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关键词： 人类   胚胎干细胞   细胞分化   视网膜  

摘要： 目的探讨在成分简单的培养条件下将人胚胎干细胞(h ESCs)通过3D培养的方式诱导分化为人神经视网膜各种细胞的方法。方法将不同系的h ESCs用消化酶消化后,以团块形式悬浮培养在含有1﹪Matrigel的培养液中。对于SHh ES8系的h ESCs在第1天加入BMP4信号通路抑制剂,然后每2天换液以逐渐降低其浓度。在分化的不同时间,通过检测全能性基因和视网膜标志基因的表达水平以确定h ESCs团块的分化状态。对于H9系的h ESCs,抑制Wnt信号通路以促进h ESCs分化过程中神经视网膜前体细胞重要转录因子CHX10的表达。数据经Graph Pad Prism 6.0c student's t-test分析处理。结果 (1)H9系h ESC经过15 d的分化,各眼区转录因子的表达水平都有大幅上调(与D0相比,D4时SIX3水平上升到720.1±238.6,P=0.039;SIX6上升到260.0±132.5,P=0.122;PAX6上升到2661±1353,P=0.121;LHX2上升到480.4±27.56,P<0.000;RAX上升到144.9±35.61,P=0.016),免疫荧光检测也显示此时分化的细胞已经具备早期视网膜细胞的特征;(2)在H9系h ESCs分化第7天添加IWR1e抑制Wnt信号通路,可以有效地提高CHX10的表达,使含CHX10阳性细胞的团块的比例从0﹪上升到86.6﹪(P=0.000),表明Wnt信号通路在视网膜细胞形成中起重要的调节作用;(3)SHh ES8系的h ESCs通过悬浮培养,在第24天时可以检测到有CHX10阳性的视泡样结构,继续培养至83 d,可以检测表达不同的神经视网膜细胞标志基因的细胞,包括CRX阳性的感光细胞或前体细胞、AP2α阳性的无长突细胞和ISLET1阳性的神经节细胞。结论不同系的h ESCs对同样的诱导分化显示出不同的反应;抑制Wnt信号通路可以促使CHX10表达,实现早期视网膜细胞的分化成熟;利用无血清悬浮培养的方式,可以使h ESCs分化为各种视网膜细胞和具有一定三维结构的视网膜样组织。

关键词： 磺胺二甲嘧啶   Fab抗体   时间分辨荧光免疫分析  

摘要： 采用从合成抗体库中筛选得到的磺胺二甲嘧啶Fab抗体,建立了磺胺二甲嘧啶一步竞争时间分辨荧光免疫分析方法。实验用羊抗鼠IgG预包被酶标板,加入镧系元素Eu标记的磺胺二甲嘧啶与磺胺二甲嘧啶标准品共同竞争结合Fab抗体,建立了用于磺胺二甲嘧啶检测的时间分辨荧光免疫分析方法。该方法检测灵敏度（I10）为0.4μM,抑制终浓度（I50）为13.5μM,线性检测范围在10.6~173.7μM之间。方法用于多种基质样本中的磺胺二甲嘧啶的快速筛查检测。

关键词： 转型发展   基因工程   课程改革  

摘要： 立足新时期高等教育转型发展试点院校《基因工程》课程教学实际,分析了该课程的教学现状,及时总结课程教学中存在的问题,并从教学目标制定、教学内容确定、教学重难点突破、教学方法和课程考核方法等方面提出解决问题的对策,以期为同类院校相关课程教学改革提供借鉴。

关键词： 烟草   线粒体DNA   重测序  

摘要： 基于重测序技术,对两对不育系和对应的保持系材料的线粒体DNA进行重测序,统计并分析了不育系与保持系线粒体DNA编码区序列的突变位点,探讨了这些突变位点与烟草胞质不育的关系。对重测序结果比对分析可知:不育系和保持系在orf106b上具有一致的1个In Del位点,在orf138a、orf121b、orf129b和orf110b上具有一致的SNP位点,这些突变位点没有造成不育系与保持系编码区序列的差异,推测这些突变位点可能与CMS无关;不育系MSK326和MSK394在orf112a和orf103c上有相同的In Del位点;MSK326和MSK394在65个基因片段或开放阅读框上有一致SNP位点,且这些突变没有出现在保持系线粒体编码区。这些基因片段或开放阅读框上的In Del和SNP突变都导致了基因或开放阅读框编码序列的改变,并且造成了氨基酸的突变,推测可能与烟草CMS密切的相关。其中atp1、atp4、atp6、coxl、cox3、atp9、orf25、nad6、nad7、orf108、orf239、orf129、sdh4等基因或开放阅读框上的突变位点与报道研究一致,均被报道与烟草CMS存在密切的联系。本研究所挖掘的这些大量基因片段上的In Del和SNP位点,不仅有助于烟草CMS机理的进一步研究,也为烟草不育系育种研究提供有力的遗传工具。

关键词： 十溴联苯醚   胚胎干细胞   分化潜能   氧化应激  

摘要： 目的探讨十溴联苯醚(BDE-209)暴露对人胚胎干细胞分化潜能的影响。方法分别将对数生长期未分化的人胚胎干细胞FY-h ES-10细胞暴露于含有终浓度为0(溶剂对照)、1、10和100 nmol/L BDE-209的培养基中培养96 h后,采用悬浮法培养拟胚体(embryoid body,EB)自发分化10 d,实时荧光定量PCR检测EB中OCT4、内胚层标志基因AFP、外胚层标志基因PAX6、中胚层标志基因SMA及氧化应激相关基因HIF1a、HIF2a和SOD1基因的表达,并测定SOD活性。结果与对照组比较,各剂量BDE-209暴露组FY-h ES-10细胞EB分化10 d OCT4、SMA、HIF1a和HIF2a表达水平均较高,而AFP、PAX6、SOD1表达水平均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。且随着BDE-209暴露剂量的升高,FY-h ES-10细胞分化10 d EB中OCT4的表达水平均呈上升趋势,SOD1基因的表达水平呈下降趋势。同时BDE-209暴露后FY-h ES-10细胞分化10 d EB中SOD活性降低。结论 BDE-209可能通过影响早期胚胎的分化潜能从而产生发育毒性。

关键词： 转基因作物   产业化风险   行政伦理进化   和谐发展机制  

摘要： 学界对转基因作物技术应用带来的安全风险、技术操作以及技术伦理等层面的问题都有较多研究。但目前的文献大多集中在讨论"挺转""反转"的态度上,并由此展开技术、伦理等层面的解析。这会造成"是"或"不是"的二选一博弈局面,不利于未来转基因作物技术应用的发展,亦不利于公共行政的科学决策。因此,我们更应焦于转基因作物产业化与公共行政伦理的关联性研究,并阐述在技术发展和应用的时代下,公共行政该如何面对转基因作物产业化的现实境遇并做出化解转基因作物产业化风险问题的决策方案。这应当以行政伦理的进化作为根本价值取向,以促进转基因作物产业安全、规范的发展,并提升公共行政伦理精神,形成二者和谐发展的机制。

关键词： 基因工程   科研   教学改革   探索  

摘要： 基因工程是理论和实验并重的专业基础课。随着国家对科学研究支持力度的逐年提升,高校理科生进入实验室、进行科研训练的机会越来越多,基因工程理论课的教学方法应与时俱进,以科研为基础,多角度阐释基因工程相关的研究方法与技术、科研动态和已取得的辉煌成果等内容,激发学生对实验操作性较强的理论课的学习兴趣,全面调动其积极性,使学生在领略基因工程学科国际研究前沿的同时,掌握基础理论知识,培养学生的科研兴趣和自主创新意识,提高学生的综合素养,提升基因工程理论课的课堂教学质量,满足高校生物工程专业、生物技术专业和新世纪复合型人才培养的要求。

关键词： 马铃薯   DNA测序   小序列片段   参考基因组   覆盖程度   品种差别   组织特异性  

摘要： 【目的】探讨品种和组织对马铃薯基因组测序深度分布的影响.【方法】对‘布尔班克’和‘云薯107’2个品种的薯块芽端和茎端进行了深测序,建立了在参照基因组上的测序深度分布图.【结果】发现这些分布在品种间有明显差别(例如在三号染色体中部和尾部),在同一品种的DNA样本间很类似,但芽端和茎端在二号染色体有明显差别.这些结果说明测序深度的分布主要受品种基因组本身所影响,也受薯块上部位影响,而且在很大程度上可以重复.【结论】这些结果能帮助设计试验和合适利用测序深度.

关键词： 竹类植物   克隆   载体构建   表达   遗传转化  

摘要： 竹类植物生长快、周期短、用途广泛,而我国是世界上竹类资源最丰富,竹林面积最大,产量最大的国家,开展竹类育种研究对我国经济的发展、生态效益提升和生态环境保护等方面具有重要作用。但竹子开花周期比较长,不易获得种子,杂交育种难度非常大,如何利用基因工程手段进行竹子遗传改良显得非常迫切。本文主要综述了近年来竹子基因工程如相关基因的克隆、表达、载体构建及遗传转化方面的研究进展,并对今后的发展前景进行展望。

关键词： 玉米(Zea   mays   L.)   可视化检测   膜芯片   转基因作物  

摘要： 建立了一种可同时检测9种转基因玉米(Zea mays L.)的可视化膜芯片检测方法。该方法利用紫外交联技术,将9种转基因玉米特异性探针及内源性玉米醇溶蛋白基因(Zein)探针和杂交质控探针固定于尼龙膜表面制成检测芯片。通过多重PCR同时扩增多重靶标片段,生物素化产物与检测芯片杂交。阳性结果由链酶亲和素-碱性磷酸酶及显色底物NBT/BCIP的显色反应在芯片表面形成裸眼可见的点。应用商业化转基因玉米(Bt176、Bt11、MON810、GA21、T25、TC1507、DAS-59122、NK603、MIR604)、转基因棉花(MON1445、MON15985)、转基因大豆及非转基因材料检验了芯片的性能,结果表明,制备的检测芯片具有良好的特异性和重复性,检测限为0.5%。芯片鉴定结果与PCR产物测序结果一致。