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ISBN: (纸本)9787806124420

关键词： 雌激素   Sertoli细胞   血睾屏障   细胞分化   组织免疫   组织胚胎学  

摘要： 目的：本实验旨在通过体内、体外两种途径给予青春期大鼠外源性雌激素，初步探讨在Sertoli细胞分化和成熟阶段，雌激素对Sertoli细胞FasL表达以及血－睾屏障的影响，进一步讨论影响血－睾屏障的相关因素及其可能机制。 方法：（1）Sertoli细胞FasL的表达：①在培养液中加入雌二醇（浓度4×10-6M），分别在Sertoli细胞培养24小时、48小时，用间接免疫荧光方法检测Sertoli细胞 FasL表达的变化;②新生SD大鼠（出生=第0天），自出生第二天始隔日皮下注射二乙烯雌酚（DES），浓度10 mｇ/20mｌ，至第十二天为止，与母鼠共同喂养至第18天和第25天两个时间点取材。应用间接免疫荧光方法检测Sertoli细胞 FasL表达的变化。（2）新生SD大鼠自出生第二天始隔日皮下注射DES，与母鼠共同喂养至第18天和第25天取出双侧睾丸，切成1mm3小块，置入3％ 硝酸镧-戊二醛-二甲砷酸钠缓冲液中前固定，利用重金属镧不能穿越正常血－睾屏障的特点，运用睾丸组织硝酸镧块染法在电镜下观察血－睾屏障结构的变化。（3）新生SD大鼠自出生第二天始隔日皮下注射DES，与母鼠共同喂养至第18天和第25天两个时间点心脏取血，ELISA方法检测血液中TNFα浓度的变化。 结果：给予外源性雌激素后使：（1）Sertoli细胞FasL表达增强，并出现FasL分布区域的改变。（2）在18天实验组，电镜下显示镧大量透过血－睾屏障，到达生精上皮全层。（3）血液中TNFα浓度降低。 结论：（1）雌激素可以使Sertoli细胞内FasL的表达量和分布区域发生改变;（2）雌激素可以影响血－睾屏障的结构与功能（硝酸镧轨迹，TNFα浓度）;（3）FasL可能在血－睾屏障结构与功能改变后的机体自身修复中起重要作用，并激活免疫调节功能，因此它可能与睾丸组织免疫豁免密切相关。

关键词： 中国解剖学会   委员会   临床解剖学   人体解剖学   基础医学   解剖学技术   继续教育学分   中国临床解剖学杂志   四川大学华西基础医学与法医学院   人民南路   组织胚胎学   组织学   手外科   会议  

关键词： 子宫   细胞培养   三维组织构建   胚胎共培养体系   植入模型  

摘要： 子宫是雌性动物的重要生殖器官,有关子宫生理及病理机理的研究可促进发育生物学及生殖医学的发展。但子宫随雌性动物的发情周期在形态及生理方面呈动态变化,因而在体内研究具有一定的局限性。本研究利用细胞三维培养技术,将假孕母兔的子宫内膜上皮细胞、基质细胞以及子宫平滑肌细胞在体外分离培养后,以Ⅰ型液态鼠尾胶原为支架,按自然子宫的结构在体外重建含子宫平滑肌层、基质层和上皮层的三维组织片层结构模型,同时将构建组织与小鼠两细胞期胚胎及囊胚共培养后观察其对早期胚胎发育以及胚胎植入的影响,以期为发育生物学、生殖生理学及病理学研究提供一个体外模型。 本研究结果如下: 1、研究子宫内膜上皮细胞和基质细胞体外分离方法和增殖规律的结果表明,家兔在经过促情激素（PMSG）和促排卵激素（hCG）处理后分离其子宫内膜上皮细胞和基质细胞,可在体外增殖生长。利用0.1%胶原酶对兔子宫内膜进行消化并用离心法分离可获得较好的分离培养效果。培养液中添加雌二醇（E2,100 nmol/L）和少量孕酮（P4,10 nmol/L）对上皮细胞增殖有促进作用,添加孕酮（P4,100 nmol/L）对基质细胞的体外增殖有促进作用。免疫组织化学染色表明,培养的上皮细胞对上皮角蛋白抗体呈阳性,基质细胞对波形蛋白抗体呈阳性,说明性腺激素不会促使子宫内膜细胞在体外分化为其他类型细胞。上皮细胞与少量基质细胞（15%）共培养并辅以100 nmol/L雌二醇和10 nmol/L孕酮可促使上皮细胞在体外传4-5代。子宫内膜细胞在体外的大量增殖可为子宫组织的体外三维构建提供足量的种子细胞。 2、研究子宫平滑肌细胞体外增殖规律的结果表明,应用组织机械剪碎胰酶消化方法可成功地进行子宫平滑肌细胞的体外培养和传代。子宫平滑肌细胞在体外的增殖受卵巢性腺激素的影响,100 nmol/L的E2对子宫平滑肌细胞有显著的促增殖作用,而100 nmol/L的P4则对其增殖有显著的抑制作用。体外培养的子宫平滑肌细胞在激素作用下仍可维持其特性,对α-平滑肌肌动蛋白抗体呈阳性反应。利用本实验方法分离培养的子宫平滑肌细胞可用于有关子宫平滑肌生理的研究,也可为构建子宫三维结构提供充足的种子细胞。 3、以体外培养扩增的子宫内膜上皮细胞、基质细胞和子宫平滑肌细胞作为种子细胞,以浓度为1.8 g/mLⅠ型液态鼠尾胶原作为支架材料,Matrigel作为促细胞生长物质,构建了包括子宫上皮层、基质层和平滑肌层在内的子宫三维片层的体外模型。H.E染色结果表明构建组织具有类似于自然子宫的三维三层结构。免疫组织化学染色表明构建组织的三层结构分别对上皮角蛋白抗体、波形蛋白抗体和α-平滑肌肌动蛋白抗体呈阳性反应,说明三层组织分别来源于子宫内膜上皮细胞、基质细胞和子宫平滑肌细胞。透射电镜检测证明在构建组织中,上皮细胞极化为柱状排列,细胞之间建立了紧密连接和桥粒结构,细胞中线粒体数量丰富、形态正常。扫描电镜对激素处理的三维片层的检测结果表明,构建组织的上皮细胞表面有微绒毛和纤毛存在,一些微绒毛特化为Pinopode结构。与胚胎植入有关的一些标记性基因β3-整合素、HOXA-10以及肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）的RT-PCR结果表明,三个基因在性腺激素处理后的子宫三维片层中均有显著表达,而未用激素处理组则不表达或表达很微弱,说明构建组织具有自然子宫的一些生理功能。应用本实验方法构建的子宫三维片层结构具有与自然子宫类似的结构和功能,可为与子宫有关的病理及生理机理的研究提供了一个较为理想的体外模型。 4、将体外构建的子宫三维组织片层结构与小鼠两细胞胚胎共培养以建立三维共培养体系,观察其对胚胎早期发育的影响。结果表明,相对于培养液单独培养、输卵管上皮细胞和子宫内膜细胞共培养体系,子宫三维组织共培养体系可极显著或显著提高小鼠两细胞胚胎的囊胚发育率、囊胚贴附率以及囊胚细胞数,囊胚发育率分别提高82.3%,34.6%和24.5%,囊胚贴附率分别提高273%,65.8%和63.2%,囊胚细胞数分别提高47.8%,19.3%和23.6%。说明子宫三维组织共培养体系可以在体外为胚胎发育提供一种更类似于体内的环境,有利于胚胎的体外囊胚发育率和发育质量的提高。 5、将构建的子宫三维组织片层与小鼠囊胚共培养以观察其能否作为胚胎植入现象的体外研究模型。结果表明,将该片层用性腺激素处理后与小鼠囊胚共培养,大多数囊胚可顺利脱带,黏附在子宫三维组织片层表面,最后穿过上皮层植入到基质层。植入的胚胎可在构建组织中进一步发育,并观察到微管样结构形成,表明胚胎在子宫三维片层上的发育可能启动了囊胚内细胞团的第一次分化。因此,利用本方法在体外构建的三维子宫组织片层可作为探索体外胚胎植入以及囊胚内细胞

关键词： cyanotoxin   growth inhibition   histology of reed   microcystin-LR   phragmites australis  

摘要： The aim of this study was to establish the histological effects of exposure to microcystin-LR (MC-LR), a cyanotoxin, on axenic Phragmites australis plantlets. center dot Plantlets were regenerated from embryogenic reed calli by tissue culture methods. center dot Microcystin-LR inhibited the growth and development of embryogenic calli and the growth of reed plantlets. The 50% plantlet growth inhibitory concentration value (IC50) of MC-LR was 12 mu g ml(-1) (12.07 mu M) on mineral medium and 36 mu g ml(-1) (36.22 mu M) on Murashige-Skoog medium. In the case of roots, the IC50 value was 4.1 mu g ml(-1) (4.12 mu M) on both media. Microcystin-LR induced aerenchyma obturation, altered lignification of cell walls in the axial organs, root necrosis and the capture of lateral or adventitious roots in the tissues of axial organs of reed plantlets. Cyanotoxin induced the premature development of lateral roots, root coalescence and early aerenchyma formation. center dot Our data suggest that microcystin-LR, a cyanotoxin, induced developmental and histological alterations leading to growth inhibition of reed, and the induced harms have an impact on understanding reed decay in eutrophic fresh waters.

关键词： 超声   Caspase3   凋亡   胚胎  

摘要： 目的探讨诊断用彩色多普勒超声对大鼠早孕胚胎组织细胞凋亡及Caspase3(天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3)表达的影响。方法探头频率为2.5MHz的彩色多普勒超声固定持续照射孕鼠子宫体表位置,60只大鼠按照射时间分为0、5、10、20、30及60min组。利用Westernblotting检测胚胎组织Caspase3表达强度变化,进行Caspase3活性测定,流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果各组胚胎组织中Caspase3蛋白均有表达,照射30、60min组Caspase3表达增强,与0min组比较,相差有显著性意义(P<0.05)。照射20、30、60min组Caspase3活性高于0min组,相差有显著性意义(P<0.05)。各组胚胎组织均存在凋亡细胞,照射30、60min组凋亡细胞百分率高于0min组,相差有显著性意义(P<0.05)。结论诊断用彩色多普勒超声过度照射早孕大鼠,可促使凋亡基因Caspase3蛋白合成增加,活性升高,诱发胚胎组织细胞凋亡。

ISBN: (纸本)9787302154174

关键词： 核移植   胚胎干细胞   生物反应器   心肌细胞   工程化心肌组织  

摘要： 背景：心脏缺血性疾病具有很高的发病率和死亡率，故针对这种疾病的治疗一直受到国内外研究人员的广泛关注。心脏疾病在晚期往往需要进行器官移植，但却受到移植器官来源有限及移植后引发免疫排斥反应等因素的限制。随着组织工程研究的不断深入，运用组织工程技术研制可供移植的心肌组织给治疗心脏缺血性疾患带来了新的希望。本文采用重构胚来源的小鼠胚胎干细胞(NT-mESC)作为种子细胞来源，体外构建工程化心肌组织，NT-mESC既可为组织工程化心肌再造提供无限的细胞来源，也有望解决移植后引发的免疫排斥问题，相关研究国内外尚未见报道。 方法：应用STLV型生物反应器大规模制备拟胚体(EBs)，采用抗坏血酸作为诱导剂，将EBs诱导分化为心肌细胞，通过Percoll密度梯度离心富集NT-mESC来源的心肌细胞，将富集的心肌细胞与液态Ⅰ型胶原及ECM gel混合后构建工程化心肌组织(ECTs)，体外力学拉伸刺激后将ECTs移植到大鼠心肌梗死部位，移植4周后，对ECTs在体内的存活及血管化情况进行评价。 结果：NT-mESC在STLV型生物反应器中能够高效形成EBs，EBs中心区域未见明显坏死，无广泛的凝聚现象。在贴壁诱导分化培养后，EBs能迅速贴壁并有细胞爬出，抗坏血酸诱导EBs向心肌细胞分化的效率超过90％。NT-mESC来源的心肌细胞经Percoll密度梯度离心后，主要富集在第Ⅲ层和第Ⅳ层，其纯度分别为35±2％和73±4％。收集第Ⅲ、Ⅳ层细胞作为种子细胞，以液态Ⅰ型胶原为支架构建出的ECTs体外拉伸7天后，具有类似于新生小鼠心肌的结构特征，心肌细胞在ECTs中发生重排，但肌原纤维比较稀疏。移植到大鼠心梗部位4周后，ECTs能够继续存活并进一步发育成熟，血管化程度较高，且未发现畸胎瘤的形成。 结论：本文采用NT-mESC作为心肌组织工程种子细胞来源，构建出工程化心肌组织，构建的ECTs具有类似于新生小鼠心肌的结构特征，体内移植后ECTs能够存活，在ECTs中不仅有心肌组织形成而且还发生血管化，表明其具有较强的心肌损伤修复能力。

关键词： 芨芨草   体细胞胚胎发生   同工酶   特异蛋白质   器官发生  

摘要： 实验以芨芨草无菌苗叶鞘和胚轴为外植体，固体培养与悬浮培养相结合，首次建立了诱导芨芨草体细胞胚胎发生的培养体系。通过对芨芨草体细胞胚胎发生过程中各阶段的组织细胞学观察、同工酶酶谱分析、特异蛋白质表达分析，研究了芨芨草体细胞胚胎发生的细胞学与生理生化变化特征。此外，本实验还利用芨芨草愈伤组织，建立了完整的器官发生植株再生体系。 1．芨芨草叶鞘和胚轴在B5+1.0 mg·L-1 2,4-D+1.0 mg·L-1 NAA的固体培养基上可诱导出适合诱导体细胞胚的胚性愈伤组织；胚性愈伤组织在B5+0.2 mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 ABA和B5+0.2 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1ABA的液体培养基中可诱导出大量体细胞胚胎。 芨芨草体细胞胚胎发生过程中的组织细胞学研究表明：芨芨草体细胞胚胎发生方式为内起源，起源于胚性愈伤组织内部。芨芨草体细胞胚胎中淀粉粒、蛋白质含量丰富。 芨芨草体细胞胚胎发生过程中的同工酶酶谱研究表明：淀粉酶、过氧化物酶、ATP酶随着体细胞胚胎的发育而发生变化，并且有特异的酶谱带出现，可作为体细胞胚胎发生的标志。 芨芨草体细胞胚胎发生过程中各阶段的全蛋白图谱，显示了各时期的特异蛋白，胚性愈伤组织的特异蛋白点：3-A（pH5.1，MW33kD）；3-B（pH4.9，MW28kD），是产生体细胞胚胎的标志性蛋白。成熟胚的特异蛋白点：4-A（pH4.0，MW36kD）；4-B（pH4.0，MW34kD），是体细胞胚发育完全后特异表达的蛋白质。 2．在由愈伤组织诱导的植株再生体系中：诱导芽分化较适合的培养基为B5+0.5mg·L-1 6-BA+0.2 mg·L-1 NAA；培养基1／4 B5+1.0 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+1.0g·L-1活性炭（Active Carbon）有利于芨芨草试管苗的生根，再生植株健壮，移栽成活率高。

ISBN: (纸本)9787810607025