涉及的身体疾病与社会疾病。第三章侧重于分析疾病的成因。维多利亚早期的疾病流行与当时不健康的经济存在密切的关系。第四章主要分析《玛丽·巴顿》中出现的几种治疗身体疾病的方法。小说中患病的人物主要依靠酒精、鸦片等缓解他们身体和精神上的痛苦,但这些方法并不能完全治愈疾病。第五章聚焦于维多利亚早期社会对当时的社会疾病即阶级冲突的焦虑。盖斯凯尔试图为当时的经济问题和社会问题提供她的“处方”,然而鉴于她的解决方案主要通过阶级间的相互善意和承认错误来化解矛盾和冲突,她的“处方”似乎无法“药到病除”。此外,盖斯凯尔同时代的人们对阶级冲突持不同看法,他们提出了各种解决方案,显示出维多利亚社会对阶级冲突的不确定性。综上所述,盖斯凯尔对十九世纪英国经济衰退时期“病态”的社会状况的生动描写,揭示出当时严峻的社会问题——阶级矛盾日益尖锐。虽然盖斯凯尔与她同时代的人们试图解决这一问题,但他们对阶级冲突的看法却大相径庭,反映出当时社会对阶级问题的焦虑与不确定性。

关键词： 血栓   组织病理学   急性缺血性脑卒中   血管内治疗   疗效   预后  

摘要： 研究背景:脑卒中是我国居民致死、致残的首位原因,其中,急性缺血性卒中(Acute Ischemic Stroke,AIS)约占全部脑卒中的80%。目前静脉溶栓和血管内治疗是急性缺血性脑卒中超急性期最有效的治疗手段。其中,静脉溶栓是指南推荐的首选方法,但存在时间窗窄且对大血管闭塞治疗效果欠佳的缺点;相比之下,越来越多的研究发现血管内治疗能显著提高再通率,而且其时间窗的延长可使更多患者可获得更好的预后。然而,部分患者虽经血管内治疗,但仍无法恢复神经功能,提示血管再通并不意味着良好预后,导致不良预后的原因除了血管再通的程度外,可能还有其他因素参与,因此寻找血管内治疗术后患者预后不良的危险因素成为了研究重点。近年,有研究发现血栓组织病理学可能影响血管内治疗的疗效和预后,但研究的结论不一。目的:1.探讨与血栓组织病理学相关的临床因素;2.探讨血栓组织病理学与AIS血管内治疗围手术期疗效和90天预后的关系;3.结合血栓组织病理学,探讨血管内治疗围手术期不良疗效和90天不良预后的危险因素。方法:连续入选自2020年04月至2021年12月于广州医科大学附属第三医院接受血管内治疗的急性缺血性脑卒中患者,将血管内治疗获取的新鲜血栓置于10%福尔马林溶液固定,24小时内送至病理科,制成标本切片,进行苏木精-伊红染色,采用图像分析软件,对红细胞、纤维蛋白/血小板、白细胞成分相对面积占比进行分析。进行CD61免疫组织化学染色,在40倍光学显微镜下随机选取3个视野进行图像采集,使用Image J软件计算CD61+染色的面积,最后取平均数作为血小板百分比。回顾性收集临床、影像学、生化及手术资料,根据患者围手术期情况(是否出现症状性颅内出血、进展性卒中、死亡、术后血流mTICI<2b级、mRS>4分)分为围手术期良好疗效和不良疗效组,根据术后90天mRS评分(mRS0-2分定义为良好预后组,3-6分定义为不良预后组)分为良好预后组和不良预后组。进行以下分析:1.比较不同血栓组织病理的患者临床资料的差异性;2.血栓组织病理学与AIS血管内治疗疗效和预后的关系;3.结合血栓组织病理学,分析血管内治疗围手术期不良疗效和90天不良预后的危险因素。结果:共纳入71例急性缺血性脑卒中的患者,男性患者37例(52.11%),女性患者34例(47.89%),所有患者平均年龄为70.7岁。1.与血栓组织病理学相关的临床因素[1].苏木精伊红染色光镜下观察富含红细胞的血栓16例(22.54%)、富含纤维蛋白/血小板的血栓26例(36.62%)、混合血栓29例(40.85%)。三组患者的起病到再通时间、穿刺到再通时间、取栓次数、术后mTICI分级>2b、ASPECT评分、术前NIHSS、术后24小时NIHSS、TOAST分型、HMCAS、起病前服用抗血小板/抗凝药物、前循环梗死、桥接治疗的差异均无统计学意义(P>0.05)。[2].血栓内红细胞百分比与术前NIHSS、术后24小时NIHSS、术后7天NIHSS、取栓次数、起病到再通时间、穿刺到再通时间、到院到再通时间、90天mRS无明显相关性(P>0.05),纤维蛋白/血小板百分比和白细胞百分比也均同上述临床资料无明显相关性(P>0.05)。[3].41例患者血栓进行了CD61免疫组织化学染色,CD61+39例(95.12%),CD61+面积百分比在起病前抗血小板/抗凝组和未抗血小板/抗凝组的差异无统计学意义(P>0.05),在桥接治疗组和未桥接治疗组的差异无统计学意义(P>0.05)。血栓CD61+面积百分比与患者起病到再通时间正相关(r=0.341、P=0.039),与术前NIHSS、术后24小时NIHSS、术后7天NIHSS、取栓次数、起病到再通时间、穿刺到再通时间、到院到再通时间、90天mRS无明显相关性(P>0.05)。2.血栓组织病理学与AIS血管治疗围手术期疗效和90天预后的关系[1]围手术期:不良疗效组和良好疗效组相比,富含纤维蛋白/血小板血栓的比例更高[59.3%vs 22.7%],差异有统计学意义(p=0.002);富含红细胞血栓的比例更低[10.0%vs 29.6%],差异有统计学意义(p=0.017);混合血栓组织比例的差异无统计学意义[29.6%vs 47.7%](p=0.132)。红细胞、纤维蛋白/血小板百分比在良好疗效组和不良疗效组的差异有统计学意义(p<0.001、p<0.001),红细胞、纤维蛋白/血小板、白细胞和CD61+面积百分比在良好疗效组和不良疗效组的差异均无统计学意义(p>0.05)。[2]术后90天:不良预后组和良好预后组相比,富含红细胞血栓比例[24.3%vs 20.6%]、富含纤维蛋白/血小板血栓比例[40.5%vs 32.4%]、混合血栓比例[35.1%vs 47.1%]的差异

关键词： Diagnosis  

摘要： In this study, we have developed a new pen-type pulse wave measurement system to evaluate heart failure treatment based on cardiovascular information. In order to acquire minute pathological changes in diseases such as heart failure, the pen-type pulse wave measurement system is equipped with a high-resolution MEMS tactile sensor that achieves a displacement resolution of 0.4µm and an input resolution of 50µN. This measurement system consists of a small sensor package, a pen-type measurement system, and a glass sensor package to enable physicians to measure the radial artery of men and women of all ages in a minimally invasive, rapid, and precise manner. Realizing this measurement system, simple and precise pulse wave measurement by direct measurement and measurement of pulse wave characteristics for individual differences has been possible. © 2022 The Institute of Electrical Engineers of Japan.

关键词： 葡萄   灰霉病抗性   高通量测序   miRNA   靶基因  

摘要： 葡萄灰霉病(Gray mould disease)是严重危害葡萄生长和葡萄产业发展的主要真菌病害之一。有证据表明不同抗性葡萄品种对灰霉病响应存在较大差异,miRNAs在病原菌入侵中表达会受到诱导或抑制,进而调节相应靶基因表达以此影响植物抗病防御进程。到目前为止大部分关于葡萄抗灰霉病的研究都集中在发掘响应侵染的抗病基因或抗病相关蛋白的代谢通路和转录调控,miRNAs参与调控的抗病响应在葡萄等果树中的研究还不多。研究了解抗灰霉病相关的miRNAs,不仅进一步了解葡萄应对生物胁迫的响应,还可以丰富植物抗病和防御反应调控网络,为改良和培育新品种提供新思路。选取高抗灰霉病的中国山葡萄(Vitis amurensis)双优和高感灰霉病的欧洲葡萄(Vitis vinifera)红地球为试材,通过扫描电镜、透射电镜及荧光染色观察葡萄叶片组织自身表皮特征差异以及与灰霉菌互作过程中病情发展差异,并测定比较了不同品种叶组织上细胞壁降解酶和作为抗病相关蛋白的几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性的差异;最后利用高通量测序技术测定不同抗性葡萄品种叶片接种灰霉菌后不同时期miRNAs表达情况,从中发掘差异表达靶基因可能参与的生物学功能。主要获得以下结果:1、抗病材料双优抑制灰霉菌孢子萌发。在接种后24 h内灰霉菌完成在红地球叶片上的侵染,叶表面有明显的病斑形成,完成定殖后病原菌会在红地球叶表面迅速生长扩张,最终产生新的分生孢子。而在高抗的双优叶片上灰霉菌孢子萌发与菌丝生长都出现延迟,侵染被抑制。比较红地球和双优叶片发现双优具有更厚的角质层厚度和和更多的表皮绒毛,接种灰霉菌后双优叶组织间活性氧积累存在于灰霉菌孢子及菌丝附近,这些可能是双优限制灰霉菌孢子附着、萌发的手段之一。2、抗病材料双优上β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶维持较高活性有助于抑制灰霉菌孢子萌发生长。双优中纤维素酶和果胶酶活性在4 h显著升高后迅速降低,而红地球叶片在接种病原菌后直至12 h酶活性逐步升高而后逐渐降低。红地球中维素酶和果胶酶活性升高的同时叶片纤维素和木质化染色逐渐加深。双优叶片中几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性在4-18 h内较高;而红地球叶片中几丁质酶活性一直低于双优,β-1,3-葡聚糖酶活性仅在4、48、72 h显著升高。推测双优更早感受到细胞壁降解酶造成的损伤并在之后持续激活β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性,这是灰霉菌孢子在双优叶片上生长发育受到抑制的原因之一。3、红地球和双优间miRNAs表达存在差异,41个倾向于在双优中表达。通过小RNA高通量测序,分别在红地球和双优文库中获得12 131 700条和10 959 531条clean序列,小RNA的长度分布在18-27 nt,主要集中在21 nt和24 nt。与mi RBase比对得到258个成熟miRNAs,包括161个vv-miRNAs和已知的97个MIRNAs,分别属于35个mi RNA家族。其中mi R159a/b、mi R3624-3p/5p、mi R3629a-5p、mi R3636-3p、MIR1446-x、MIR1535-x、MIR870-x在双优中表达量远高于红地球。4、红地球和双优中共有103个miRNAs因灰霉菌侵染表达变化差异显著,其中MIR160、mi R159a/b和MIR2118-y和MIR2218-y参与葡萄与灰霉菌互作;103个差异表达mi RNA的靶基因中有403个差异表达显著,其中果胶酶、β-1,3-葡聚糖酶以及几丁质酶其表达趋势与接种灰霉菌后酶活性的变化具一致,在双优中MIR2118-y和MIR2218-y靶向的抗病相关蛋白在双优受灰霉菌侵染前期表达显著增加。此外,降解组和定量验证,MIR858-x靶向GSVIVG01028091001(MYBF1/R2R3 MYB12)、GSVIVG01035459001(myb-related protein);vvi-mi R159a靶向GSVIVG01012447001(GAMYB),这些参与调控的转录因子也赋予双优更优异的抗性。

关键词： 骨肿瘤   组织病理学   人工智能   深度学习   辅助诊断  

摘要： 背景:原发性骨肿瘤危害严重,正确的组织病理学诊断对确定肿瘤侵袭性、指导制定合理治疗方案有重要意义。但目前通过医师评估进行骨肿瘤组织病理学诊断存在众多难点与挑战,人工诊断中的误诊与漏诊为社会及患者带来巨大负担,亟需探索新的方法以提升骨肿瘤组织病理诊断的效率及准确性。肿瘤精准诊断提出的新要求、全切片图像(WSI,whole slide image)技术的发展、大数据分析的推广与机器学习算法的优化,使得以深度学习(DL,deep learning)为代表的人工智能(AI,artificial intelligence)技术逐渐应用于数字病理学,成为提升疾病组织病理学诊断精度的前沿方法。但不同于高发病率的上皮起源肿瘤,骨肿瘤属于发病率低、组织形态学异质性大的间质起源肿瘤。目前人工智能模型针对全类别原发性骨肿瘤进行组织病理学侵袭性鉴别的能力不得而知。证实AI用于骨肿瘤组织病理学诊断的可行性和有效性,有助于进一步提升临床骨肿瘤病理诊断的准确性,并为相关应用的开发提供理论依据。目的:建立全类别骨肿瘤组织病理学WSI图像数据库,结合多种神经网络框架构建有效的深度学习模型,并与各水平病理医师进行预测性能对比,验证AI深度学习用于原发性骨肿瘤组织病理学定性分类的可行性与有效性。方法:收集共计427例原发性骨肿瘤组织制备组织病理切片并进行WSI扫描,构建数据库。由病理医师标记各WSI肿瘤区域的兴趣区后,所有兴趣区被裁剪以生成256×256像素大小共计716828张图形块,供后续AI深度学习模型训练。将图形块依据侵袭性类别分为训练集、验证集、测试集后,对六种DL模型进行骨肿瘤组织病理学侵袭性分类训练。训练结果在图形块水平进行验证后,在测试集中分别评估图形块水平和切片水平的骨肿瘤二分类(良性与非良性)及三分类(良性、交界性、恶性)鉴别性能。将DL模型的鉴别性能与四位不同等级的专科病理医师进行比较以客观评估训练效果。使用梯度加权类激活映射可视化DL模型鉴别骨肿瘤组织病理特点的重要区域,用以分析AI模型的潜在决策机制。结果:在选定的六种架构的DL模型中,VGG-16和Inception V3的图形块水平骨肿瘤组织病理二分类和三分类鉴别性能优于其他模型。在切片水平的鉴别中,以上两种DL模型的二分类鉴别曲线下面积分别为0.962与0.971;三分类鉴别Cohen’s kappa score(CKS)分别为0.731与0.802。高级病理医师切片水平三分类鉴别CKS为0.685,与以上两种DL模型相当(与两模型比较的p值分别为0.688和0.287)。但中级与初级病理医师的切片水平三分类鉴别CKS均低于表现最佳的DL模型(p值均小于0.05)。模型可视化结果显示DL可依赖于疾病特异的病理形态正确预测骨肿瘤的侵袭性分类。结论:人工智能DL模型可依据侵袭程度对骨肿瘤进行准确的组织病理学分类,其诊断表现达到了高级病理医师的水平。本研究结果证实了AI用于骨肿瘤组织病理学诊断的可行性和有效性,为DL辅助下骨肿瘤组织病理诊断的应用开发提供了理论依据。