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关键词： 木聚糖酶   响应面法   发酵条件优化   基因工程菌pPICZαA-QxynB(GS115)  

摘要： 木聚糖酶作为降解木聚糖的关键酶之一,在制药、纸浆造纸和食品等领域有着广泛的应用。为了进一步提高重组毕赤酵母基因工程菌pPICZαA-QxynB(GS115)表达产木聚糖酶的能力,采用响应面法对其发酵条件进行优化。先通过Plackett-Burman法筛选出3个对产酶有显著影响的重要因素,分别为初始pH、组氨酸添加量和甲醇添加量;再利用单因素法逼近最大响应区域,并结合Box-Behnken试验获得最优的发酵条件为初始pH 58、组氨酸添加量06%、甲醇添加量085%。在最优的发酵条件下,重组菌pPICZαA-QxynB(GS115)表达木聚糖酶酶活达到3 604 U/mL,较未优化前提高了256倍,其3组平行试验值与模型的预测值基本相符,说明预测模型的可信度高,研究结果能为建立重组菌pPICZαA-QxynB(GS115)表达木聚糖酶的制备工艺提供依据。

关键词： 产气荚膜梭菌   β2蛋白   可溶性表达与纯化   基因工程亚单位疫苗  

摘要： β2毒素是一种新近报道的产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）毒素,A、B、C、D、E等5个型的梭菌均可产生,该毒素也是制备基因工程亚单位疫苗的主要研究对象。本研究通过优化β2蛋白的密码子、去除蛋白信号肽,选择亲水性与抗原性较好的序列,同时优化表达条件等方法的探索,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达的可溶性重组β2蛋白,用该蛋白免疫小鼠可使动物产生较高的血清抗体水平,针对A型、B型、C型和D型产气荚膜梭菌的保护率分别为90%、100%、80%和90%,小鼠三免后第7~14天抗体效价达到峰值。本研究表达的β2蛋白具有较好的免疫原性,可进一步用于研制预防产气荚膜梭菌的基因工程亚单位疫苗。

关键词： 基因工程   环境保护   污染治理  

摘要： 随着科技的发展,人类在为自己生产出越来越多生活资料的同时,产生有害物质的数量和种类也大幅度增加,对环境的污染日益严重。基因工程技术是在DNA分子水平上按照人们的意愿进行的定向改造生物的新技术。利用基因工程技术提高微生物净化环境的能力是用于环境治理的一项关键技术。本文简要介绍基因工程的原理、步骤与内容,概述其在环境保护中的应用,以期能对同类研究提供参考。

关键词： 林木   生物技术育种   分子标记   基因工程   细胞工程  

摘要： 随着经济增速的加快和工业化进程的推进,社会总体对林木数量及种类的需求也越来越多,给林木遗传育种提出了更高的要求。生物技术在此需求下逐渐应用于林木育种,并起到了重要推动作用。本文从分子标记、辐射育种、基因工程、细胞工程等四个方面,对生物技术在林木遗传育种中的应用进行了综述分析,希望对林木业的发展有着极大的推动作用,并为我国林业可持续健康发展提供参考。

关键词： 枸杞属   psb   A-trntH   DNA测序   鉴定  

摘要： 对宁夏枸杞主要品种psbA-trntH的DNA条形码序列进行分析,从分子水平对枸杞做出鉴定。采用改进CTAB法提取枸杞叶片DNA,利用合成的特异引物对其叶绿体间隔序列进行扩增、克隆,对目的片段测序分析,克隆到枸杞主要品种psbA-trntH片段,并获得其碱基序列(总长为545bp)。

关键词： 疫苗佐剂   兽用   重组抗原   药物研发   免疫原性   多肽组成   化学合成   基因工程  

摘要： 相比于传统的灭活或活体疫苗,由基因工程重组抗原或化学合成多肽组成的现代疫苗往往存在免疫原性弱等问题,需要免疫佐剂来增强其作用。疫苗佐剂能够提高机体对抗原的适应性免疫应答,在疫苗的研发中具有重要的作用。随着药物研发的不断进步,近年来国内外出现了许多新型佐剂。

关键词： 木质纤维素   纤维素酶   菌株   原生质体   诱变   融合   基因工程  

摘要： 综述了近年来选育高效产纤维素酶工程菌取得的最新理论研究及工艺进展,并就复合理化诱变获取高效产酶菌,以及利用原生质体融合、原生质体诱变、基因工程等技术对各种产纤维素酶、半纤维素酶菌株进行遗传改造,对纤维素酶高效产酶工程菌的选育进展进行了总结,进一步展望了选育高产纤维素酶菌株的研究方向。

关键词： 骨形态发生蛋白质类   碱性磷酸酶   组织工程   生物材料   骨生物材料   重组人骨形态发生蛋白2   基因工程   骨修复材料   骨缺损   释放   异位成骨  

摘要： 背景:制备具有天然骨结构,能够结合生物因子的骨修复材料成为研究的热点。目的:制备重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料,评估其释放、活性及诱导异位成骨的能力。方法:首先制备含有胶原结合域的重组人骨形态发生蛋白2,然后将胶原结合域与骨修复材料中的胶原相结合,经过冷冻干燥制备重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料,采用ELISA法检测重组人骨形态发生蛋白2的体外释放情况。将C2C12细胞滴加到重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料上(重组人骨形态发生蛋白2剂量分别为0.25,0.5,1μg/块),72 h后检测细胞碱性磷酸酶活性。将含0,2,5,10μg重组人骨形态发生蛋白2的重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料分别埋置于SD大鼠肌肉内,埋置2,4周后,检测磷酸酶活性与新骨生长情况。将CY7标记的重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料埋置于SD大鼠后肢肌肉窝内,观察重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料的稳定性。结果与结论:重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料内的重组人骨形态发生蛋白2在45 d内基本没有释放;C2C12细胞的碱性磷酸酶活性随复合材料中重组人骨形态发生蛋白2剂量的升高而升高;重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料植入体内的稳定性较好,碱性磷酸酶活性、异位成骨随重组人骨形态发生蛋白2剂量的增加而升高。结果表明,重组人骨形态发生蛋白2/骨修复材料保证了重组人骨形态发生蛋白2的稳定性,使其不易释放,提高了其异位诱导成骨能力。

关键词： 微生物   纤溶酶   基因克隆   表达   基因工程  

摘要： 血栓栓塞性疾病严重危害人类生命和健康,溶栓疗法效果显著。在新型溶栓制剂的研究中,微生物来源的纤溶酶研究引起越来越多的关注。通过分子生物学手段构建重组纤溶酶,实现酶的高效表达已经成为研究热点,本文对微生物来源的纤溶酶基因克隆与表达的研究现状进行了综述。