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关键词： 盘丽鱼   胚胎发育   消化道   组织学   消化酶   仔鱼  

摘要： 盘丽鱼(Symphysodon discus)隶属硬骨鱼纲(Osterchthyes),鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Percoidei)、丽鱼科(Cichlidae)、合齿鲷属(Symphysodon),是重要的热带观赏鱼之一。盘丽鱼初孵仔鱼以亲鱼体表粘液为开口饵料,这一特点导致人工饲养成活率较低。目前虽已有学者对这一行为做了一些研究,但尚未弄清生理学机制。本文试图通过对盘丽鱼仔鱼不同阶段消化道发育及开口初期仔鱼的消化酶活力进行观察和分析研究,探讨盘丽鱼仔鱼摄食行为的生理学机制,为选择和研制盘丽鱼仔鱼开口饵料提供参考。主要研究结果如下: 自然受精的盘丽鱼受精卵在水温30±1℃,pH 5.5条件下,受精约50分钟后进入卵裂期,3小时后进入囊胚期,9小时30分后进入原肠期,20小时后胚孔封闭,32小时后肌肉开始收缩,33小时10分后出现心跳,50小时后出膜。其胚胎发育积温为1500±50(℃·h)。盘丽鱼卵裂期、原肠期发育较快,而器官发育期发育相对较慢。 利用光学显微镜对盘丽鱼仔鱼消化系统进行了组织学和形态学观察和比较。发现刚孵化的仔鱼消化道基本没有分化。3日龄时直肠和肠分化,同时可见肝脏和胰脏。4日龄时卵黄囊消失。5日龄-9日龄消化系统形成雏形,7日龄时胃出现,但不具胃腺。肠道皱褶逐渐丰富,粘液细胞数量增多。10日龄后,消化系统逐渐发育完成,至25日龄时消化系统形态上接近成鱼。 对3日龄的仔鱼主要消化酶进行了测定。结果表明,早期仔鱼可检测到胰蛋白酶、胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶这四种酶的活性,但胃蛋白酶活力极低;淀粉酶最适温度为37℃,胃蛋白酶为42℃,胰蛋白酶为32℃,脂肪酶为27-37℃。

关键词： 组织胚胎学   幽门螺杆菌   人胚胎   胃组织   胃癌   心脏   血清  

摘要： 人胚胎早期心脏流出道的发育;胃癌前病变及胃癌患者血清及胃组织幽门螺杆菌的检测及意义

ISBN: (纸本)9787030201973

关键词： 非整倍体   肿瘤   染色体   聚乙二醇   细胞融合   非整倍体   肿瘤   染色体   苦参碱   凋亡   肉瘤  

摘要： 背景与目的 非整倍体是癌细胞的最大遗传特征,非整倍体是指细胞核内染色体数目出现异常。100多年前就有人提出非整倍体是癌症的起因假说,近来越来越多的研究证实这种假说成立的可能性。但非整倍体作为独立因素能否导致肿瘤的发生,目前还没有确切的结论。本实验用人胚胎肌肉细胞进行培养,通过聚乙二醇融合肌肉细胞,以期获得非整倍体细胞,由于聚乙二醇是非致突变物质,在融合过程中不会有基因突变的产生,排除了基因突变的作用,通过此方法获得非整倍体细胞,进一步分析产生的非整倍体细胞能否形成肿瘤,从而对肿瘤产生的诱因-非整倍体学说进行深入研究。 材料和方法 用人胚胎肌肉细胞进行培养,50%聚乙二醇进行细胞融合,观察能否产生非整倍体细胞;利用3-甲基胆蒽(MCA)和秋水仙素(colcemid)联合处理人胚胎肌肉细胞,产生的非整倍体细胞作为阳性对照;未进行任何处理的肌肉细胞作为阴性对照,通过染色体分析和流式细胞仪分析检测非整倍体细胞。对非整倍体细胞进行长期培养,观察细胞能否恶性转化形成肿瘤。 结果 通过流式细胞仪分析发现,通过细胞融合及MCA和秋水仙素(colcemid)处理均产生非整倍体细胞,染色体分析发现这些细胞染色体数目是异常的,产生的非整倍体细胞以亚二倍体为主,少量细胞为超二倍体;而且部分非整倍体细胞短期培养可以增殖,其中一次融合永生化,但均未发生恶变。 结论 聚乙二醇对人胚胎肌肉正常二倍体细胞融合,能够产生非整倍体细胞。长期培养,未发现细胞的恶性转化。 背景和目的 本实验室通过人胚胎肌肉细胞的培养,获得自发恶性转化为肉瘤细胞系,分别命名MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5。本实验对这种自发恶性转化细胞系的染色体变化进行研究,揭示这种肉瘤细胞系的染色体变化特点。 材料和方法 染色体分析转化肉瘤细胞系MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5染色体数目和结构的变化特点。通过流式细胞仪分析进行染色体倍体研究。 结果 肉瘤细胞系几乎所有的细胞核型都存在染色体数目和结构的异常,染色体数目大多在46条以上,结构异常包括环形染色体、线形染色体、双着丝粒染色体和广泛的易位。流式细胞仪分析肉瘤细胞系全部是非整倍体。 结论 MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5肉瘤细胞系是非整倍体细胞,染色体的数目和结构存在大范围的异常。 目的 观察苦参碱(matrine)对体外培养的人肉瘤细胞系MS0812细胞的增殖和诱导调亡作用。 方法 苦参碱处理人肉瘤细胞系MS0812后,应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱和不同作用时间对MS0812细胞的增殖作用的影响,DNA凝胶电泳、TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果 苦参碱对MS0812细胞增殖具有抑制作用,其增殖抑制作用随作用时间延长及药物浓度升高更加明显,具有时间和剂量依赖性。DNA凝胶电泳观察到发生调亡时出现的阶梯状条带;通过TUNEL染色可以发现调亡阳性细胞;流式细胞仪检测可见经苦参碱处理后G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降及低G1期细胞出现,并形成亚二倍体峰(凋亡峰)。 结论 苦参碱在体外对肿瘤细胞系MS0812的生长具有抑制和诱导调亡作用。

ISBN: (纸本)9787117104678

关键词： 内皮细胞   血管平滑肌细胞   胚胎干细胞   聚丙交酯/乙交酯   明胶  

摘要： 目的:在我们已有小鼠胚胎干细胞诱导且经过RT-PCR和免疫组化鉴定血管平滑肌细胞(VSMc)和内皮细胞(EC)种子细胞的基础上,现在探索用诱导的内皮细胞和血管平滑肌细胞,联合种植在经明胶浸润处理的聚丙交酯/乙交酯(PLGA)静电纺丝材料上,进行体外构建小管径组织工程血管。 方法:①先将PLGA用1%明胶处理,并测量明胶浸润处理前后PLGA的接触角。②在明胶处理与否的PLGA片上种植血管平滑肌细胞,60分钟后即用甲苯胺蓝染色法观察材料对细胞的亲和力;用MTT、扫描电镜材料观察经培养1天,3天后细胞在材料上的生长情况。③在片状PLGA材料一侧隔日种植血管平滑肌细胞1次, 3天共2次,再于另外一侧种植内皮细胞1次,并进行联合培养2天后,作H&E和免疫组化检查。④将联合种植了血管平滑肌细胞和内皮细胞的PLGA裹成直经约1mm管状包埋于4周龄的裸鼠皮下,分别于3天,1,3周取出进行HE染色和免疫组化检查。⑤同时用放射免疫法测定单纯种植1次血管平滑肌细胞的A组,单纯种植内皮细胞的B组,联合种植了平滑肌和内皮细胞的C组这三组培养液中内皮素含量。 结果:①处理前的接触角是88.5°,处理后61.5°。②甲苯胺蓝染色见血管平滑肌细胞在材料上密集、均匀分布;扫描电镜观察到1小时细胞开始延展,1天开始长入孔隙中,3天呈多层分布,无序状生长;MTT检测支架上细胞在3天内的增殖情况等同于培养板。③H&E和免疫组化见材料两侧分别分布着血管平滑肌细胞和内皮。④包埋3周后材料结构仍存在,未被降解吸收。在材料周围包裹结缔组织,管壁外侧有多层血管平滑肌细胞,内侧有内皮细胞。⑤内皮素含量在A组为0.82±0.37 pg/ml,B组5.59±1.23 pg/ml,C组4.51±0.59 pg/ml。 结论:①用1%明胶浸润包被处理PLGA后能改善材料的细胞亲和力;②在PLGA上联合种植血管细胞的方法初步构建了具有血管平滑肌细胞和内皮细胞的组织工程血管片;③包埋裸鼠皮下后形成了具有三层细胞结构的组织工程血管。

关键词： 风采   教研室   高职高专学报   优秀学报   组织学与胚胎学  

关键词： Fascin   Ezrin   NGAL   NGALR   胚胎   组织芯片   免疫组织化学  

摘要： Fascin是一种细胞骨架肌动蛋白结合蛋白。Ezrin是一种细胞骨架连接蛋白,属于ERM (Ezrin-Radixin-Moesin)家族。NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是一种分泌蛋白,属于Lipocalin家族,其功能也可能与细胞骨架相关。近10年来,包括我们课题组的系列研究在内的大量实验结果表明,Fascin、Ezrin和NGAL等在乳腺癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌、食管癌和甲状腺肿瘤等多种肿瘤组织中异常表达,与肿瘤细胞的移动侵袭等恶性特征行为表现密切相关。在此基础上,本论文拟研究Fascin、Ezrin和NGAL等细胞骨架相关蛋白,以及NGAL受体NGALR(NGAL Receptor),在人类胚胎以及成人正常组织中的表达模式,以期与在肿瘤组织中的表达情况进行对比,为深入揭示它们的功能提供资料。本文主要采用组织芯片和免疫组织化学实验技术手段,对4-22周胎龄的胚胎和成人组织样本中Fascin、Ezrin、NGAL和NGALR等的表达情况进行了检测。检测结果:1)Fascin的表达,4周胎龄神经管上皮即为阳性,8-12周胎龄小脑皮质和肠管呈现强阳性,胚胎后期与成人阶段的小脑蒲肯野细胞层以及肠腺上皮为阴性;8-12周胎龄肾上腺皮质与髓质强阳性,然而在出生后各期外周球状带阳性,向内逐渐减弱,至髓质完全阴性;淋巴组织中的树突状细胞、复层鳞状上皮的基底层细胞、间充质细胞、血管内皮细胞以及神经细胞(不包括胚胎后期与成人阶段的小脑蒲肯野细胞)等在生长发育过程中均呈现显著阳性,而在正常的胆管、结肠、胰腺和胃部的单层柱状上皮为阴性。2)Ezrin的表达,在胃肠道中广泛阳性,6-8周胎龄主要位于肠管上皮,胚胎后期和成人阶段的胃肠腺上皮细胞刷状缘和胃壁细胞显著阳性;神经中仅4周胎龄神经管上皮阳性;8-12周胎龄肾上腺皮质和髓质强阳性,而后期发育成熟时由外向内逐渐增强,外周球状带弱阳性,网状带强阳性,但髓质阴性;肾脏、脾、淋巴结和复层鳞状上皮阳性,而肺、肝、心脏和血管阴性。3) NGAL的表达,8-12周胎龄肾上腺髓质和肺腺泡上皮阳性,而胚胎后期和出生后各期阴性;4周胎龄神经管阴性,后期生长发育过程中大脑皮层神经细胞尤其是星形细胞阳性;小脑蒲肯野细胞层6月胎龄阴性,出生后各期阳性;脾脏髓质富含中性粒细胞部位、肾小管上皮细胞和胃肠道某些腺上皮细胞阳性,而正常心脏和肝脏阴性。4)NGALR的表达,小脑蒲肯野细胞层6月胎龄阴性,出生后各期阳性;肾小管上皮细胞和胃肠道某些腺上皮细胞阳性,而正常心脏和肝脏阴性。上述结果表明,Fascin、Ezrin、NGAL和NGALR等在人类胚胎以及成人正常组织中的表达具有一定的时间特异性和组织特异性。

关键词： 组织胚胎学   组织学   解剖学   观察能力  

摘要： 观察能力是人生诸多能力中的一个重要方面。它不仅有助于学生在今后的临床实践中很好地观察病人的病情,也能更好地沟通医患关系,化解各种医患矛盾,使工作顺利地开展下去。解剖学与组织胚胎学属于形态学教学,不论是对图的观察,还是对标

关键词： 组织工程皮肤   胚胎成纤维细胞   皮肤缺损   免疫排斥  

摘要： 皮肤软组织缺损是整形和烧伤外科经常遇到的问题,临床上通常采用自体皮或异体皮肤移植进行修复。但由于供区不足、免疫排斥及传播疾病等缺点,寻找一种理想的皮肤替代物一直是临床上一个急需解决的难题。组织工程皮肤的出现为这个问题的解决开创了崭新的方法。目前此类的组织工程皮肤和生物敷料种类繁多,但仍不成熟,存在着皮肤耐磨性差、自体种子细胞来源缺乏、异体种子细胞诱发免疫排斥、培养时间长、治疗费用昂贵等缺点。本研究应用组织工程学原理,在前人研究的基础上,体外扩增同种异体胎儿成纤维细胞作为种子细胞构建三维培养,并用来修复鼠皮肤缺损,同时也在临床观察其治疗效果。为本领域提供了新的思路和方法。 目的 探索人胎儿成纤维细胞(human embryonic fibroblasts,HEF)的培养方法和特性,通过异体淋巴细胞混合试验,揭示培养后不同代的胎儿和普通成纤维细胞免疫原性的变化,探讨HEF作为皮肤组织工程种子细胞的可行性。 探索应用HEF和鼠尾胶原(rat tail tendon collagen,RTT collagen)构建组织工程皮肤的方法,观察其组织结构和分泌特性。 应用构建的组织工程皮肤修复实验动物皮肤缺损,观察治疗效果和修复后组织特点。 最终通过临床应用证明其临床应用的可能性、可靠性和有效性。 方法 采用组织块法、酶消化法培养人胚胎和普通皮肤成纤维细胞,观察获得成纤维细胞数量、细胞形态、细胞活力、生长周期等指标。将不同代数人胚胎和普通成纤维细胞,分别与健康的同种异体志愿者的外周血淋巴细胞混合,建立异体细胞体外免疫排斥模型。通过H3-TdR标记,液体闪烁计数仪检测异体淋巴细胞增殖情况。 将鼠尾胶原溶液、浓缩培养基、NaOH溶液和以血清重悬的普通和胚胎成纤维细胞溶液在适当的比例下混合后形成凝胶构建真皮类似物。HE染色观察其结构。用ELASA法测试三维真皮培养基中的TGF-β1和IL-6的含量。 将胎儿成纤维细胞采用荧光染料Hoechst33342染色后,构建人工真皮,移植于裸鼠背部的全层皮肤缺损,观察其愈合过程。术后示踪胎儿成纤维细胞,并取材做光镜下组织观察和基底膜PAS特殊染色。分离培养SD大鼠胚胎成纤维细胞用上述实验的方法制备三维构建。将培养的人工真皮修复大鼠皮肤全层缺损并用空白鼠尾胶原做对照,观察其愈合过程和病理变化,用免疫组化方法测试创面CD31和波形蛋白的表达。 选取扩张术后皮瓣边缘坏死造成全层皮损的患者12例。部分创面采用制备的胚胎成纤维细胞组织工程皮肤覆盖,选取邻近创面作为对照,对照区采用空白的鼠尾胶原或凡士林油纱布覆盖。治疗期间观察创面有无炎症反应、有无渗出等情况;对患者创面进行有效性及安全性评估;观察创面的愈合情况及不良反应;计算应用部位与对照的愈合时间。 结果 采用酶消化法所获得的细胞数量最大,为7×10～7个/g组织,并且需时短,但细胞形态及活力较差。采用组织块法培养细胞,细胞形态和活力好,适合本研究。与普通成纤维细胞相比,人胚胎成纤维细胞具有生长速度快,分裂指数高,代谢迅速和分泌功能合理的特点。在评价细胞免疫原性的实验中,我们发现普通和胚胎成纤维细胞培养后各代和原代相比,对异体淋巴细胞刺激的增殖作用显著降低,而普通成纤维细胞下降的趋势更明显。胚胎成纤维细胞培养后几乎对异体淋巴细胞无刺激增殖作用。 利用鼠尾胶原做真皮支架形成的人工真皮中成纤维细胞生长状态良好,并且具有一定的组织强度。检测其培养液中的TGF-β1和IL-6,胎儿成纤维细胞组在各个时相上分别显著低于和高于普通成纤维细胞组。 裸鼠动物实验中,术后20日用胎儿成纤维细胞构建的组织工程皮肤覆盖的裸鼠背部创面已愈合,表皮较薄弱。而单纯用空白鼠尾胶原覆盖的创面仍留有痂皮。基底膜PAS染色见实验组表皮真皮之间有连续的基底膜结构。创面荧光标记的细胞量随着时间减少。SD大鼠实验中,病理学检查表明移植TEF skin的大鼠创面上皮化良好,成纤维细胞和胶原排列规则,血管化满意。 临床实验中,患者术后病情平稳,创面无明显炎性反应及渗出。创面愈合时间与应用单纯鼠尾胶原的对照组相比明显缩短2—4天,与应用凡士林纱布的对照组相比缩短8—10天。未见排斥等不良反应。 结论 人胚胎成纤维细胞易于获取,容易培养,性质稳定,培养后几乎无抗原性,是组织工程种子细胞的良好选择。利用鼠尾胶原可以构建真皮类似物,该成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性,成纤维细胞保持着相当的活力,它是继续做应用研究的良好模型。此人工真皮可以满意的修复动物皮肤全层缺损。满意的临床疗效提示,利用胎儿成纤维细胞构建的人工真皮,在未来有较大的研究和应用潜力。