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关键词： 颗粒物   胚胎干细胞   PM2.5   成纤维细胞   氧化损伤  

摘要： 目的 研究PM2.5对人胚胎干细胞来源的成纤维细胞（EBf-H9细胞）的氧化损伤情况。方法 采用0.00、3.91、7.81、15.63、31.25、62.50、125.00 μg/cm2的PM2.5作用于EBf-H9细胞，以0.00 μg/cm2剂量组为对照组，采用CCK-8试剂盒检测PM2.5染毒6 h的细胞存活率；采用DCFH-DA探针检测染毒1 h细胞内活性氧（ROS）水平；采用试剂盒检测染毒6 h细胞内总超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量。使用单因素方差分析不同染毒组各指标的统计学差异。结果 细胞毒性试验结果显示，随着PM2.5染毒浓度的增加，细胞存活率逐渐降低，其半数抑制浓度（IC50）为83.01 μg/cm2。3.91、7.81、15.63、31.25、62.5 μg/cm2剂量组在染毒1 h后，细胞内ROS荧光强度分别为54.03±0.50、60.93±0.08、61.36±1.00、68.21±0.93、78.27±1.26，与染毒剂量为0.0 μg/cm2的对照组（27.12±0.21）相比，P值均〈0.01；染毒6 h T-SOD活性分别为（9.78±0.28）、（8.59±0.22）、（8.90±0.33）、（7.46±0.71）、（4.21±0.17）U/mg蛋白，与对照组[（11.77±0.63）U/mg蛋白]相比，P值均〈0.01；GSH-Px活性分别为（181.59±3.65）、（153.33±1.69）、（168.74±2.22）、（81.56±0.56）、（48.62±2.13）mU/mg蛋白，与对照组（273.90±6.50）mU/mg蛋白相比，P值均〈0.01；MDA浓度分别为（0.38±0.03）、（0.43±0.09）、（0.47±0.09）、（0.65±0.10）、（0.70±0.12）nmol/mg蛋白，与对照组[（0.27±0.02）nmol/mg蛋白]相比，P值均〈0.05。结论 PM2.5能降低EBf-H9细胞存活率，导致细胞脂质过氧化水平升高，原因可能是PM2.5通过刺激细胞产生大量ROS，使细胞出现氧化应激状态，从而造成细胞的氧化损伤。

关键词： DNA分子   优化策略   模拟实验   模拟操作   重组   教材   基因工程   专题教学  

摘要： 在基因工程专题教学中有许多难点。例如，限制酶和DNA连接酶的作用方式，目的基因和质粒混合后的随机结合，目的基因与质粒的正向与反向连接，等等。产生这些难点的原因是学生对重组DNA的构建过程缺乏感性认识。

关键词： 转基因饲料   俄罗斯联邦   进口   转基因成分   俄罗斯总统   转基因作物   转基因动物   转基因食品  

摘要： 俄罗斯联邦动植物卫生监督局自7月29日起暂时限制进口包括中国住内以及阿根廷、巴西、德国部分企业的饲料，原因是在其产品中发现了转基因成分。早在今年7月4日，新华社就曾报道，俄罗斯总统普京签署法令，禁止在俄境内种植转基因作物、养殖转基因动物、生产转基因食品，

关键词： 转基因生物安全   GMOs   转基因作物   转基因食品   同行评审   释放规律   风险管理   风险评估  

摘要： IGMO Biosafety Research(ISSN 1925-1955)is an open access,full peer reviewed online journal,which has been indexed by international database Pro *** provides the coverage in involving the release of genetically modified organisms(GMOs),such as,genetically modified crops,genetically modified food,regulation of the release of

关键词： 基因工程小鼠   制备   保种   育种   技术  

摘要： 本文从小鼠的超数排卵、采集胚胎、原核受精卵显微注射、胚胎移植、基因型鉴定等多个环节,详细阐述制备基因工程小鼠的技术操作要领;通过实施辅助生殖技术IVF(体外受精)、精子和胚胎的冷冻、复苏技术实现了基因工程小鼠的保种和育种,涉及相关技术的要点改进和操作体会,成功建成了基因工程小鼠的制备和保种、育种平台,提供了良好的技术服务。

关键词： 生殖细胞   肝细胞   细胞分化   α1-抗胰蛋白酶   NF-κB  

摘要： 目的了解小鼠胚胎肝脏发育的过程和体外干细胞向肝细胞定向分化与NF-κB表达的关系,探讨干细胞向肝细胞定向分化的分子机制。方法分离培养扩增小鼠原始生殖嵴细胞,向培养液中分别加入20μg/L的β-神经细胞生长因子（β-NGF）、0.5g/L新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液,体外诱导小鼠生殖嵴来源的胚胎干细胞（PGCs）向肝样细胞定向分化。观察细胞的形态学变化;免疫细胞荧光法检测肝样分化细胞内α1-抗胰蛋白酶（AAT）及NF-κB的表达,Real-Time PCR方法检测诱导分化过程中NF-κB mRNA的表达。免疫组化法检测胚胎发育11.5、14.5、18.5d的肝脏组织中NF-κB的表达。结果 PGCs培养液中加入β-NGF、新生鼠肝脏提取液和胎肝细胞上清液可见部分细胞变为圆形或卵圆形;诱导12d后,圆形或卵圆形细胞呈ATT阳性表达;在诱导分化过程中NF-κB的表达逐渐增强,伴随肝细胞的成熟而呈阳性表达并由胞质转入胞核。Real-Time PCR方法检测结果显示,在诱导分化过程中NF-κB的表达升高（t=50.229～75.344,P〈0.01）。在胎肝发育过程中随肝原细胞向肝成熟细胞转化,肝细胞胞质中NF-κB的表达逐渐增强,并向细胞核内转移。结论 NF-κB在PGCs体外向肝细胞分化和体内肝发生过程中变化一致。

关键词： 基因工程   肠出血性大肠杆菌O157∶H7   泛素连接酶   体外泛素化  

摘要： 目的利用基因工程方法原核表达z2151蛋白,并鉴定其E3泛素连接酶活性。方法以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因,构建重组表达载体p ET22b-z2151,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化获取目的蛋白;通过体外泛素化实验检测蛋白泛素连接酶活性。结果亲和纯化得到较高浓度和纯度的z2151蛋白,其在体外泛素化反应中能够促使泛素小分子形成多聚泛素链,即有E3泛素连接酶活性;而且对E2泛素结合酶具有一定的选择特异性。结论原核表达质粒p ET22b-z2151构建成功,目的蛋白z2151具有泛素连接酶的体外泛素化能力,并且针对不同的E2酶亲和力不同,这些都为后续功能机制研究奠定了基础。

关键词： 干细胞   胚胎干细胞   内皮细胞   组织工程   人胚胎干细胞   分化诱导   血管内皮生长因子   体外培养   免疫组化   Di   I标记   内皮细胞特性  

摘要： 背景:人胚胎干细胞是一类特殊的细胞,具有自我更新及多向分化潜力,在一定诱导条件下能够分化为内皮细胞。目的:探讨人胚胎干细胞向内皮细胞分化的条件,研究血管内皮生长因子诱导人胚胎干细胞诱导分化为内皮细胞的效果。方法:取40代H9细胞进行复苏,采用悬浮培养法制备胚体,培养5 d后转入贴壁培养阶段,分化为拟胚体,添加含50μg/L血管内皮生长因子的胚胎干细胞培养基进行诱导培养。取诱导分化第2代细胞,进行DiI-Ac-LDL摄取实验;取诱导分化第15代细胞,进行免疫组织化学染色。结果与结论:(1)培养1 d时,可见条索或多角形的单层细胞在拟胚体细胞周围呈芽样放射状生长,细胞生长相对迅速,能够与周围集落的细胞相互融合;培养二三天后,悬浮细胞数得到进一步增加,但中心小圆形细胞开始死亡;培养5 d后,拟胚体细胞开始传代,细胞聚集呈现出典型铺路石样外观;(2)经过诱导分化后,部分人胚胎干细胞能够主动摄取荧光标记LDL,且细胞呈现为红色荧光颗粒;(3)免疫组化染色显示,诱导分化的第15代人胚胎干细胞呈CD31和FLK-1阳性;(4)结果表明:人胚胎干细胞在血管内皮生长因子诱导下可分化为内皮细胞。

关键词： DEHP   MEHP   小鼠胚胎干细胞   细胞毒性  

摘要： 目的分析不同浓度的邻苯二甲酸二乙基己酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]及其活性代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)对小鼠胚胎干细胞细胞毒性、增殖的影响。方法用含有不同浓度DEHP(1 000、100、10、1、0.1、0.01μmol/L)、MEHP(1 000、100、10、1、0.1、0.01μmol/L)的培养液,对胚胎干细胞进行培养,用CCK-8法检测细胞活性。结果染毒96 h后,高剂量(1 000μmol/L)DEHP、MEHP均对胚胎干细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),且染毒剂量与细胞抑制率之间存在明显的正相关性,相关系数分别为0.51、0.62(P<0.05)。结论在一定浓度范围内,DEHP及MEHP均对小鼠ESC具有细胞毒性,且有浓度依赖性。

关键词： 悬浮培养   生物合成   信号转导工程   诱导策略   基因工程  

摘要： 灵芝酸是灵芝中的主要活性成分之一,现代药理和临床研究表明,灵芝酸具有毒杀肿瘤细胞、抑制癌细胞转移、抗HIV-1和HIV-1蛋白酶等功能。目前悬浮培养灵芝细胞法是大规模生产灵芝酸的重要策略,具有很好的应用潜力和前景。近些年,有大量的文献报道通过不同方式提高灵芝细胞中灵芝酸的含量,并取得了一定进展。文章主要从信号转导调控、诱导子策略和基因工程等方面综述了近年来悬浮培养生产灵芝酸的研究进展,并对以后通过调控代谢通路和合成生物学实现灵芝酸的高效生产进行了展望。