关键词：
MAD2基因
BUB1基因
荧光定量PCR
western blot
摘要：
目的:自然流产胚胎表现为细胞分裂受到抑制,胚胎发育迟缓。探讨与细胞周期调控密切相关的纺锤体检查点基因(MAD2和BUB1)在流产胚胎中的表达,为进一步探明不明原因自然流产胚胎的发生机制,为实验室诊断自然流产寻找新的诊断指标奠定重要基础。
方法:
1利用实时荧光定量PCR检测MAD2和BUB1基因mRNA的表达水平。
2采用western blot技术检测MAD2和BUB1基因的蛋白表达水平。
结果:
1 MAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值:人流组(对照组)为0.00941±0.00026 ,流产组(实验组)为0.00835±0.00041,流产一次组为0.00879±0.00035,流产二次及以上组为0.00901±0.00033; BUB1基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值在人流组中为0.00671±0.00021 ,流产组为0.00597±0.00036,而其在流产一次组为0.00682±0.00025,流产二次及以上组为0.00713±0.00041。
2 MAD2蛋白光密度/β-actin蛋白光密度的均值:人流组为0. 5790±0. 0331,流产组为0.2683±0.0275,流产一次组为0. 2791±0. 0311,流产二次及以上组为0.0431±0.0020;BUB1蛋白光密度/β-actin蛋白光密度的均值:人流组为0.6260±0.0209 ,流产组为0.3033±0.0406,流产一次组为0.3153±0.0027,流产二次及以上组为0.07122±0.0030。
3经统计分析:MAD2和BUB1二者的mRNA水平在人流组与流产组间(p>0.05)和流产一次组与流产二次及以上组间(p>0.05)无统计学差异,蛋白水平在人流组与流产组间(p<0.01)和流产一次组与流产二次及以上组间(p<0.01)有统计学差异。
结论:MAD2和BUB1基因的蛋白表达在流产组中明显低于人流组,两蛋白的表达随着流产次数的增加而明显降低,其mRNA水平在人流组与流产组间和流产一次组与流产二次及以上组间没有差异。MAD2和BUB1在自然流产胚胎绒毛组织中的低表达表明,MAD2和BUB1可能在胚胎细胞分裂以及胚胎发育过程中起作重要作用。
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