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关键词： 组织学与胚胎学   工作实践   诊断与改进  

摘要： 为贯彻落实《教育部关于深化职业教育教学改革全面提高人才培养质量的若干意见》《关于印发<高等职业院校内部质量保证体系诊断与改进指导方案(试行)>启动相关工作的通知》和《湖南省高等职业院校内部质量保证体系诊断与改进工作实施方案》等文件精神,不断深化学院职业教育教学改革,全面提高学院人才培养质量,根据《长沙卫生职业学院内部质量保证体系建设与运行工作实施方案(2016—2018年)》,各课程团队积极开展课程诊断与改进(以下简称诊改)工作,制定课程目标、标准,建立课程诊改质量递进螺旋,全面提升课程建设质量。

关键词： 胚胎停育   FMR1基因(CGG)n重复数目   脆性X综合征   VEGF因子   PD-1因子   PD-L1因子   PEG10因子   滋养层细胞  

摘要： 胚胎停育(embryo demise）是一种严重影响妇女身心健康的疾病，有统计认为其占早期妊娠的10%-18%，且随着二胎政策的放开及高龄产妇的增加，发病率有逐年上升的趋势。胚胎停育病因复杂［1］，包括遗传因素、免疫因素、解剖异常、内分泌异常、感染等，在各种致病因素中，胎儿遗传因素、免疫因素、内分泌异常是导致胚胎停育最主要的三大原因。脆性X智力低下基因5′端非翻译区的(CGG)n串联重复序列异常扩增，可导致卵巢功能不全和胎儿隐性或显性的发育障碍，甚至是胎儿畸形，是除唐氏综合征外的第二大胎儿染色体致智力低下因素。此外，携带有脆性X智力低下基因妇女可能造成潜在风险的卵巢功能障碍，对于女性的生殖功能造成影响,而且非整倍体妊娠流产的发生率高［2］。据此推测，胚胎停育可能与脆性X智力低下基因5′端非翻译区的(CGG)n串联重复序列异常扩增相关。另据报道，母胎界面绒毛组织中VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10四种因子对于滋养细胞的最佳增殖和建立足够的母婴循环、子宫内膜血管化、胚胎植入和发育、胎儿血管生成发育［3］，母胎免疫耐受的建立［4］、胎盘及胎儿的发育至关重要［5］。我们通过试验检测了绒毛组织中上述四因子的表达情况，试图解释其与FMR1(CGG)n串联重复序列异常扩增及其与胚胎停育的相关性，为进一步研究胚胎停育的病因提供新的思路。　　本研究通过AmplideX FMRl PCR 方法检测胚胎停育患者及正常对照组的FMR1基因（CGG）n重复数目，应用组织芯片-免疫组化技术检测其绒毛组织中VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10四种因子的表达及分布，同时收集相关的临床资料、性激素水平进行分析，探讨胚胎停育患者FMR1基因（CGG）n重复数目，绒毛组织中VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10的差异性表达和性激素水平与胚胎停育的关系，并分析FMR1基因（CGG）n重复数目、上述四因子、性激素水平之间的联系性。　　选取2017.06-2018.11之间在空军特色医学中心妇产科就诊的98例胚胎停育患者做为病例组，选取与之孕周匹配的108例正常产检的健康孕妇做为对照组。应用AmplideX FMRl PCR方法对两组孕妇的X染色体进行扩增，检测其（CGG）n重复数目。应用组织芯片-免疫组化技术检测绒毛组织中VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10表达情况，并收集相关的临床资料及绒毛膜促性腺激素（HCG）、雌二醇（E2）、孕酮（P）水平进行分析。　　经AmplideX FMRl PCR方法检测得出：病例组及对照组FMR1 （CGG）n重复数目频率最高分别为30和29，两组FMR1（CGG）n重复数目最高值及均数均无统计学差异（P值分别为0.642、0.450），还对于FMR1（CGG）n数目高于34进行了单因素分析，病例组与对照组之间亦无统计学差异。病例组有2例中间基因型（49/36、45/30）、1例全突变（200/97/30），对照组有2例中间基因型（45/30、46/20）、1例前突变（ 67/29 ） ，且全部是两组中等位基因2发生了突变。经Pearson correlation分析，等位基因2（CGG）n重复数目与胚胎停育的性激素（HCG、E2、P）水平差异无显著性（P值分别为0.694、0.517、0.620）。　　经组织芯片-免疫组化技术检测，VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10在两组绒毛组织中均有不同程度上的表达，且在病例组绒毛组织中表达水平明显低于对照组。VEGF在病例组及对照组绒毛组织中的阳性率分别为40%、90%;PD-1在病例组及对照组绒毛组织中的阳性率分别为12.5%、90%;PD-L1在病例组及对照组绒毛组织中的阳性率分别为12.5%、97.5%;PEG10在病例组及对照组绒毛组织中的阳性率分别为25%、85%.VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10四组因子的阳性率应用统计学分析显示卡方值分别为32.618、53.308、71.158、42.856，P值均小于0.01，有统计学意义;经Pearson correlation分析，等位基因2（CGG）n重复数目与两组绒毛组织中VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10的表达水平无相关性（P值分别为0.326、0.351、0.463、0.620）。　　综上所述，本研究通过应用AmplideX FMRl PCR方法检测胚胎停育患者FMR1等位基因（CGG）n重复数目，及应用组织芯片-免疫组化方法检测VEGF、PD-1、PD-L1、PEG10在胚胎停育患者绒毛组织中的表达，得出的结论为：1、胚胎停育患者与正常对照组均检测到两例等位基因2的突变，但两组FMR1（CGG）n数目无显著性差异。胚胎停育与FMR1（CGG）n数目无直接相关性。2、发生胚胎停育时HC

关键词： 组织胚胎学   课程内容   教学方法   考核方式   改革  

摘要： 组织胚胎学是一门将组织学和胚胎学有机结合的学科,在多个专业的本科教学中具有重要地位。本文分析了目前组织胚胎学课程教学中课堂内容缺少更新、教学方法单一、考核方式单一等问题,并从课程设计、教学方法和考核方式三个方面相应地提出了具体的改革措施,为该门课的本科教学提供参考依据。

关键词： 水曲柳(Fraxinus mandshurica)   超低温保存   胚性愈伤组织   体细胞胚胎   生理生化  

摘要： 水曲柳(Fraxinus mandshurica)属木犀科白蜡树属,是我国东北地区重要的珍贵阔叶树种。直接体细胞胚胎发生体系的建立为解决其无性繁殖提供了新途径,但存在同步化效果差、畸形胚发生率高、优良遗传材料难长期保存的问题。本研究以水曲柳成熟和未成熟合子胚子叶为材料,建立水曲柳间接体细胞胚胎发生体系和优良遗传资源的超低温保存技术体系,并分析超低温保存前后保存材料的相对存活率和生理生化差异。主要结果如下:(1)水曲柳胚性愈伤组织诱导培养基为添加5.0 mg L-1 NAA和2.0 mg·L-1 6-BA的MS1/2培养基,成熟合子胚子叶的胚性愈伤组织诱导率为11.7%,未成熟合子胚子叶的胚性愈伤组织诱导率为9.7%。胚性愈伤组织继代增殖培养基为添加0.1 mg·L-1 6-BA和0.15 mg L-1 2,4-D的WPM培养基,愈伤组织增殖系数为1.54。体胚发育培养基为添加1.0 mg.L-1 ABA的MS1/2培养基,体胚诱导率为55%。萌发生根培养基为添加0.01 mg·L-1NAA的1/3MS培养基,体胚生根率为37.5%,萌芽率26.39%,最终驯化移栽形成完整植株。(2)选取继代增殖培养7～10 d生长旺盛的胚性愈伤组织,在0.4 mol L-1蔗糖溶液中室温下预培养20 h,后添加7.5%的DMSO溶液在0℃C下脱水60 min,置于-80℃C超低温冰箱中以-1℃C/nmin降温速度冷冻4 h,迅速投入液氮中保存。保存24 h后的材料在40 ℃C水中化冻2 min,相对存活率为44.95%。(3)脱水时间和冷冻方式以及二者的交互作用对超低温保存前后水曲柳合子胚的活力和生理生化指标具有显著影响。随着脱水时间的延长,未经冷冻保存合子胚的脱氢酶活性逐渐减低,MDA含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量和抗氧化酶活性逐渐上升;经不同冷冻方式保存后合子胚的MDA含量逐渐降低,而脱氢酶活性、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量和抗氧化酶活性逐渐升高。当脱水时间为120 min,利用快冻法保存后的合子胚活力最高,其生理生化指标与其他处理相比达到差异显著水平。因此,水曲柳合子胚适宜的超低温保存方法为干燥脱水120 min后的合子胚利用快冻法进行超低温保存,保存后的相对存活率为62.26%。此方法也适用于水曲柳体细胞胚胎的超低温保存,保存后的相对存活率为51.68%。

关键词： 微囊藻毒素-LR   联合暴露   斑马鱼   肾毒性   孵化率  

摘要： 水体富营养化使得蓝藻水华大规模暴发。蓝藻水华的次生代谢产物蓝藻毒素对水环境和水生生物健康造成严重威胁。微囊藻毒素(Microcystins,MCs)是蓝藻毒素中最常见的一种,而微囊藻毒素-LR(Microcystins-LR,MCLR)是MCs中分布最为广泛且毒性最强的一种毒素。针对MCLR对环境及人类的潜在危害,本实验以斑马鱼为实验对象,探讨了MCLR对斑马鱼肾脏组织和子代孵化率的影响及其机制。主要实验结果如下:1.在肾脏毒性实验中选取三月龄雌性斑马鱼作为实验动物并对其进行60 d的慢性暴露,暴露浓度为0、1、5和25μg/L。研究表明环境相关浓度MCLR(5和25μg/L)暴露60 d后会引起雌性斑马鱼肾脏的肾小管上皮细胞的细胞浆减少,细胞核变大,细胞聚集和坏死,肾小管间距减小等。通过转录组技术探究MCLR暴露后对雌性斑马鱼肾脏的基因调控情况,与对照组相比,MCLR暴露(25μg/L)使514个基因上调,9937个基因下调。此外,GO聚类分析表明MCLR可改变细胞器膜结构,导致细胞内的DNA和蛋白质的合成与运输紊乱。KEGG通路富集分析显示多个可导致氧化损伤和细胞凋亡的通路,如氧化磷酸化通路、细胞周期通路和内质网加工通路发生显著性变化。我们推测MCLR引起雌性斑马鱼肾毒性的主要原因是氧化损伤诱发的细胞凋亡。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminal deoxynucleotide transferase-mediated deoxy-UTP nick end labelling,TUNEL)染色分析,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平变化和凋亡因子p53、bax、bid、bcl-2、caspase-3、caspase-8和caspase-9的基因、蛋白表达变化以及酶活性变化证明MCLR可以引起雌性斑马鱼肾脏氧化损伤和凋亡。实验结果表明MCLR可以对雌性斑马鱼的肾脏造成损伤,氧化损伤所引起的细胞凋亡是导致肾脏损伤的主要原因。2.在MCLR影响孵化的实验中,我们选取三月龄斑马鱼作为实验生物,并对其进行为期45天的暴露,暴露浓度为0、0.9、4.5和22.5μg/L。研究结果表明MCLR可通过母体传递到子代胚胎,并引起子代斑马鱼胚胎孵化率降低。进一步的研究结果表明,MCLR母体暴露引起子代胚胎孵化率降低的主要分子机制是(1)MCLR暴露引起子代胚胎孵化酶的活性降低,影响了绒毛膜的分解,导致孵化率降低;(2)MCLR暴露导致子代胚胎孵化腺发育基因表达水平下调,可能影响了孵化酶的分泌最终导致胚胎的孵化率降低。此外,我们又探讨了环境中大量存在的,有吸附能力的纳米聚苯乙烯(Nano Polystyrene,NPS)与MCLR联合暴露母体后对子代斑马鱼胚胎孵化的影响及其机制。实验结果表明,与单独暴露相比,NPS与MCLR联合暴露导致子代胚胎的MCLR累积量进一步升高,使子代斑马鱼胚胎的孵化率进一步降低。结果表明NPS可以通过母体传递到子代并可以吸附MCLR,加剧了MCLR的生物毒性,与MCLR具有协同毒性效应。

关键词： SMO   肝癌   胚胎   免疫组化  

摘要： 目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase)在小鼠胚胎肝中表达随着时间变化的规律和在不同分化程度肝癌组织中的表达及其可能的临床意义。方法采用免疫组化法检测并分析小鼠胚胎肝切片和人肝癌组织中SMO表达规律并分析其与肝癌临床病理特征的关系。结果 SMO随着天数的增加,SMO阳性细胞率不断降低,且出生前与出生后表达具有统计学差异,肝癌组织SMO阳性表达率为73.53%,与肿瘤大小、分化程度以及患者年龄、性别无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SMO在小鼠胚胎肝中随着时间增加表达逐渐降低,可能可以作为检测胚胎发育的一种潜在标记物。

ISBN: (纸本)9787564184506

关键词： 胚胎停育   细胞凋亡   caspase3   caspase7  

摘要： 目的:通过对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细胞凋亡情况进行检测,同时以标记分子Caspase3、标记分子Caspase7对胚胎早期停育患者(胚胎停育组)和正常早期妊娠妇女(正常妊娠组)的绒毛组织中细胞凋亡情况进行检测,探讨Caspase3和Caspase7蛋白在停育胚胎绒毛组织中的表达意义。方法:选取2017年02月至2019年01月于皖南医学院第一附属医院弋矶山医院及皖南医学院第二附属医院人流室收集的确诊为早期胚胎停育行人工流产术的胚胎绒毛组织21例,作为胚胎停育组;同时期正常早期妊娠要求行人工流产术终止妊娠的胚胎绒毛组织21例,作为正常妊娠组。运用HE染色法结合光学显微镜对两组绒毛组织进行镜下观察;TUNEL法对两组绒毛组织进行凋亡实验;免疫组织化学-SP法对caspase3和caspase7的表达进行定位;蛋白质免疫印迹法(Western blot)对两组绒毛组织的caspase3、caspase7的表达做定量分析。结果:1.两组妊娠妇女的年龄、月经周期、妊娠天数、孕次未发现统计学差异(P>0.05)。***染色:正常妊娠组的绒毛组织镜下结构清晰,易于辨认,细胞排列整齐。胚胎停育组绒毛组织镜下结构较清晰,细胞排列稍紊乱。***法:凋亡细胞分布于绒毛滋养层细胞间和/或间质内。正常妊娠组的绒毛内着色较少,分布于绒毛滋养层细胞间;胚胎停育组绒毛内成片着色,颜色较深,明显多于正常妊娠组,分布于绒毛滋养层细胞间和间质内。4.免疫组织化学-SP法:两组标本Caspase3蛋白的表达:(正常妊娠组:0.29±0.05,胚胎停育组:0.59±0.07,P<0.05),Caspase7蛋白的表达也有统计学差异(正常妊娠组:0.22±0.04,胚胎停育组:0.32±0.08,P<0.05)。*** blot:胚胎停育组绒毛组织中Caspase3蛋白(0.033±0.003)及Caspase7蛋白(0.023±0.004)的表达明显高于正常妊娠组Caspase3蛋白(0.023±0.002)及Caspase7蛋白(0.014±0.002)的表达,差异有统计学区别(P<0.05)。结论:***3可能通过凋亡路径参与了对早期胚胎停止发育的调控。***7可能通过凋亡路径参与了对早期胚胎停止发育的调控。***3和Caspase7或可作为早期妊娠期间筛查胚胎停止发育病因的分子标记物。4.由于胚胎停止发育的病因复杂,有必要进一步研究以期为将来临床诊疗提供依据。

关键词： 人体组织学   实验   高等学校   教材  

ISBN: (纸本)9787030596352

摘要： 全书共20章，书末为附录。本书在照顾整个知识体系的同时，部分打破了理论教材的章节限制，使有关内容有机融合，减少标本的重复观察，节省学时，使知识融会贯通。本书重在编写精炼和实用，对结构的描述，尽量符合标本的实际情况，并配以适当彩图。每个单元提出与实验密切相关的思考题，附有镜下绘图指导，并附有英文词汇，对学生观察标本、完成实验报告、提高综合能力，起到指导作用。

关键词： 长角血蜱   胚胎发育   卵黄蛋白   组织蛋白酶D  

摘要： 蜱为一类专性吸血的体外寄生动物,寄生于哺乳类、鸟类、爬行类和两栖类,传播真菌、细菌、立克次氏体、病毒、螺旋体和等病原体,引起寄主多种疾病,如细菌性疾病、森林脑炎、Q热、出血热、蜱媒斑点热和莱姆病等。卵黄蛋白是一种血红素结合糖脂蛋白。在胚胎发育中作为营养源,通过程序性降解,提供卵发育所需的氨基酸、糖和脂类等,这一过程需要多种酶参与。有关酶与卵黄蛋白和胚胎发育的研究主要集中在昆虫,蜱类中仅在微小扇头蜱有报道。组织蛋白酶D属于天冬氨酸蛋白酶,是一种重要的酸性水解酶。组织蛋白酶D与卵黄蛋白间的关系在长角血蜱中尚未研究。本论文以长角血蜱为对象,运用DNA测序、qPCR技术、生物化学、分子生物学和统计学等方法,对其胚胎发育过程中组织蛋白酶D的变化及其在卵黄蛋白降解中的作用进行了研究。组织蛋白酶D表达量结果显示,胚胎发育1～9天表达量弱,第11天显著增加且达到峰值,11天后逐渐下降。酶活性结果显示,组织蛋白酶D在胚胎发育整个阶段均有活性,1～5天呈下降趋势,7～13天急剧上升,13天最高,13～17天逐渐下降。干扰饱血和饥饿雌蜱中组织蛋白酶D基因,饱血雌蜱产卵量(0.13 g)与对照组无明显差异,卵的孵化率(57.22%)与对照组(88.53%)差异显著,表明在饱血期干扰组织蛋白酶D基因可影响卵的孵化。饥饿雌蜱产卵量(0.09 g)与对照组无显著差异,孵化率(65.38%)与对照组(84.97%)有明显差异,说明在饥饿期干扰组织蛋白酶D基因影响卵的孵化。提取13天卵粗提物与不同浓度组织蛋白酶D和组织蛋白酶D抑制剂PepstainA孵育,结果表明组织蛋白酶D对卵黄蛋白降解有作用且呈现剂量关系。1 U的组织蛋白酶D对卵黄蛋白降解无影响,3 U对卵黄蛋白降解有影响,6 U时卵黄蛋白几乎全部被降解。与组织蛋白酶D抑制剂孵育后,卵黄蛋白降解受到抑制,说明组织蛋白酶D参与卵黄蛋白降解。上述研究结果为深入阐明蜱类胚胎发育中酶的调控提供依据。