关键词:
胚胎干细胞
心肌分化
白细胞介素6
心肌再生
摘要:
白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)是心脏微环境的重要组成部分。在不同模型中,IL-6通过促进心肌细胞再生帮助心脏修复。胚胎干细胞是心脏修复中心肌再生的良好来源。本研究旨在探讨IL-6对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)及其心肌分化的影响。IL-6处理mESCs两天,用CCK-8法检测mESCs增殖情况,用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测干性和胚层分化基因mRNA表达水平,用Western blot检测干细胞相关信号通路的磷酸化水平,用siRNA干扰STAT3磷酸化功能。通过检测搏动拟胚体(embryoid bodies,EBs)比例和qPCR检测心脏前体细胞标记物和心肌细胞离子通道mRNA表达水平来评估mESCs的分化能力。从胚胎干细胞分化第1天(EB0)开始使用IL-6中和抗体阻断内源性IL-6的作用,分别在EB7、EB10和EB15检测心肌细胞分化;在EB15用免疫组织化学染色法示踪心肌细胞,并用Western blot检测干细胞相关信号通路的磷酸化情况。在EB4、EB7、EB10和EB15时给予短期IL-6抗体处理,观察发育后期搏动EBs比例。结果显示,外源性IL-6促进mESCs增殖和多能性的维持,表现为上调癌基因c-fos、c-jun和干性标志物oct4、nanog mRNA表达水平,下调胚层分化标记物branchyury、FLK-1、pecam、ncam和sox17 mRNA表达水平,提高ERK1/2和STAT3磷酸化水平;针对JAK/STAT3的siRNA可部分减弱IL-6对细胞增殖和c-fos、c-jun mRNA表达水平的作用。在分化过程中,IL-6中和抗体的长期作用可减小搏动EBs比例,下调ISL1、GATA4、α-MHC、cTnT、kir2.1和cav1.2 mRNA水平,降低EBs和单个细胞的心肌αactinin荧光强度,下调STAT3磷酸化水平。此外,从EB4开始的短期(2 d)IL-6抗体处理显著降低发育后期搏动EBs的比例,而从EB10开始的短期IL-6抗体处理显著提高EB16搏动EBs的比例。以上结果提示,外源性IL-6促进mESCs增殖,有利于干细胞干性维持;内源性IL-6对mESCs心肌分化的影响呈发育依赖性。这些发现为细胞替代疗法的微环境研究提供了重要依据,也为理解心脏疾病的病理生理学提供了新的视角。