组织胚胎学-文献订阅-三峡大学图书馆

摘要： 目的　克隆与小鼠胚胎发育相关的新的全长cDNA。方法　从小鼠胚胎cDNA文库中筛选出一个新的EST,以8～9d龄小鼠胚胎组织mRNA为模板进行RACE(rapidamplificationofcDNAends),结合PCR筛选cDNA文库,获得其全长cDNA序列后进行序列同源检索、结构分析和功能预测。根据整合后的cDNA两端序列设计引物进行RT-PCR,克隆PCR产物,并对产物进行全序列测定,验证整合序列的客观性。结果　(1)克隆的序列为小鼠DNAC5胞嘧啶特异的重新甲基转移酶(denovoDNAcytosine5′-specificmethyltransferase,Dnmt)基因cDNA,发现该基因比已报道的Dnmt3bcDNA序列在5′方向延伸了152bp,其起始密码子上游存在一个新的选择剪接区域。(3)从小鼠胚胎组织中克隆出8种Dnmt3bcDNA选择剪接异构体,并均已获得Genbank序列接收号。结论　获得了Dnmt3bcDNA的4kb全长序列,发现Dnmt3b基因上游存在新的5′选择剪接序列,可能通过选择剪接形成上游终止密码子的切换;Dnmt3b在小鼠胚胎发育过程中存在着复杂的选择剪接表达。