关键词：
牡丹花粉
成分分析
良性前列腺增生
PI3K
AKT
摘要：
良性前列腺增生(BPH),是中老年男性常见的泌尿系统疾病。男性多于40岁开始发病,随着年龄的增高发病率也逐渐增加,尤其是人口老龄化的加快时期,预测未来BPH人数会持续性增长。目前,临床上用于治疗BPH药物具有靶点明确,疗效单一的特点;但同时也伴随着严重的副作用,如阳痿、性欲下降、逆行射精等。因此,从中药中找寻具有高效低毒治疗BPH的药物就显得尤为重要。牡丹花作为我国的国花,不仅具有观赏价值,而且具有较高的药用价值,牡丹的根皮“丹皮”就是中医临床常用的一味中药。近年来牡丹籽、牡丹花瓣也被开发应用于食品和药品中,而牡丹花粉却鲜见研究。我国牡丹种植已超过300万亩,牡丹花粉的资源多,但实际开发利用很少,大量资源被废弃。本文对牡丹花粉中化合物进行初步提取、分离、纯化、分析,采用睾酮诱导的去势前列腺增生大鼠模型评价了牡丹花粉对BPH的抑制作用,旨在为牡丹花粉的开发和利用提供理论和数据支持。1.提取分离出牡丹花粉中含量较高的3个化合物,并对其进行结构表征。采用制备高效液相色谱法、LC-MS和NMR,对牡丹花粉中3个高含量化合物进行分离、纯化和结构表征。结果表明,化合物1的分子量为670,紫外最大吸收波长为357nm,根据H-NMR和C-NMR数据对比分析,确定化合物1为柠檬黄素-3-O-槐糖苷。化合物2的分子量为599,紫外最大吸收波长为297nm,C-NMR分析显示其核磁C信号成组出现,推测该化合物可能为对映异构体,结构未知,暂且将其命名为MTP-1。化合物3的分子量为583,紫外最大吸收波长为295nm,NMR分析显示其核磁C谱信号同样成组出现,推测该化合物可能也为对映异构体,结构未知,暂且将其命名为MTP-2。2.牡丹花粉中含有11种主要化学成分。采用高效液相色谱法对牡丹花粉中所含主要化学成分进行了检测和定量分析。结果表明,牡丹花粉中11种化合物和含量分别为:即芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(0.366mg/g)、没食子酸(0.656mg/g)、氧化芍药苷(4.051mg/g)、芍药苷(5.962mg/g)、野漆树苷(0.28mg/g)、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(0.795mg/g)、木樨草苷(0.369mg/g)、芦丁(0.53mg/g)、柠檬黄素-3-O-槐糖苷(18.987mg/g)、MTP-1(9.347mg/g)、MTP-2(35.588mg/g)。3.牡丹花粉能够对睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生发挥显著的抑制效果。睾酮诱导去势大鼠造成前列腺增生模型,在诱导的同时给予牡丹花粉低剂量(0.5g/kg)、中剂量(1g/kg)和高剂量(2g/kg)进行治疗,前列康(QLK)和保列治(BLZ)作为阳性药,各组连续灌胃给药4周。结果发现,模型组大鼠的前列腺指数和前列腺体积均显著高于正常对照组;从前列腺病理切片可见,模型组大鼠前列腺上皮有明显的增厚,上皮细胞多层排列,表面粗糙。牡丹花粉高、中、低剂量组与模型组相比,前列腺体积、前列腺指数和前列腺上皮厚度均显著减小;其中牡丹花粉高剂量组病理改善最为明显,前列腺上皮几乎恢复到正常状态;牡丹花粉高剂量和中剂量均可显著降低了大鼠血清中性激素的含量。4.牡丹花粉抑制前列腺增生的作用机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。利用蛋白质印迹法测定了大鼠前列腺中AR、PCNA、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白的表达。结果显示,在用雄激素诱导的BPH大鼠前列腺中AR和PCNA的蛋白表达明显高于正常组大鼠;高、中、低剂量牡丹花粉组、前列康和保列治治疗后,均降低了前列腺中AR和PCNA的蛋白表达水平。此外,牡丹花粉中剂量和高剂量组均显著降低了p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的比值。说明,牡丹花粉可明显抑制激活的PI3K/AKT信号通路。5.存在于牡丹花粉中的MTP-2以及五没食子酰葡萄糖,可能是对良性前列腺增生抑制的关键活性成分。采用WPMY-1和RWPE-1两种细胞系评价了花粉中11种化合物的活性。证实MTP-2对WPMY-1细胞活力的抑制最强;而五没食子酰葡萄糖对RWPE-1细胞活力的抑制最强;它们的IC50值分别为1.955μg/m L和3.554μg/m L。2μg/m L的MTP-2对由丙酸睾酮诱导的WPMY-1细胞的增殖具有显著抑制活性;使用低剂量即0.5μg/m L的MTP-2可使丙酸睾酮诱导的WPMY-1细胞活力基本恢复到正常程度。结论:牡丹花粉化学成分复杂,目前仅明确其中11种化学成分;牡丹花粉对睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生具有显著抑制作用,其机制可能与降低体内激素水平,抑制PI3K/AKT信号通路相关。
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