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关键词： 人体结构学   组织学与胚胎学   第二军医大学   出版  

摘要： 该书由米健、朱传桂主编,第二军医大学出版社出版,ISBN978-7-5481-0109-3,16开,定价:29.00元。该书系人体解剖学、组织学与胚胎学3门学科有机的结合,对人体各系统、器官的位置、形态和结构作了较为详细的描述,

关键词： 组织学与胚胎学   医学遗传学   人类遗传学   病理学   基础医学   基础医学课程   实验指导   出版  

摘要： 该书由全宏勋主编,第二军医大学出版社出版,ISBN978-7-5481-0102-4,16开,定价:18.00元。该书是组织学与胚胎学、医学遗传学和病理学3门基础医学课程的实验指导。其目的是希望通过3门基础医学课程的实

关键词： 胚胎干细胞   心肌细胞   工程化心肌组织   基因修饰   血管化  

摘要： 心脏缺血性疾病具有很高的发病率和死亡率,是目前工业化社会人类死亡的首要原因。在全世界范围内,每年都有数万人发生心肌梗死,导致大量心肌细胞死亡,由于心肌细胞再生能力有限,尽管有良好的药物治疗,但仍会继发心力衰竭。目前治疗终末期心力衰竭患者的主要方法是植入左室辅助装置(Left Ventricular Assist Devices,VAD)或心脏移植。VAD主要用于预防左室重塑和扩张,并不能从根本上改善心脏的收缩功能。而心脏移植却受到移植器官来源有限及移植后引发免疫排斥反应等因素的限制。心肌组织工程是一门正在迅速发展的新兴学科,它在体外将细胞与支架材料结合从而制造工程化心肌组织用于修复或再生受损心肌,为治疗心脏缺血性疾病带来了新的希望。但是,心肌细胞来源有限以及体内移植后大量细胞或组织死亡,阻碍了这种策略的实际应用。 胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESC)具有多能性,可在体外无限增殖,又能分化为心肌细胞,是目前用于构建工程化心肌组织最有前途的细胞来源之一。ESC应用于临床的最大障碍之一就是其致瘤性。不仅是ESC的移植会导致肿瘤的生成,ESC来源的分化细胞移植也可能会有肿瘤形成的风险。尽管报道了多种可使ESC分化为心肌细胞的方法,但ESC分化来的细胞中仍然含有大量的非心肌细胞及部分未分化的ESC。如何有效地获取ESC来源的心肌细胞并去除未分化的ESC,是应用ESC来源的心肌细胞构建工程化心肌组织有待解决的难题。此外,体外构建的工程化心肌组织由于缺乏血管网络,其大小受到了限制。大部分的心肌移植物都依赖于宿主发生血管化,对于更厚的组织来说,宿主自身的血管要经过很长一段时间才能生长到移植物内部,在这段时间内由于不能提供移植物充足的毛细血管网,移植物中的细胞由于缺乏营养而发生凋亡或坏死,进而影响心肌移植物发挥功能。针对心肌组织工程所面临的上述问题,本研究采用基因修饰的手段赋予小鼠ESC及其衍生的心肌细胞特异性筛选标记,使之易于纯化ESC来源的心肌细胞以及有效去除未分化的ESC,在此基础上,以液态胶原为支架体外构建高度血管化的心肌组织,探索基因修饰的ESC作为种子细胞构建血管化心肌组织的可行性,相关研究国内外尚未见报道。 我们以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到心肌α-MHC启动子,将心肌α-MHC启动子置换pcDNA3.1(+)-EGFP-hygro载体中的CMV启动子,成功构建出α-MHC-EGFP表达载体。通过电穿孔法将α-MHC-EGFP转染原代小鼠心脏细胞72 h后,在荧光显微镜下可见转染阳性的心肌细胞发出绿色荧光,而非心肌细胞没有出现绿色荧光,证明我们构建的α-MHC-EGFP表达载体具有心肌特异性表达特性。 为了更容易地选择ESC来源的心肌细胞,我们将EGFP筛选标志替换为新霉素抗性基因,成功获得心肌特异性表达载体pMHC-neo/SV40-hygro。将pMHC-neo/SV40-hygro载体转染到小鼠ESC中,成功获得了6株基因修饰小鼠ESC细胞系,其中一株ESC细胞系命名为MN6,不仅能稳定表达转基因,而且增殖迅速且保持未分化状态。转基因pMHC-neo/SV40-hygro的表达不影响ESC向心肌细胞分化,它们具有与野生型ESC相似的发育模式,能够分化出自发跳动的心肌细胞。ESC分化培养物中的跳动区域呈肌钙蛋白T染色阳性,并具有很好的空间相关性。基因修饰的ESC悬浮培养5天形成拟胚体(Embryoid Body,EB),再经抗坏血酸诱导12天后,加入G418筛选6天,选择后的细胞99%以上表达心肌特异性标志α-肌小节肌动蛋白。RT-PCR结果显示,G418选择后的细胞中未检测到Oct-4的表达,表明可能没有未分化的ESC。激光扫描共聚焦显微镜观察和超微结构分析显示,G418选择后的心肌细胞能够表达心肌特异性标志,并具有发育良好的肌原纤维。 对于潜在的实际应用来说,需要建立一种可控的大规模生产ESC来源的心肌细胞的方法。我们尝试采用搅拌式生物反应器培养基因修饰小鼠ESC,通过摸索基因修饰小鼠ESC不同接种密度及生物反应器初始搅拌速度对EB形成的影响,以细菌培养皿常规静态培养的EB为对照,用抗坏血酸诱导其向心肌细胞分化,比较两种培养体系对ESC向心肌细胞分化潜能的影响。与细菌培养皿相比,搅拌式生物反应器能有效控制EB之间发生广泛凝聚,EB形成的效率更高。当ESC的接种密度为2×105个/ml,搅拌速度设定为25 rpm时,通过体外培养5天,搅拌式生物反应器中可形成EB约482个/ml,EB大小相对均一,直径为496±20 m。AO/PI和H&E染色结果显示,搅拌式生物反应器培养的EB中细胞活力更好,没有出现中心坏死。搅拌式生物反应器培养EB的心肌特异性

ISBN: (纸本)9787040285529

关键词： 肿瘤干细胞   CD133   Oct4   肺癌   脊柱转移癌   免疫组化  

摘要： 背景：脊柱转移癌是严重危害人类健康的重要疾患,具有较高的致残率和死亡率。随着各种原发性恶性肿瘤发病率的增高以及各种抗肿瘤疗法的发展,肿瘤患者的生存期得到延长,脊柱转移癌发病率有逐年攀升的趋势。以往报道的恶性肿瘤患者脊柱转移发生率为40%,但近年来估计发生脊柱转移者可高达70%以上。肺癌是我国最常见的恶性肿瘤,肺癌患者往往发现不适而到医院就诊时就已经出现转移,脊柱是肺癌骨转移好发部位之一。肺癌一旦出现脊柱转移,则会破坏脊椎骨质,造成椎体塌陷、椎节不稳,进而造成脊髓及神经根受压迫,导致顽固性疼痛、脊髓神经功能障碍和瘫痪,严重影响患者生活质量和生存期。随着脊柱外科技术的日益成熟,外科治疗逐渐成为脊柱转移癌治疗的重要手段,在切除病灶、解除神经压迫、恢复脊柱稳定方面具有不可替代的作用。然而,由于脊柱转移癌患者生存期有限,手术治疗依然是目前争论较多的领域,尤其是临床上常见的肺癌脊柱转移、肝癌脊柱转移,因其预后较差,五年生存率较低,治疗策略的制定尤为棘手。寻找肿瘤理想治疗的突破口,提高肿瘤治愈的可能性及延长肿瘤患者的生存期,是全球医学界人士共同努力的方向。 随着分子生物学的发展,肿瘤相关基因的研究已经取得了很大的进展。而干细胞(stem cell)是当今生物医学研究中最激动人心的研究领域之一,已经成为继人类基因组大规模测序之后最具活力、最有影响和最具应用前景的前沿学科。干细胞是一类未成熟、未分化的细胞群,在特定的条件下,具有再生各种组织细胞,甚至器官的功能。其特点是具有无限或较长时间自我更新和多向分化能力,同时还保留了非对称复制的生物学表型。大量研究表明,大多数肿瘤起源于肿瘤干细胞,这种细胞具有无限增殖、多向分化和在体内形成肿瘤的能力,并促使肿瘤不断生长,是肿瘤发生、复发和转移的根源。 CD133是肿瘤干细胞的特征性表面标志物之一,在脑肿瘤、肝癌、乳腺癌和结肠癌中已经发现CD133阳性表达细胞的成瘤性比阴性细胞强。Oct4是胚胎干细胞的重要表面标志物,是肿瘤干细胞表达干细胞的主干基因之一。在脑肿瘤、肝癌、乳腺癌、结肠癌、白血病等原发肿瘤的干细胞研究中相继发现了与之发生、预后紧密相关的分子标志物,并成功应用于临床预后判断,有的甚至成为新治疗方法的靶点。目前国内外在转移癌方面研究尚不多,鲜见肿瘤干细胞表达与肿瘤脊柱转移癌关系的报道。 目的：研究肿瘤干细胞标志物CD133和胚胎干细胞标志物Oct4在肺癌脊柱转移肿瘤组织中表达情况；探讨肿瘤干细胞标志物CD133、Oct4及临床指标与肺癌脊柱转移的关系。 方法：选取上海长征医院骨科自1999年1月至2007年12月在长征医院骨科首次就诊,诊断为肺癌脊柱转移,手术切除并经病理证实,有完整术后随访资料的肺癌脊柱转移患者41例,男性29例,女性12例,年龄34-76岁(平均年龄56岁)。配对20例椎旁正常软组织(距离瘤组织2cm)作对照检测,均取自上海长征医院骨科,所有患者手术前均未行原发灶手术及放化疗。采用免疫组织化学SP法,检测肿瘤干细胞标志物CD133及胚胎干细胞标示物Oct4在肺癌脊柱转移肿瘤组织中的表达情况,观察、评定各肿瘤干细胞阳性表达率及表达强度,分析CD133,Oct4表达与患者年龄、组织学类型、组织分化程度、转移癌部位、转移灶数量等参数之间的关系。应用SPSS12.0统计软件分析各个标志物表达相互关系及与脊柱转移生物学行为的关系。 结果：1.41例脊柱转移肿瘤组织中,CD133阳性表达率为90.2%(37/41)；20例正常椎旁组织,4例有阳性表达,阳性表达率为20%。两组比较差异明显(P<0.01)。2.41例肺癌脊柱转移组织中Oct4阳性者16例,阳性表达率为43.2%,20例正常椎旁组织,没有阳性表达。两组比较差异明显(P<0.01)。***133阳性表达与患者性别、年龄、肿瘤转移位置、椎体转移数、病理类型及组织分化程度均无显著性差异(P>0.05)。***4阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤转移位置、椎体转移数、病理类型及组织分化程度均无显著性差异(P＞0.05)。 结论：***133在肺癌脊柱转移肿瘤组织中呈高表达,提示肺癌脊柱转移肿瘤组织中可能存在具有无限增殖、自我更新和多向分化的肿瘤干细胞。Oct4在肺癌脊柱转移肿瘤组织中表达水平高于椎旁正常组织,但表达率较CD133低,其中少量的Oct4阳性肺癌细胞可能且有多能性倾向。***133及Oct4在肺癌脊柱转移肿瘤组织中表达与患者性别、年龄、肿瘤转移位置、椎体转移数、肿瘤的病理类型、组织分化程度等无关,可能与所选标本均为转移肿瘤组织有关,其与转移的关系有待进一步研究。

关键词： 人工流产手术   子宫蜕膜   子宫颈管   组织胚胎学   细胞滋养层细胞   解剖学   绒毛膜  

摘要： 人工流产手术是临床上常用的避孕失败的补救措施,要想顺利进行操作,有效预防术中、术后的并发症,医生必须熟练掌握相关的解剖学知识、组织胚胎学知识,否则,将造成不可挽回的后果。

关键词： 组织特异启动子   荧光报告基因   胚胎干细胞   神经干细胞   基因表达  

摘要： 胚胎干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团(Inner cell mass，ICM)或桑椹胚，是一大类未分化的二倍体多能干细胞，具有自我更新和多向分化潜能[1]，是当前生命科学研究的热点，在发育生物学、遗传学、毒理学和药物筛选及新药开发等研究领域中发挥着日益重要的作用[2]。　　 神经干细胞(neural stem cells，NSCs)是具有高度自我更新能力并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的多潜能细胞。研究表明，NSCs广泛存在于发育期和成年哺乳动物的中枢神经系统(CNS)中。在对人胚胎期NSCs的研究中，已先后从大脑皮质、海马、纹状体、嗅球、侧脑室、室管膜下层、小脑和脊髓等区域分离出NSCs[3]。　　 荧光蛋白报告基因作为分子标签，具有易于检测，灵敏度高;荧光性质稳定;构建载体方便;可直接用于活细胞测定等诸多优点，因此在分析生物技术和细胞内分子示踪方面得到广泛应用，如细菌和病毒学的研究、利用转基因动物进行基因表达的研究、免疫细胞的迁移、细胞凋亡、蛋白质间相互作用、癌症以及药物筛选等。近年研究表明，荧光蛋白标记在干细胞的移植、分离纯化、示踪、定量分析及分化状态的检测等方面也具有良好的应用前景。　　 利用组织细胞特异启动子构建荧光蛋白报告基因载体转染干细胞，报告基因的表达需要特异启动子的激活，通过观察报告基因的表达可以动态追踪干细胞分化过程中相关基因的表达情况，不仅有助于筛选能诱导干细胞体外特异分化的小分子化合物以及具有发育毒性的药物，而且可以纯化特定的组织细胞。　　 有鉴于此，本实验的主要研究思路，是采用外胚层组织特异启动子携带荧光报告基因的载体系统pLV/Final-puro-Tα1-α-tubulin-hrGFP和pLV/Final-neo-GFAP-dTomato转导人胚胎干细胞和小鼠神经干细胞，对转导后的细胞进行诱导分化，对所得到的荧光细胞进行鉴定和分析;因此，本研究主要分为以下二个部分：　　 第一部分：组织特异启动子携带荧光报告基因的载体系统转导人胚胎干细胞及其诱导分化的实验研究。　　 第二部分：组织特异启动子携带荧光报告基因的载体系统转导小鼠神经干细胞及其诱导分化的实验研究。　　 第一部分组织特异启动子携带荧光报告基因的载体系统转导人胚胎干细胞及其诱导分化的实验研究　　 1.1目的：　　 首先通过对分子标记的检测和体内外分化实验及核型鉴定证明由本实验室建系的hES细胞株SYSU-10具有自我更新和多向分化潜能。选取外胚层组织特异启动子携带荧光报告基因的载体系统pLV/Final-puro-Tα1-α-tubulin-hrGFP、pLV/Final-neo-GFAP-dTomato(由本实验室构建)分别转导hES细胞，并使用puromycin、G418分别筛选后获得携带外源基因的纯化的hES细胞，然后加入诱导试剂促进hES细胞向神经元、星型胶质细胞分化，以获得表达Tα1-α-tubulin、GFAP的绿色或红色荧光细胞，并进行相关的鉴定分析。　　 1.2方法：　　 1.2.1SYSU-10细胞生物学特性的分析：对SYSU-10细胞的分子标记及体内外分化能力和核型进行检测。　　 1.2.2通过分次转导的方法将组织特异启动子携带荧光报告基因的载体系统导入hES细胞。转导后第7天开始使用1-5μg/ml puromycin、300μg/ml G418筛选14天以获得带有表达载体的纯化的hES细胞。　　 1.2.3加入各种诱导试剂促进hES细胞向神经元、星型胶质细胞分化，以获得表达Tα1-α-tubulin、GFAP的绿色或红色荧光细胞，并进行免疫组化和功能染色等的相关鉴定分析。　　 1.3结果：　　 1.3.1SYSU-10细胞碱性磷酸酶染色为强阳性，镜下见克隆中细胞密集区出现紫黑色颗粒，作为对照的饲养层细胞不能被染色。SYSU-10细胞免疫荧光细胞化学检测结果显示SYSU-10细胞的OCT-4、SSEA-4及TRA-1-60表达强阳性。SYSU-10细胞自然分化过程中，可见表达Albumin的内胚层细胞，表达Nestin的外胚层细胞，表达Desmin的中胚层细胞。体内分化实验，将裸鼠处死并取出肿瘤(均具有完整包膜)，进行石蜡切片和HE染色，可见三个胚层来源的细胞类型。SYSU-10细胞核型正常，为46，XX。　　 1.3.2慢病毒转导7天后，加入1-5μg/ml puromycin、300μg/ml G418开始筛选，可以观察到有大量细胞死亡。筛选两周后，可以得到具有抗性的携带载体系统的纯化的hES细胞。　　 1.3.3加入各种诱导试剂促进hES细胞向神经元、星型胶质细胞分化，获得了表达Tα1-α-tubulin的绿色荧光细胞，通过相关鉴定分析来源于转导Tα1-α-tubuli

关键词： Engineering   Biomedical   Biophysics   Biomechanics  

摘要： Embryonic development involves a fundamental biomechanical process that constructs complicated three-dimensional tissue structures through massive cellular movements. During early gastrulation stages, polarized cell intercalation movements drive the dramatic extension of the Xenopus laevis frog embryo in the anterior-posterior direction. How those individual cellular protrusive forces integrate to produce the bulk force at the tissue level remains unknown. Furthermore, the embryo is shaped not only by active forces, but also by the mechanical properties such as the viscoelastic properties of the constituent tissues. Although rapid progresses have been made to identify the genes or proteins involved in this process, there is much less known about mechanical roles of the genes and proteins in the process. By investigating the contribution of subcellular-, cellular-, and tissue-level structures to the tissue mechanical properties, we found that, on the tissue-level, there were large temporal and spatial variation in tissue stiffness of dorsal isolates and the stiffness was largely dependent on paraxial mesoderm tissues, while notochord tissue, which has been proposed to support the early embryos, was not a major contributor to the tissue mechanics. On the cellular-level, the mechanical properties of dorsal isolates were mainly dependent on cells, but not their ECM. On the subcellular-level, the mechanical properties of the embryonic cells were determined by actin and myosin II contractility, while microtubules indirectly controlled the tissue stiffness by regulating actomyosin network through a Rho-GEF mediated signaling pathway. In order to measure the tissue extension forces, we developed a high throughput technique combining imaging techniques and finite element models. Using this technique, we identified two cases of mechanical adaptation. In the first case we found that dorsal axial tissues generated less force to compensate for their own lower mechanical resistan

ISBN: (纸本)9787030297457

关键词： 宠物   解剖   组织胚胎   教学模式   教学内容  

摘要： 高职宠物解剖组织胚胎课程针对宠物临床疾病诊疗防控和养护类岗位工作内容的需要及其变化,改革基本知识教学、实验教学、单项实训和课程综合实训教学。将常见宠物的大体解剖、组织构造及胚胎发育过程设计为组织胚胎基础、犬猫体壁、犬猫内脏、犬猫的其它器官系统、鸽和鱼的解剖组织和实验实训六个部分教学内容,进行教材改革与建设和课件开发。新教材将理论教学和实验教学相结合,将大体解剖、组织和胚胎内容相结合,更加注重应用技能训练、具体形态结构、大体解剖、实地解剖和真实性材料的利用。