组织胚胎学-文献订阅-三峡大学图书馆

摘要： 人胚胎组织褪黑素受体亚型蛋白和基因表达的研究褪黑素（Melatonin,Mel）,一种小分子的脂溶性物质，化学名为5-甲氧基-N- 乙酰色氨，是松果体主要在黑夜分泌的一种神经内分泌激素。蛐在低等脊椎动物中它的主耍生理作用仍然是聚集色素，即具有褪色作用，但是在阐明了其化学结构之后，使我们认识到它尚具有很多其它的生理功能，包括对昼夜节律、睡眠、情绪、性成熟及生殖、肿瘤、免疫反应等病理生理过程均有调节作用。Mel广泛的生物学作用主要由其高亲和力受体介导，Mel受体（MR）为G蛋白偶联受体（Guannine-proteim coupled recrptors,GPCR）。已经成功地克隆出三种高亲和力的 MR亚型，即mtm（Mel la）、MT2（Mdl la）、MT2（Mel lb）和Mel lc。在哺乳类动物（包括人类）表达的MR主要为mt1、MT2两种受体亚型。经典的放射配体结合法和体外放射性自显影技术（ARG）己经证实，在仓鼠、大鼠等哺乳类动物的下丘脑视交叉上核（SCN）、垂体结合部（PT）、尾动脉等组织存在125I-Mel结合位点，即MR。进一步应用核酸原位杂交、聚合酶链反应（PCR）技术证实，在大鼠的SCN、视网膜和尾动脉组织存在mt1、MT2两种受体亚型。在SCN，MT2受体亚型介导昼夜节律位相的前移；在视网膜，MT2受体亚型介导的抑制多巴胺释放；在尾动脉，mt2 受体亚型介导动脉血管收缩，而MT2受体亚型介导动脉血管舒张。应用逆转录聚合酶链反应用（RP*PCR）已经在人胎儿肾脏检测到mt1和MT2受体亚型的mRNA 表达，而核酸原位杂交仅显示mt1 mRNA的表达。越来越多的基础及临床实验已经证实，删对人体的昼夜节律、睡眠、情绪、性成熟及生殖、肿瘤和免疫反应均有一定的调节作用，但尚不清楚MR及其亚型在人体的组织细胞分布。虽然我们实验室已抛用放射配体结合法证实，在人胚胎的中枢神经系统，如SCN、视冈膜等，和外周部位，如心脏、甲状腺等器官组织均存在MR，但是以125I-Mel 作为配体的放射配体结能不能鉴定MR亚型的组织细胞分布，只能证实是否存在MR。为此，我们应用免疫组织化学染色、核酸原位杂交和RT-PCR等技术研究人胚胎下丘脑、垂体、肾上腺等胚胎组织、细胞中mt-2和MT2受体亚型的蛋白及基因表达，为进一步研究mt1和MT2受体亚型介导的广泛的生理功能及其信号转导机理莫定基础。 l 第二y医大学博士学位论文中立拘要材料与方法：选择中期引产p个月)的人胚胎下丘脑、垂体、视网膜、胰腺、肾上腺、肾脏、肝脏、脾脏，胸腺、心脏及肺脏组织，于刁0 t冰箱中贮存待测，或经4o／o多聚甲醛化．l％M固定、乙醇脱水、石蜡包埋、置4U冰箱中贮存持检测。采用SP免疫组织化学法，一抗为鼠抗人dl和MT受体单克隆抗体，由香港大学医学院生理系P峪教授惠赠。含p…l（人ndl受体亚型）和 I，CuiH～ 3（人MT受体亚型）质粒的大肠杆苗苗株在LB中过夜培养，离心回收大肠杆茵，抽提纯化质粒，分别以 wl和 Hindlll内切酶酶切消化，回收 1．二左右的片段胶，应用DigoxigeninopG)进行标记，制备Int；和MT受毗型探针。抽提总RNA，逆转录．PCR扩增，凝胶电泳，送基康公司测序。结

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