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关键词： 肝炎病毒,丙型   突变   变异   准种  

摘要： 丙型肝炎病毒（HCV）的研究是1989年由分子生物学专家首先取得突破的。以经血传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）恢复期血清作为抗体，对用NANBH实验感染的黑猩猩肝组织、胆汁等含有病毒的材料制备的表达型噬菌体文库进行筛选，获得HCV的第一个基因片段，进而克隆HCV全基因，由此表达的重组抗原组装的测定抗-HCV的酶免疫（EIA）试剂，以及据此设计的HCV RNA定性、定量诊断技术，一直沿用至今。因此，HCV基因克隆化的成功对于HCV以及丙型肝炎的研究具有非常重要的意义。

关键词： 脑炎   病毒性   肠道病毒属   逆转录聚合酶链反应  

摘要： 目的探讨对病毒性脑炎患者的脑脊液(CSF)进行肠道病毒(EV)逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测的临床诊断和治疗意义。方法用1对针对EV多数血清型的特异性通用引物组建的逆转录-聚合酶链式反应对43例临床诊断为病毒性脑炎患者的CSF进行临床检测,同时观察这些患者的临床症状、体征、脑脊液生化常规及病毒其他病原体检查,头颅影像学和脑电图检查,用t检验进行统计学分析。结果CSF肠道病毒逆转录-聚合酶链式反应(EVRT-PCR)阳性者18人,占41.9%,临床症状、病情轻重与阴性者无明显差异,CSF蛋白和细胞数较高,可同时合并血中其他病毒(单纯疱疹病毒、巨细胞病毒)抗体阳性。结论EV引起的病毒性脑炎发病率高,并可合并其他病毒感染,EVRT-PCR与血清学检查结果存在不一致性,EVRT-PCR检查结果可指导临床诊断和针对性用药。

关键词： 乙型肝炎病毒   基因型   临床表型   限制性片段长度多态性  

摘要： 目的探讨莱芜地区基因型的分布、基因型与病毒载量的关系及基因型与临床表型的关系。方法来自莱芜地区的HBV-DNA阳性的乙肝病毒感染者136例，包括乙型肝炎表面抗原携带者、慢性乙型肝炎轻度、中度、重度、重型肝炎、肝硬化、肝细胞癌患者。用荧光定量PCR方法检测乙型肝炎病毒定量，采用限制性片段长度多态性分析(RFLP)及序列测定法，对血清中HBV进行基因分型。结果莱芜地区HBV感染者基因型以C型为主，占68.4％(93／136)，B型占19.1％(26／136)，B+C混合型占12.5％，未发现A、D、E、F、G、H型。病毒载量均值从B型、混合型到C型依次升高，B型载量水平显著低于C型及混合型(P＜0.01)；C型及混合型间比较无差异(P＞0.05)。B型中ASC、CHB轻度比例显著高于C型、混合型ASC、CHB轻度比例(P＜0.05)。C型基因型在HBV携带者、慢性乙型肝炎轻度、中度、重度以及重型肝炎、肝硬化的比例依次升高。慢性乙肝病毒感染者中，C基因型患者HBeAg阳性者显著高于B基因型患者。结论(1)莱芜地区HBV感染者基因型存在B型、C型、B+C混合型，以C型为主，未发现莱芜地区人群中分布已知的其它基因型。(2)HBV感染者基因型与临床疾病谱有关，C基因型与较为严重的肝病有关。(3)慢性HBV感染者的HBV携带者和轻度慢性乙肝患者组中，C型均较B型年龄大，其它组别则与年龄无关，乙肝病毒基因型的构成比与性别无关。(4)C基因型感染者HBeAg阳性率显著高于B基因型感染者。(5)乙型肝炎病毒基因型是影响病毒复制和患者临床表现、预后的重要因素之一。

关键词： 乙型肝炎病毒   慢性乙型肝炎   共价闭合环状DNA   基因变异   拉米夫定  

摘要： [目的] 探讨慢性乙型肝炎病毒感染者外周血乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测的临床意义。 [方法] 采用PCR荧光分子信标技术对325例慢性乙型肝炎病毒感染者外周血HBV cccDNA进行检测，分析HBV cccDNA水平与病毒复制指标及病情轻重的关系。对68例接受拉米夫定抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者定期检测外周血HBV cccDNA，探讨HBV cccDNA与拉米夫定抗病毒疗效和YMDD变异的关系。 [结果] 结果表明外周血HBV cccDNA水平与HBV DNA定量具有正相关关系(r=0.76，P＜0.01)。HBeAg阳性组外周血HBV cccDNA的检出率(55.4％)明显高于HBeAg阴性组(25.6％)(P＜0.001)。HBeAg阳性组患者外周血HBV cccDNA水平(5.4±1.7lg)高于HBeAg阴性组患者 (3.9±1.1lg)(P=0.012)。重度慢性乙型肝炎患者外周血HBV cccDNA水平(6.1±1.2lg)和中度慢性乙型肝炎患者外周血HBV cccDNA水平(6.4±1.6lg)均显著高于轻度慢性乙型肝炎患者外周血HBV cccDNA水平(4.3±0.9lg)。68例接受拉米夫定抗病毒治疗达48周的患者，8例被检测出YMDD变异株。结果表明病毒变异组治疗前外周血HBV cccDNA水平(5.9±1.4lg)明显高于非变异组(4.3±1.1lg)(P=0.026)。拉米夫定治疗完全应答组、部分应答组及无应答组治疗前外周血HBV cccDNA水平分别为3.9±0.7lg、4.2±0.6lg和5.8±0.9lg，无应答组治疗前外周血HBV cccDNA水平高于完全应答组和部分应答组(P＜0.05，P＜0.05)。 [结论] 慢性HBV感染者外周血存在HBV cccDNA。外周血HBV cccDNA的检测对拉米夫定的抗病毒疗效及病毒变异可能具有一定的预测价值；对慢性HBV感染者病情的判断及愈后评估可能具有临床参考意义。

关键词： 产单核细胞李斯特菌   减毒突变株   绿色荧光蛋白   免疫生物学   ActA   LLO   PlcB  

摘要： 产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人兽共患李斯特菌病的病原,主要通过食用被LM污染的食品感染,能引发人的脑膜炎、发热性败血性胃肠炎、孕妇流产等,感染后发病死亡率约为25%。欧美国家曾多次暴发流行,LM对食品的污染与危害,已引起世界各国的普遍关注和高度重视,其中研制预防李斯特菌病的减毒活疫苗是重要的课题之一。另一方面,鉴于LM是胞内寄生菌,减毒LM是非常有前景的疫苗载体之一。为此,本研究通过同源重组的方式对血清型为1/2a的野生型菌株基因组中相邻的两毒力基因actA和plcB进行缺失,获得减毒重组菌株,并以减毒株开展了以原核和真核表达的不同方式运送模式蛋白GFP的研究。为了对减毒株的免疫保护力进行评价,以及从不同水平上证实基因的缺失,对毒力基因hly和actA在大肠杆菌中进行了原核表达并对ActA蛋白进行了单抗的研制。 减毒突变株的获得不仅对李斯特菌病的预防具有重要作用,而且为构建预防人类和动物疫病的疫苗载体奠定了基础。此外,对于LM阐明毒力因子的致病机理与免疫保护作用提供了条件。 1.产单核细胞李斯特菌actA基因和hly基因的原核表达及ActA单克隆抗体的研制 利用PCR技术从血清型1/2a的LM4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌***后,IPTG诱导目的蛋白的表达。SDS-PAGE电泳结果表明,actA基因在两种载体中均获得表达,融合蛋白的大小分别约为120KD和97KD。

关键词： 乙型肝炎病毒   核心基因启动子   基因变异   原发性肝癌   白细胞介素10   白细胞介素12   肿瘤坏死因子α   γ-干扰素  

摘要： 目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染中核心基因启动子(BCP)变异的致病和致癌作用及其临床意义。方法：(1)研究对象：176例HBV慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度，肝炎肝硬化，慢性重型肝炎和原发性肝癌)。(2)研究方法：①采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术，对患者血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变。②采用双抗体夹心ELISA检测技术，检测患者血清细胞因子(IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ)水平。③采用PCR结合荧光探针检测技术，检测患者血清HBV DNA含量。④采用ELISA检测技术，检测患者血清HBV标志物(HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe及抗-HBc)。⑤采用Beckman-Coulter CX9型全自动生化分析仪及其提供的全套检测试剂，对患者血清进行肝功能(TBiL、ALT、AST、ALB)检测。结果：(1)在176例HBV慢性感染者中检出HBV BCP区T1762A1764变异者73例，HBV BCP变异的阳性率为41.5％，HBV BCP变异在HBeAg阴性病例的阳性率为49.4％

关键词： 丙型肝炎病毒核心抗原   HCV-RNA   丙型肝炎病毒抗体   酶联免疫吸附试验  

摘要： 目的：应用国产ELISA试剂盒定性检测慢性丙型肝炎患者血清中HCV核心抗原和HCV核心总抗原和对HCV核心抗原进行定量分析并评价这些HCV核心抗原定性和定量检测的临床价值，同时了解国产试剂盒的特异性和灵敏度。 方法：定性检测275例患者血清中的HCV核心抗原和126例患者HCV核心总抗原，以及对126例患者HCV核心抗原的定量分析，以健康人血清20例，慢性乙型肝炎患者血清35例作为对照，以证明方法的特异性。同时应用实时荧光定量RT-PCR和ELISA分别检测血清中的HCV RNA和抗HCV；并用美国Ortho临床诊断公司HCV核心抗原检测ELISA试剂盒进行检测和对比研究。 结果：1、健康人和慢性乙型肝炎患者血清HCV核心抗原定性，HCV核心总抗原以及HCV核心抗原的定量分析检测均呈阴性反应，检测值(OD值)分别为0.022±0.017、0.003±0.011；0.007±0.015、0.014±0.018和0.004±0.012，0.012±0.018。2、275例患者血清HCV核心抗原定性检测阳性87例，阳性率31.64％，检测值(OD值)为0.501±0.394。HCV核心抗原定性检测国产试剂盒与美国Ortho临床诊断公司试剂盒检测结果有较高的符合率，其符合率高达93.1％。3、126例患者血清HCV核心抗原总抗原检测阳性41例，阳性率32.54％，同时定性检测HCV核心抗原，阳性15例，阳性率11.9％，HCV核心总抗原阳性率明显高于HCV核心抗原定性检测，两者之间的差异具有统计学意义(P＜0.005)。4、126份慢性丙型肝炎患者血清HCV核心抗原定量检测阳性39例，阳性率30.95％，检测值拷贝数在10～4～10～6copeis／ml之间。其检测的敏感性与HCV核心抗原总抗原检测结果相似。5、275例患者血清HCV核心抗原定性检测和HCV RNA之间有60％的吻合率，两种检测方法比较，其差异性有统计学意义(P＜0.005)。126例患者血清HCV核心总抗原和HCV RNA之间有88.10％的吻合率，两种检测方法比较，其差异性有统计学意义(P＜0.05)。HCV核心抗原定量和HCV RNA定量检测也有86.51％结果一致，其差异性有统计学意义(P＜0.01)。结果说明HCV RNA检测的灵敏度高于HCV核心抗原定性检测，HCV核心总抗原以及HCV核心抗原定量检测。6、126例患者血清中HCV核心总抗原和HCV RNA之间呈曲线正相关(r=0.478，P＜0.01)，且HCV核心总抗原阳性率随着HCV RNA载量的增高而增加。HCV核心抗原定量和HCV RNA定量检测之间也有良好的正相关关系(r=0.615，P＜0.01) 结论：1、HCV核心抗原定性检测特异性强，与美国Ortho试剂盒检测结果吻合率高。2、HCV核心总抗原和HCV核心抗原定量检测均具有较高的敏感性，两者的敏感性明显高于HCV核心抗原的定性检测。3、HCV核心总抗原和HCV核心抗原定量检测与HCV RNA定量检测结果之间有一定的相关性，说明HCV核心总抗原和其定量分析和HCV-RNA检测一样，也是反映慢性丙型肝炎患者病毒血症的血清学标志。4、联合检测HCV核心总抗原或HCV核心抗原定量与HCV RNA可提高对慢性丙型肝炎患者病毒血症的诊断率。

关键词： 临床意义   蛋白检测   乙型肝炎病毒   乙肝病毒(HBV)   谷丙转氨酶(ALT)   前S1蛋白   HBV-DNA   前S2蛋白   HBV基因   乙肝标志物  

摘要： 目的探讨乙肝前S1抗原和“乙肝六项”、HBV-DNA的关系并结合ALT的变化确定前S1抗原的临床意义和诊断价值。方法采用ELISA方法检测前S1和乙肝六项,荧光定量PCR法检测HBV-DNA,采用紫外连续监测法检测谷丙转氨酶(ALT)。结果“大三阳”标本中前S1阳性率为85.2%,HBV-DNA阳性率为90.3%;“小三阳”中前S1阳性率为46.4%,HBV-DNA阳性率为31.6%;HBSAg+、HBCAg+、e系统为阴性的前S1阳性率为26.9%,HBV-DNA的阳性率为23.0%。急性乙肝跟踪观察前S1、HBV-DNA、ALT时发现前S1能够较早反应乙肝恢复情况。ALT恢复越快前S1抗原转阴越早,且先于DNA阴转。结论前S1蛋白能够较好地反映乙肝病毒的复制情况,对病情的预后和疗效判断有较好的临床应用价值。

关键词： 肝炎病毒,乙型,   基因型,   亚型   聚合酶链反应   乙型肝炎病毒(HBV)   病毒基因型   病毒感染者   亚型分布   临床意义   HBV基因型  

摘要： 目的研究不同类型乙型肝炎病毒(HBV)感染者中HBV基因型和亚型分布情况及其临床意义。方法应用基因型和亚型特异性引物聚合酶链反应法(PCR),对北京、长春、汉川、深圳、清远和南京等6个城市445份HBV感染者血清进行基因型及亚型分型,其中急性肝炎7例,无症状携带者36例,慢性乙型肝炎352例,肝硬化28例,肝细胞癌22例。通过对PCR产物测序确定其基因型,以验证该法的准确性。结果445份血清中,239例(53.7%)为C型,其中13例(5.4%)为C1亚型,135例(56.5%)为C2亚型,91例(38.1%)为非C1/C2亚型;145例(32.6%)B型,其中100例(69.0%)为Ba亚型,25例(17.2%)为Bj亚型,20例(13.8%)为非Ba/Bj亚型;61例(13.7%)为B型与C型混合感染,其中6例(9.8%)为Ba与C1 亚型混合感染,3例(4.9%)为Bj与C1亚型混合感染,15例(24.6%)为Ba与C2亚型混合感染,8例(13.1%) 为Bj与C2型混合感染,11例(18.0%)为Ba与非C1/C2亚型混合感染,7例(11.5%)为Bj与非C1/C2亚型混合感染,2例(3.3%)为非Ba/Bj亚型与C1亚型混合感染,3例(4.9%)为非Ba/Bj亚型与C2亚型混合感染,6 例(9.8%)为非Ba/Bj亚型与非C1/C2亚型混合感染。未检测到其他基因型及亚型。在不同类型乙型肝炎病毒感染者中,B型、C型、B与C型混合感染及亚型分布差异有统计学意义,在肝硬化和肝细胞癌患者中C型所占比例较高(分别为78.6%和86.4%),无症状携带者中B型所占比例较高(72.2%)。但不同性别患者中,HBV 基因型和亚型分布无差异。在HBeAg阳性和阴性感染者中,HBV基因型和亚型分布差异也有统计学意义。结论该6个城市HBV感染者中,以B2和C2亚型占优势,C基因型可能与肝硬化和肝细胞癌的发生有关。