关键词:
创伤后应激障碍
恐惧记忆
5-HT1A
Rac1
桑螵蛸散
摘要:
第一部分:恐惧记忆是人或动物遭受威胁性、灾难性刺激时产生的一种记忆,适当的恐惧可以使机体能够更好的适应环境,但过度的恐惧会导致恐惧障碍相关疾病的发生,如创伤后应激障碍。研究发现5-HT系统对情绪记忆,特别是恐惧记忆有重要的调节作用。我们课题组前期研究发现海马Rac1活性调节大鼠背景恐惧记忆的遗忘,5-HT2A受体可调节海马Rac1的活性且两者间有相互作用。大量研究表明5-HT1A受体也参与恐惧记忆的调节,但恐惧学习后海马5-HT1A受体表达变化及下游分子目前没有完全研究清楚,5-HT1A受体是否也能影响海马Rac1的活性仍未知。本课题对此问题进行探讨。目的:探讨背景条件恐惧学习后海马5-HT1A受体的表达变化及其是否通过调节海马Rac1的活性影响大鼠的恐惧记忆。方法:(1)SD大鼠条件背景恐惧学习后免疫组织化学和Western blot(WB)检测海马5-HT1A受体的表达。(2)SD大鼠分三组,海马CA1分别予vehicle+vehicle,vehicle+WAY100635(5-HT1A受体拮抗剂)或WAY100635+NSC23766(Rac1抑制剂)后,检测海马Rac1的活性。(3)免疫共沉淀检测5-HT1A受体与Rac1之间是否有相互作用。(4)大鼠海马CA1分别予vehicle+vehicle,vehicle+WAY100635或WAY100635+NSC23766药理学干预后进行条件恐惧记忆学习,学习后24h进行恐惧记忆的检测。结果:(1)条件恐惧记忆学习后免疫组织化学和蛋白印迹实验显示大鼠海马5-HT1A受体表达上调。(2)海马CA1分别予Vehicle+Vehicle(V+V),Vehicle+WAY100635(V+W)或NSC23766+WAY100635(N+W)后,WB实验结果显示与对照组相比,Vehicle+WAY100635(V+W)组海马Rac1的活性增高(p<0.05),NSC23766+WAY100635组海马Rac1的活性降低(p<0.001)。(3)免疫共沉淀检测5-HT1A受体与Rac1之间存在有相互作用。(4)三组大鼠条件恐惧学习成绩类似,24h提取结果显示与对照组相比,Vehicle+WAY100635组的僵立时间(freezing time)降低(p<0.01),NSC23766+WAY100635组僵立时间与对照组相似。结论:(1)大鼠条件恐惧学习后海马5-HT1A受体的表达上调,伴随着恐惧记忆增强。(2)CA1区予5-HT1A受体拮抗剂后,海马Rac1活性上调,Rac1抑制剂可抵消5-HT1A受体拮抗剂导致的海马Rac1活性的上调。(3)5-HT1A受体与Rac1之间存在有相互作用。(4)抑制海马5-HT1A受体诱发大鼠条件恐惧记忆减弱,抑制海马Rac1活性可消除5-HT1A受体拮抗剂所致的大鼠恐惧记忆减弱。以上结果提示5-HT1A受体通过调节海马Rac1的活性影响大鼠的背景恐惧记忆。第二部分:桑螵蛸散由桑螵蛸、远志、龙骨、人参、茯神、当归、龟甲组成,是祖国医学治疗恐症的经典名方,但其作用机制不十分清楚。海马为学习记忆的关键脑区,研究发现恐惧应激可导致海马结构及功能改变,逆转其变化有助于动物恐惧记忆的清除。我们推测桑螵蛸散可能影响海马的可塑性而发挥作用,为证实此推测我们进行了以下实验。目的:探索桑螵蛸散对大鼠背景条件恐惧记忆形成的作用及潜在机制。方法:成年的雄性SD大鼠随机分成两组,分别灌胃予桑螵蛸散(0.425g/kg)或vehicle一周,后进行大鼠3次0.4m A持续1s的足底电击条件恐惧学习,学习后24h提取。部分大鼠学习前取海马行蛋白印迹实验和免疫组织化学染色,检测学习记忆相关的分子p-CREB、c-fos、p-Pak1、Rac1-GTP的表达变化。结果:(1)与对照组相比,桑螵蛸散组大鼠海马的CA1区(p<0.001)、CA3区(p<0.001)、DG区p-CREB表达上调(p<0.01),CA3区c-fos表达上调(p<0.001);p-Pak1、Rac1-GTP的表达无差异。(2)行为学结果显示桑螵蛸散组大鼠第3次恐惧学习后僵立时间(freezing time)低于对照组(p<0.05),24h提取成绩桑螵蛸散与对照组相比无差异。结论:桑螵蛸散可诱发海马p-CREB、c-fos表达上调,并对大鼠的恐惧学习有抑制作用。