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关键词： dopamine graft   donor age   embryo staging  

摘要： In rat models of Parkinson's and Huntington's diseases, embryonic neural cells obtained from embryos of specified ages can be implanted into the brain to partially restore both physiology and function. However, in litters produced using overnight mating protocols (often from commercial suppliers), the embryonic age can be difficult to determine precisely. As a result, embryonic size based on crown to rump length (CRL) is usually a more reliable method of embryo staging than the day of mating. This approach is not without difficulty. There are a number of rat staging scales in the literature, none of which deal with donor ages younger than E13, and there are discrepancies between scales at some donor ages. In the present article, we have devised a short mating-period protocol to produce precisely aged embryos. We show that CRL is a highly accurate, reproducible index of donor age and we present an updated embryonic staging scale for Sprague-Dawley (CD) rats that includes donor ages younger than those previously reported.

关键词： Fascin   Ezrin   NGAL   NGALR   胚胎   组织芯片   免疫组织化学  

摘要： Fascin是一种细胞骨架肌动蛋白结合蛋白。Ezrin是一种细胞骨架连接蛋白,属于ERM (Ezrin-Radixin-Moesin)家族。NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是一种分泌蛋白,属于Lipocalin家族,其功能也可能与细胞骨架相关。近10年来,包括我们课题组的系列研究在内的大量实验结果表明,Fascin、Ezrin和NGAL等在乳腺癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌、食管癌和甲状腺肿瘤等多种肿瘤组织中异常表达,与肿瘤细胞的移动侵袭等恶性特征行为表现密切相关。在此基础上,本论文拟研究Fascin、Ezrin和NGAL等细胞骨架相关蛋白,以及NGAL受体NGALR(NGAL Receptor),在人类胚胎以及成人正常组织中的表达模式,以期与在肿瘤组织中的表达情况进行对比,为深入揭示它们的功能提供资料。本文主要采用组织芯片和免疫组织化学实验技术手段,对4-22周胎龄的胚胎和成人组织样本中Fascin、Ezrin、NGAL和NGALR等的表达情况进行了检测。检测结果:1)Fascin的表达,4周胎龄神经管上皮即为阳性,8-12周胎龄小脑皮质和肠管呈现强阳性,胚胎后期与成人阶段的小脑蒲肯野细胞层以及肠腺上皮为阴性;8-12周胎龄肾上腺皮质与髓质强阳性,然而在出生后各期外周球状带阳性,向内逐渐减弱,至髓质完全阴性;淋巴组织中的树突状细胞、复层鳞状上皮的基底层细胞、间充质细胞、血管内皮细胞以及神经细胞(不包括胚胎后期与成人阶段的小脑蒲肯野细胞)等在生长发育过程中均呈现显著阳性,而在正常的胆管、结肠、胰腺和胃部的单层柱状上皮为阴性。2)Ezrin的表达,在胃肠道中广泛阳性,6-8周胎龄主要位于肠管上皮,胚胎后期和成人阶段的胃肠腺上皮细胞刷状缘和胃壁细胞显著阳性;神经中仅4周胎龄神经管上皮阳性;8-12周胎龄肾上腺皮质和髓质强阳性,而后期发育成熟时由外向内逐渐增强,外周球状带弱阳性,网状带强阳性,但髓质阴性;肾脏、脾、淋巴结和复层鳞状上皮阳性,而肺、肝、心脏和血管阴性。3) NGAL的表达,8-12周胎龄肾上腺髓质和肺腺泡上皮阳性,而胚胎后期和出生后各期阴性;4周胎龄神经管阴性,后期生长发育过程中大脑皮层神经细胞尤其是星形细胞阳性;小脑蒲肯野细胞层6月胎龄阴性,出生后各期阳性;脾脏髓质富含中性粒细胞部位、肾小管上皮细胞和胃肠道某些腺上皮细胞阳性,而正常心脏和肝脏阴性。4)NGALR的表达,小脑蒲肯野细胞层6月胎龄阴性,出生后各期阳性;肾小管上皮细胞和胃肠道某些腺上皮细胞阳性,而正常心脏和肝脏阴性。上述结果表明,Fascin、Ezrin、NGAL和NGALR等在人类胚胎以及成人正常组织中的表达具有一定的时间特异性和组织特异性。

关键词： dissolved oxygen   early life stage   reproduction   Sparidae   seabream   porgies   Australia  

摘要： Coastal environments are threatened by the increasing frequency, extent and severity of hypoxic events. Hypoxia affects vast areas around the world and often causes fish kills, reduced abundance, altered distribution, low benthic biomass and declines in fisheries. In Australia, many fisheries are based on sparid fishes and in the southern states black bream (Acanthopagrus butcheri) is important to both the recreational and commercial sectors. This species completes its entire life cycle in estuaries and annual recruitment is highly variable and very likely influenced by environmental conditions during the spawning season. In a laboratory-based experiment, fertilised black bream eggs (embryos) were exposed to five different levels of dissolved oxygen (DO). The DO levels were maintained in small test wells using nitrogen gas in a novel chamber design. Embryo development was assessed over a 2-day period and hatched larvae were observed until Day 2 post-hatch. Significant differences (p < 0.05) were observed in embryonic development and survival as a function of DO level. In severely hypoxic conditions (30% saturation) survival to 1 day was reduced and no hatching occurred. In moderately hypoxic conditions (45-55%S), both precocious and delayed hatching was observed and hatch rates were reduced, whilst the number of hatched larvae with deformities increased, resulting in reduced larval lengths. No larvae survived to Day 2 post-hatch when held in hypoxic conditions (< 55%S). This study demonstrates the detrimental effect that severe hypoxia can have on the early development of black bream which could result in reduced recruitment and lowered abundance. Other species that share similar early life histories may also be at risk. (c) 2008 Elsevier Ltd. All rights reserved.

关键词： 超声诊断   早孕胚胎组织   组织细胞   调亡蛋白  

摘要： 目的: 探讨不同频率诊断超声照射对大鼠早孕胚胎组织Caspase-3、Bcl-2 mRNA及蛋白水平表达的影响，以进一步明确超声照射对早孕胚胎组织的影响作用，比较诊断超声照射后不同时间以及不同频率之间所产生的不同的物理--生物学效应，为超声在产前应用的安全性提供依据。 方法: 1.实验分组：雌性SD大鼠40只与雄鼠合笼，建构早孕模型;2.40只早孕SD大鼠随机分为两大组，分别采用经腹超声(频率3.5MHz)和经阴道超声(频率7.0MHz)进行照射，相同频率再进行不同超声照射时间分组，随机分成四组：Ⅰ组(对照组即0 min组)、Ⅱ组(10 min组)、Ⅲ组(20 min组)、Ⅳ组(30min组)，建构照射模型;3.S-P免疫组织化学检测大鼠胚胎组织细胞的Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平的变化;***-PCR检测大鼠胚胎组织Caspase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA水平表达的变化。 结论: 1.经腹诊断超声持续照射大鼠早孕胚胎超过20min，经阴道诊断超声超过10min，可引起胚胎组织细胞中Caspase-3在mRNA及蛋白水平表达增高，从而可能引起大鼠早孕胚胎细胞凋亡增加;而Bcl-2mRNA及蛋白水平表达明显下调，提示Bcl-2可抑制细胞凋亡;2.随着诊断超声照射时间的延长，Caspase-3表达水平也相应增高，提示诊断超声的生物效应与照射时间呈正相关，且Caspase-3的表达与胚胎组织细胞凋亡相一致，呈正相关;而Bcl-2表达水平下调，提示Bcl-2的表达与大鼠胚胎组织细胞凋亡及Caspase-3的表达呈负相关;3.从近期生物学效应看，诊断超声在相同照射时间下，大鼠胚胎细胞凋亡经阴道超声照射组较经腹超声组更加明显，其中经腹超声持续照射超过20min及经阴道超声照射超过10min时即产生了一定的损伤效应，提示在在早孕超声检查时，应尽可能缩短检查时间，以免引起胚胎组织细胞的凋亡和超微结构的改变，且孕早期尽量避免行阴道超声检查。但关于其远期生物学效应还有待近一步研究。 [

关键词： 盘丽鱼   胚胎发育   消化道   组织学   消化酶   仔鱼  

摘要： 盘丽鱼(Symphysodon discus)隶属硬骨鱼纲(Osterchthyes),鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Percoidei)、丽鱼科(Cichlidae)、合齿鲷属(Symphysodon),是重要的热带观赏鱼之一。盘丽鱼初孵仔鱼以亲鱼体表粘液为开口饵料,这一特点导致人工饲养成活率较低。目前虽已有学者对这一行为做了一些研究,但尚未弄清生理学机制。本文试图通过对盘丽鱼仔鱼不同阶段消化道发育及开口初期仔鱼的消化酶活力进行观察和分析研究,探讨盘丽鱼仔鱼摄食行为的生理学机制,为选择和研制盘丽鱼仔鱼开口饵料提供参考。主要研究结果如下: 自然受精的盘丽鱼受精卵在水温30±1℃,pH 5.5条件下,受精约50分钟后进入卵裂期,3小时后进入囊胚期,9小时30分后进入原肠期,20小时后胚孔封闭,32小时后肌肉开始收缩,33小时10分后出现心跳,50小时后出膜。其胚胎发育积温为1500±50(℃·h)。盘丽鱼卵裂期、原肠期发育较快,而器官发育期发育相对较慢。 利用光学显微镜对盘丽鱼仔鱼消化系统进行了组织学和形态学观察和比较。发现刚孵化的仔鱼消化道基本没有分化。3日龄时直肠和肠分化,同时可见肝脏和胰脏。4日龄时卵黄囊消失。5日龄-9日龄消化系统形成雏形,7日龄时胃出现,但不具胃腺。肠道皱褶逐渐丰富,粘液细胞数量增多。10日龄后,消化系统逐渐发育完成,至25日龄时消化系统形态上接近成鱼。 对3日龄的仔鱼主要消化酶进行了测定。结果表明,早期仔鱼可检测到胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶这四种酶的活性,但胃蛋白酶活力极低;淀粉酶最适温度为37℃,胃蛋白酶为42℃,胰蛋白酶为32℃,脂肪酶为27-37℃。

ISBN: (纸本)9787030201973

ISBN: (纸本)9787117104678

关键词： 组织工程皮肤   胚胎成纤维细胞   皮肤缺损   免疫排斥  

摘要： 皮肤软组织缺损是整形和烧伤外科经常遇到的问题,临床上通常采用自体皮或异体皮肤移植进行修复。但由于供区不足、免疫排斥及传播疾病等缺点,寻找一种理想的皮肤替代物一直是临床上一个急需解决的难题。组织工程皮肤的出现为这个问题的解决开创了崭新的方法。目前此类的组织工程皮肤和生物敷料种类繁多,但仍不成熟,存在着皮肤耐磨性差、自体种子细胞来源缺乏、异体种子细胞诱发免疫排斥、培养时间长、治疗费用昂贵等缺点。本研究应用组织工程学原理,在前人研究的基础上,体外扩增同种异体胎儿成纤维细胞作为种子细胞构建三维培养,并用来修复鼠皮肤缺损,同时也在临床观察其治疗效果。为本领域提供了新的思路和方法。 目的 探索人胎儿成纤维细胞(human embryonic fibroblasts,HEF)的培养方法和特性,通过异体淋巴细胞混合试验,揭示培养后不同代的胎儿和普通成纤维细胞免疫原性的变化,探讨HEF作为皮肤组织工程种子细胞的可行性。 探索应用HEF和鼠尾胶原(rat tail tendon collagen,RTT collagen)构建组织工程皮肤的方法,观察其组织结构和分泌特性。 应用构建的组织工程皮肤修复实验动物皮肤缺损,观察治疗效果和修复后组织特点。 最终通过临床应用证明其临床应用的可能性、可靠性和有效性。 方法 采用组织块法、酶消化法培养人胚胎和普通皮肤成纤维细胞,观察获得成纤维细胞数量、细胞形态、细胞活力、生长周期等指标。将不同代数人胚胎和普通成纤维细胞,分别与健康的同种异体志愿者的外周血淋巴细胞混合,建立异体细胞体外免疫排斥模型。通过H3-TdR标记,液体闪烁计数仪检测异体淋巴细胞增殖情况。 将鼠尾胶原溶液、浓缩培养基、NaOH溶液和以血清重悬的普通和胚胎成纤维细胞溶液在适当的比例下混合后形成凝胶构建真皮类似物。HE染色观察其结构。用ELASA法测试三维真皮培养基中的TGF-β1和IL-6的含量。 将胎儿成纤维细胞采用荧光染料Hoechst33342染色后,构建人工真皮,移植于裸鼠背部的全层皮肤缺损,观察其愈合过程。术后示踪胎儿成纤维细胞,并取材做光镜下组织观察和基底膜PAS特殊染色。分离培养SD大鼠胚胎成纤维细胞用上述实验的方法制备三维构建。将培养的人工真皮修复大鼠皮肤全层缺损并用空白鼠尾胶原做对照,观察其愈合过程和病理变化,用免疫组化方法测试创面CD31和波形蛋白的表达。 选取扩张术后皮瓣边缘坏死造成全层皮损的患者12例。部分创面采用制备的胚胎成纤维细胞组织工程皮肤覆盖,选取邻近创面作为对照,对照区采用空白的鼠尾胶原或凡士林油纱布覆盖。治疗期间观察创面有无炎症反应、有无渗出等情况;对患者创面进行有效性及安全性评估;观察创面的愈合情况及不良反应;计算应用部位与对照的愈合时间。 结果 采用酶消化法所获得的细胞数量最大,为7×10～7个/g组织,并且需时短,但细胞形态及活力较差。采用组织块法培养细胞,细胞形态和活力好,适合本研究。与普通成纤维细胞相比,人胚胎成纤维细胞具有生长速度快,分裂指数高,代谢迅速和分泌功能合理的特点。在评价细胞免疫原性的实验中,我们发现普通和胚胎成纤维细胞培养后各代和原代相比,对异体淋巴细胞刺激的增殖作用显著降低,而普通成纤维细胞下降的趋势更明显。胚胎成纤维细胞培养后几乎对异体淋巴细胞无刺激增殖作用。 利用鼠尾胶原做真皮支架形成的人工真皮中成纤维细胞生长状态良好,并且具有一定的组织强度。检测其培养液中的TGF-β1和IL-6,胎儿成纤维细胞组在各个时相上分别显著低于和高于普通成纤维细胞组。 裸鼠动物实验中,术后20日用胎儿成纤维细胞构建的组织工程皮肤覆盖的裸鼠背部创面已愈合,表皮较薄弱。而单纯用空白鼠尾胶原覆盖的创面仍留有痂皮。基底膜PAS染色见实验组表皮真皮之间有连续的基底膜结构。创面荧光标记的细胞量随着时间减少。SD大鼠实验中,病理学检查表明移植TEF skin的大鼠创面上皮化良好,成纤维细胞和胶原排列规则,血管化满意。 临床实验中,患者术后病情平稳,创面无明显炎性反应及渗出。创面愈合时间与应用单纯鼠尾胶原的对照组相比明显缩短2—4天,与应用凡士林纱布的对照组相比缩短8—10天。未见排斥等不良反应。 结论 人胚胎成纤维细胞易于获取,容易培养,性质稳定,培养后几乎无抗原性,是组织工程种子细胞的良好选择。利用鼠尾胶原可以构建真皮类似物,该成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性,成纤维细胞保持着相当的活力,它是继续做应用研究的良好模型。此人工真皮可以满意的修复动物皮肤全层缺损。满意的临床疗效提示,利用胎儿成纤维细胞构建的人工真皮,在未来有较大的研究和应用潜力。

关键词： 风采   教研室   高职高专学报   优秀学报   组织学与胚胎学  

关键词： 组织胚胎学   组织学   解剖学   观察能力  

摘要： 观察能力是人生诸多能力中的一个重要方面。它不仅有助于学生在今后的临床实践中很好地观察病人的病情,也能更好地沟通医患关系,化解各种医患矛盾,使工作顺利地开展下去。解剖学与组织胚胎学属于形态学教学,不论是对图的观察,还是对标