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关键词： 抗菌肽   鲎素   工业化生产   凝胶  

摘要： 抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是两栖类、哺乳动物、鱼类等生物非特异性免疫防御系统的主要成分之一,具有广谱杀菌、抑制病毒、抑杀肿瘤细胞等作用。鲎素是一种宿主防御肽,具有很强的抗菌活性。本实验室成功构建了鲎素(Tachyplesin I)的组成型酵母表达菌株,并使用7.5L发酵罐成功表达出了高活性的基因工程鲎素。另外,对其体内外抗金黄色葡萄球菌活性进行了研究,并从是否能够调动机体的天然免疫功能等角度探讨了其与宿主同源肽之间的相互关系。本研究为了解决基因工程鲎素工业化生产问题,使用本实验室已构建好的酵母表达系统,对基因工程鲎素Tachyplesin I(TP I)进行工业化(150L)生产,并在此基础上对其皮肤抗菌凝胶进行研制。根据本研究要求,设计并安装了发酵设备、控制设备、辅助设备等。发酵设备采用15L-50L-150L三个发酵罐,两两相连;控制设备采用自动控制工作台,监测发酵过程相关参数;辅助设备包括空气压缩机、蒸汽发生机、冷冻水循环机等。对发酵工艺进行了摸索和优化,实现了基因工程鲎素的工业化生产。发酵过程使用普通高压空气,不通入纯氧;15L发酵罐为种子发酵罐,种子培养基使用YPD培养基,培养基填充量为7L,接种量为1:40,发酵时间为14h,转速200rpm/min,通气量为0.2m3/h;50L、150L发酵罐为诱导表达发酵罐,种子培养基使用改良BSM培养基,填充比例为60%,接种量为1:20,发酵时间为62h,转速分别为240rpm/min、160rpm/min,通气量分别为1.2m3/h、3.6m3/h;甲醇补料方式采用恒速流加甲醇,流速控制在2m L/L/h;温度控制在29℃;发酵过程中不补加酸液、碱液。以金黄色葡萄球菌ATCC25923为指示菌,采用抑菌圈法检测其抑菌活性,抑菌圈超过26mm。通过高温、钴-60辐照灭菌后,其抑菌活性无明显下降,证明基因工程鲎素有作为外用药物制剂原料使用的潜力。进行了基因工程鲎素的皮肤抗菌凝胶的研制。使用上述发酵上清作为抑菌剂,配合中药提取物和其它辅料,制得抗菌肽凝胶。检测其抗菌活性,其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痤疮丙酸杆菌、链球菌、白色念珠菌等常见皮肤感染菌均有抗菌活性。进行溶血试验,该凝胶无溶血性和凝血性。对凝胶进行药物加速试验,在6个月的药物加速试验过程中,在第1、2、3、6个月取样检测,凝胶性状无可见变化,无沉淀和分层现象产生,p H值维持在5.5～6,粘度维持在5～5.5Pa.s,抑菌活性无明显下降,证明其可以通过6个月的药物加速试验。为了验证该凝胶的治疗效果,使用该凝胶治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(USA300菌株)感染的小鼠。结果表明,该凝胶具有加快创面愈合的功效,在治疗的第1天就使创面无渗出物产生,第2天开始出现结痂,其脱痂速度也是几组中最快的,这为抗菌肽作为外用药原料提供了实验依据。

关键词： 拟胚体   人胚胎干细胞   角膜上皮细胞   细胞免疫荧光   小分子化合物  

摘要： 目的:人干细胞因有强大的自我更新能力和多向分化潜能,利用小分子化合物调节效应迅速可逆的特点,从小分子化合物促进胚胎干细胞存活、自我更新及分化发育等方面入手,深入了解其对胚胎干细胞的诱导作用,以此探讨在体外将胚胎干细胞诱导分化为角膜上皮样细胞的方法,进一步揭示在诱导过程中相应的分子机制。本课题设计了两组小分子化合物组合作为不同的诱导方式,通过不同的检测方法证实诱导生成的细胞为角膜上皮样细胞,为角膜细胞移植治疗获得无限制角膜上皮来源,减少临床对受限于角膜供体的角膜移植手术需求,使更多患者获得有效和及时治疗提供参考途径。方法:人胚胎干细胞在体外培养至融合度到达80%以上消化,使用Aggrewell孔板培养法获得拟胚体(Embryonic bodies, EBs),在不同的诱导培养基的作用下加入小分子化合物诱导在体外可以分化为各种类型细胞的拟胚体向外胚层、角膜上皮祖细胞及角膜上皮细胞方向分化。拟胚体在低粘附六孔板中诱导培养4天后贴壁培养。随着诱导时间增加,观察从拟胚体爬出的细胞的形态,留取诱导第10天、20天、30天的细胞行细胞免疫荧光检测,提取RNA和蛋白质,从DNA和蛋白水平检测胚胎干细胞多能性基因OCT4、PAX6;角膜上皮祖细胞表面标记物K15和角膜上皮细胞标记物K12、K3表达水平。探索不同小分子和不同诱导培养基组合诱导特点及分化效率,寻求最优诱导效率方式。结果:1.小分子化合物IWP-2、SB505124和DAPT不同组合可在体外诱导人胚胎干细胞分化为角膜上皮样细胞;2.随着诱导时间增加,小分子化合物诱导组细胞胚胎干细胞多能性基因的表达逐渐下调而角膜上皮祖细胞和角膜上皮细胞表面标记物的表达逐渐上调;***培养基诱导分化作用下IWP-2、SB505124组合在第20天角膜上皮标记物K3、K12的表达量最大。UM培养基诱导分化作用下IWP-2、SB505124组合和IWP-2、SB505124、DAPT组合在第20天诱导分化效率最高。DKSFM培养基诱导分化作用下IWP-2、SB505124、DAPT组合在第30天诱导分化效率最高。结论:1.小分子化合物诱导刺激后从拟胚体爬出的细胞具有角膜上皮细胞形态学的特点,并且随着诱导时间增加细胞的数量逐渐增加;2.免疫荧光、PCR和WB结果提示随着诱导时间增加,小分子化合物诱导组细胞胚胎干细胞多能性基因的表达消失而角膜上皮祖细胞和角膜上皮细胞表面标记物的表达出现;3.不同的小分子化合物组合在不同诱导培养基的作用下的诱导效率不同;4.相同诱导培养基不相同小分子化合物在不同的诱导阶段诱导效率存在差异。

关键词： 基因工程   医学   制药   疫苗   转基因  

摘要： 基因工程是21世纪人类的一大重要发现,随着对基因研究的不断深入探索,基因工程已经在人类生活的很多方面发挥着重要作用,给人们的生产生活带来极大的便利.目前,基因工程在生物制药、疫苗研发等方面都有一定的应用,给医院研究开辟了很多新的发展领域,其中,转基因技术也为生物科学带来了发展的春天.本文介绍了基因工程的含义,并就目前基因工程在生物制药、疫苗研发以及转基因这三方面中的应用做出了细致分析,最后畅谈基因工程未来的发展趋势.

关键词： 人胚胎干细胞分化的心肌细胞   心脏毒性   安全性评价  

摘要： 目的:建立适合于药物心脏毒性评价的人胚胎干细胞分化的心肌细胞（hESC-CM）模型,并采用此模型评价化合物潜在的心脏毒性。方法:研究选用不同种类的心脏毒性药物:蒽环类抗癌药阿霉素(0.2,1,5,10和20μmol·L-1)、酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(0.2,1,5,10和20μmol·L-1)、β受体激动剂异丙肾上腺素(0.001,0.01,0.1,1和10μmol·L-1)、钙离子通道阻滞剂维拉帕米(0.1,0.3,1,3和10μmol·L-1),分别与hESC-CM孵育,采用实时细胞分析法和高内涵细胞成像技术实时监测心肌细胞搏动的频率、振幅、规则性及线粒体膜电位等指标在给药前后的变化,建立人胚胎干细胞分化的心肌细胞体外心脏毒性评价模型。应用此模型评价化合物A的心脏毒性。结果:阿霉素各浓度与hESC-CM共同孵育时,细胞的搏动振幅、搏动频率、搏动规则指数以及线粒体膜电位均降低;20μmol·L-1的伊马替尼抑制hESC-CM的搏动振幅、搏动频率、搏动规则指数和线粒体膜电位;异丙肾上腺素降低hESC-CM的搏动振幅、升高其搏动频率,但此作用具可逆性,对搏动规则指数、线粒体膜电位无明显影响;维拉帕米迅速降低hESC-CM的搏动振幅、搏动频率,但此作用具可逆性,细胞的搏动规则指数、线粒体膜电位无明显变化。测试化合物A和其阳性对照药托法替尼对hESC-CM的影响类似,对搏动振幅的抑制作用成浓度时间相关性,对搏动频率、搏动频率规则指数也有明显的作用,对线粒体膜电位的影响不显著。结论:利用人胚胎干细胞分化的心肌细胞可以建立一种可行的体外心脏毒性评价模型,结合实时细胞分析法以及高内涵细胞成像技术可快速、灵敏、准确的评价药物的心脏毒性。

关键词： 肉毒毒素   重链受体结合区Hc   DEC205   DNA疫苗   重组亚单位疫  

摘要： 肉毒毒素又被称为肉毒神经毒素,是由厌氧的革兰氏阳性菌肉毒梭菌产生的外毒素,是已知毒性最强的蛋白,根据其抗原性不同可以分为7种类型(BoNT/A-BoNT/G),A、B、E和F型可以导致人类中毒,其中A型肉毒毒素中毒致死率最高。各型肉毒毒素分子结构比较相似,分子量大小约150 kDa,由二硫键连接一个100 kDa的重链(HC)和一个50 kDa的轻链(LC)组成。肉毒毒素重链羧基端(HC)负责与细胞受体的结合,重链氨基端(HN)介导L链的跨膜转运;轻链具有锌离子内肽酶活性,能够将可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)切割而抑制神经递质的传递,最终会导致骨骼肌麻痹,呼吸衰竭而死亡。肉毒毒素生产工艺简单,稳定性良好,具有极强的致死性,是一种潜在的生物武器,极容易被制备成生物战剂应用。此外,近些年来由于肉毒毒素导致的中毒事件也时有发生,因此,对于预防和治疗肉毒毒素中毒的研究具有十分重要的意义。接种疫苗是一种有效预防肉毒毒素中毒的策略。鉴于早期研制的类毒素疫苗存在较多的缺陷,所以一直未能得到十分广泛的应用,因此研究新型肉毒毒素疫苗成为一种迫切的需要。破伤风毒素(TeNT)和肉毒毒素在结构上有较多的相似之处,所以借助于破伤风毒素Hc片段亚单位疫苗研究成功的策略来研制肉毒毒素亚单位疫苗。肉毒毒素受体结合区Hc能介导毒素特异性结合到神经肌肉接点处的神经末梢,此外,Hc片段不存在锌肽链内切酶活性,没有毒性,免疫动物后能刺激产生保护性免疫反应。基于这一重要发现,研究人员开始以肉毒毒素受体结合区Hc为靶标,开展新型肉毒毒素重组亚单位疫苗和核酸疫苗的研究。DNA疫苗是将编码抗原的基因克隆到真核表达载体中作为疫苗,免疫动物后该载体会在体内表达抗原,继而刺激机体产生免疫反应和保护作用。DNA疫苗具有很多优点:生产工艺简单、产品易纯化、便于储存,在接种者体内表达抗原,并且能够产生体液免疫和细胞免疫反应,然而,DNA免疫原性较低,不足以提供足够的保护作用,距离真正的人类临床应用还有一定的差距,需要进一步提高与放大祼DNA的免疫效果。树突状细胞(DCs)是体内已知最强的专职抗原递呈细胞,在抗原递呈和启动机体免疫应答中具有十分重要的作用。DEC205是表达于树突状细胞表面的内吞性受体,能够高效地介导抗原的摄取、加工处理以及递呈。为了增强肉毒毒素DNA疫苗的免疫原性,本研究开展了A型肉毒毒素受体结合区Hc抗原靶向DCs的DNA疫苗研究工作。将编码抗DEC205的抗体基因(scDEC)和编码A型肉毒毒素受体结合区基因(AHc)融合,并克隆到真核表达载体pVAX1中,构建了一个DCs靶向的DNA疫苗(pVAX1-scDEC-AHc),同时还设置了非靶向的疫苗载体(pVAX1-SAHc)和阴性对照(pVAX1)。免疫小鼠后证明该DCs靶向的DNA疫苗确实能够增强抗原特异性体液和细胞免疫反应;相比于非靶向DNA疫苗,其抗体滴度增强了2.5倍,细胞免疫反应也有较大程度的增强。抗体亚型测定的结果表明该DNA疫苗免疫小鼠后产生了以IgG1为主的抗体,即免疫反应以Th2型免疫应答途径为主。保护性试验结果证明pVAX1-scDEC-AHc疫苗免疫后能够刺激机体产生强的保护性免疫反应,30μg剂量免疫两次之后即能对103 LD50的A型肉毒毒素产生完全保护作用,而pVAX1-SAHc疫苗仅为12.5%的保护效率;三次免疫之后对104 LD50的A型肉毒毒素具有87.5%的保护效率,pVAX1-SAHc疫苗仅为12.5%的保护效率,这些结果表明pVAX1-scDEC-AHc DNA疫苗相对于pVAX1-SAHc疫苗具有更高的保护效率。通过脾细胞流式分析和免疫注射部位肌肉组织免疫组化实验研究了该DNA疫苗的DCs靶向效应,结果表明pVAX1-scDEC-AHc疫苗免疫后能够在免疫注射部位募集更多的DCs,促进其成熟,并且能够高效地促进免疫器官中的DCs进行增殖和成熟,这些结果提示该DNA疫苗能够增强免疫反应可能要归功于这种DCs靶向作用。本研究工作还对原核表达的可溶性B型肉毒毒素重组亚单位疫苗的免疫原性进行了研究。本实验将B型肉毒毒素受体结合区Hc段基因克隆到pTIG-Trx原核表达载体,利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株实现了BHc的可溶性表达,破菌上清用HisTrapTM HP蛋白纯化柱和Capto TM MMC层析柱进行纯化,纯化到了纯度较高的带His标签的和无His标签的BHc抗原。免疫小鼠研究该大肠杆菌表达的重组BHc的免疫原性和保护效果,结果表明1μg该重组BHc单剂量免疫小鼠就能对103 LD50的B型肉毒毒素产生完全保护作用,两次免疫则可以对104 LD50的B型肉毒毒素产生完全保护作用。测定BHc-His免疫的小鼠血清中特异性抗体滴度平均可以达到1

关键词： 液体活检   循环肿瘤DNA   ctDNA   突变   融合   质控   可视化   机器学习  

摘要： 液体活检是近些年来发展起来的新技术,该技术能够直接通过血液、尿液或其他体液样本对疾病,特别是癌症进行检测。由于样本取自于身体的循环系统,相比组织样本可以获得更加全面的疾病信息,因此可以较好地克服肿瘤异质性问题。液体活检的对象主要包括循环肿瘤细胞、外泌体以及循环肿瘤核酸（主要是循环肿瘤DNA）。因为循环肿瘤DNA取材方便,提取方法成熟可靠,可直接进行DNA建库并进行高通量测序,所以成了目前这三者当中研究最多的对象,在临床中也得到了更多应用。然而,虽然循环肿瘤DNA的实验技术较为成熟,但是其数据分析方法却较为困难,其原因在于肿瘤患者血液中循环的DNA片段只有极少部分来自肿瘤,其它大部分来自于身体其他正常细胞或者白细胞,这导致循环肿瘤DNA在所有细胞外循环DNA中所占的比例非常低,绝大多数会低于2%,有的甚至可以低于千分之一,使得敏感地检测这些突变并非易事。另一方面,样本的实验处理和高通量测序带来的错误会对数据产生很大影响,使得测序的结果数据中产生大量假阳性突变,而真实的突变很容易就淹没在这样的高背景噪声当中。所以,需要开发更好的数据分析方法,去除或降低循环肿瘤DNA测序中的系统噪声,同时提高真实突变的检出敏感度。本论文的主要内容是循环肿瘤DNA的测序数据分析方法,其核心内容来自于作者近些年来在循环肿瘤DNA高通量测序分析方面的研究积累,主要涵盖如何做数据预处理和错误校正以获得更干净的数据,如何在少量肿瘤DNA的情况下更敏感地检测基因融合,如何不使用常规分析流程即可快速地对目标突变进行扫描分析,如何更好地统计突变频率,以及如何对突变数据进行更好的交互式可视化。本论文还包括使用机器学习方法对测序数据进行建模分析,包括如何通过DNA的数据识别细胞外循环DNA,以及如何用深度学习的方法分析突变的遗传性和异质性。而本论文所阐述的方法、技术或者软件,不但可以用于分析循环肿瘤DNA测序数据,其中大部分还可以应用到肿瘤组织活检的数据分析当中。为了更高质量且更快速地对测序数据进行预处理,作者开发了两款软件,AfterQC和fastp。两款软件使用了类似的算法,不同之处在于fastp使用更高效的程序语言开发所以性能更强,提供了更多的实用功能和更好的并行处理,是AfterQC算法的工程化实现。这两款软件的设计思路都是仅在一次对FASTQ原始文件的处理中,自动化地完成测序接头（adapter）去除、全局剪裁、滑动窗剪裁（sliding window trimming）、质量过滤、数据统计和质量控制（quality control,QC）等操作,并输出质控报告、过滤后数据以及数据统计信息。对于双端测序（paired end,PE）的数据,软件创新性地提出了overlap分析算法,用于快速地将一对paired end的数据进行对齐,并以此检测PE数据中存在的接头污染。基于overlap分析,软件还可以识别每一对读段（Read）的overlap区间中存在的测序错误,并进行碱基错误校正。对于单端测序（single end,SE）的数据,软件创新地设计了一个检测3’引物接头污染的算法,该算法统计每一条Read的最后N（N=10）个碱基的碱基序列,然后基于对于高频的序列进行简易组装（assembly）,以拼接出原始的接头序列。具体的算法和软件实现请参照本论文第3章。常规的生物信息学流程通常有很多步骤,同时包括了很多过滤操作。过长的流程和过度的过滤都会造成数据分析的假阴性,而这对于循环肿瘤DNA测序数据的分析是不可取的。为了对目标变异进行快速的检测以及对变异进行可视化和验证,作者开发了MutScan软件,该软件基于Rolling Hash和Bloom filter较大地优化了DNA序列容错搜索的算法,可以仅仅通过扫FASTQ文件来检测数据中是否存在某些变异,并对检测出的变异展示一个交互式的堆叠图（pile-up）。该软件速度可以比常规流程快20倍以上,可以用于突变的快速筛查。该软件的算法和实现,请参照本论文第4章。基因融合检测也是肿瘤基因测序数据分析的一个难题。特别地,在肿瘤DNA成份较低的情况下,常规的软件较容易产生假阴性和假阳性。为了解决这一个问题,作者开发了两款软件,分别是FusionDirect和GeneFuse。类似地,FusionDirect主要用于算法优化和探索,而GeneFuse则是工程化实现,执行速度更快,输入输出结果更佳。该软件主要基于KMER反向索引的算法,建立KMER到基因组的映射,然后对于输入的Read,检测其KMER的映射集,并寻求映射集中的一致性融合位点。和MutScan软件一样,该软件提供了交互性的可视化结果,其算法和实现,请参照本论文的第5章。在调试肿瘤测序数据的生物信息学流程中,我们经常需要一些已知真实结果的数据,而这在临床中是比较

关键词： 转基因   生物安全   科学普及教育  

摘要： "基因工程"课程作为生物技术专业的专业核心课程,不仅承载着给学生传递专业知识的作用,更承载着转基因技术及生物安全相关知识的传播及科普作用.本文从大众对"转基因"的认识、转基因生物安全法、我国的转基因政策及转基因在我国农业发展中的潜力等方面阐述了转基因知识普及对我国农业发展的重要性.

关键词： 4-苯基丁酸   胚胎干细胞   心肌   分化  

摘要： 目的:干细胞的心肌诱导分化是一个连续但分阶段的过程,涉及内在转录调控程序和外源调节信号二者的协同。外源信号对心肌分化的影响,取决于细胞所处分化状态,因而展现了明显的阶段特异性和剂量依赖性。在心肌多阶段程序分化的进程中,有多个信号转导通路的参与,包括TGF-β、Wnt、Notch和Hedgehog等。这些通路在细胞不同的分化阶段,发挥了各自独特的作用,影响了细胞在分化节点的命运选择。通过调节这些信号通路,可引导细胞定向分化,制备性质均一、数量充沛的心肌细胞。一些小分子化合物对心肌分化的影响是现在研究的热点之一。4-PBA是一种小分子化合物,可以作为内质网应激的抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂。细胞在分化的过程中需要合成酶、抗体、血清蛋白以及细胞外基质等成分,内质网腔中会负载大量的新合成蛋白质。且干细胞在定向诱导心肌分化的过程中,前期需要悬浮培养形成拟胚体,拟胚体是一个三维球状结构;到了中后期细胞需要贴壁培养,并迅速形成复层结构,其内部细胞可能存在氧气不足、能量缺乏等情况,这些都可能会导致内质网应激反应。染色质结构的表观遗传调节是胚胎发育过程中基因激活或抑制的基础,其在干细胞心肌分化过程具有重要作用。本课题想探究4-PBA作为一种小分子化合物,对心肌分化有什么影响,且是到底是哪种机制在起作用,能否通过减缓内质网应激从而促进的分化,或者4-PBA是否是通过乙酰化的作用来影响心肌的分化,为胚胎干细胞向心肌分化效率的提高提供方法,为获得大量成熟、纯净且具有功能性的心肌细胞应用于临床提供希望。研究内容:探究在胚胎干细胞定向诱导分化的不同阶段,加入4-PBA对心肌分化的影响,并深入分析4-PBA对胚胎干细胞定向诱导分化的作用机制研究方法:1.以小鼠胚胎干细胞R1作为实验材料,用10-4MVC作为诱导剂,建立心肌分化模型。肉眼观察跳动拟胚体的数目,免疫荧光染色,观察α-肌辅蛋白表达以及real-time PCR检测不同时间段心肌特异性转录因子的表达,确定分化模型是否建立成功。2.在心肌分化的不同阶段收细胞提取RNA,real-time PCR检测内质网应激相关基因以及乙酰化修饰相关基因的表达。3.分不同时间段加入4-PBA,观察对拟胚体跳动数目的影响,初步确定4-PBA对心肌分化的影响。细化时间段,确定最佳加药时间。在不同时阶段的最佳加药时间内分别加入4-PBA、内质网应激激动剂衣霉素(TM)以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(NaB),对照组加入DMSO,观察拟胚体跳动的数目,real-timePCR检测不同阶段心肌特异性标志分子,westemblotting检测心肌特异性蛋白的表达。4.转染内质网应激标志基因pRK-ATF4,real-time PCR检测对心肌特异性标志分子的影响。研究结果:1.心肌分化模型的建立用10-4MVC做诱导剂,第1-5天在细菌培养皿中悬浮培养,在悬浮培养的第三天就可以看到有拟胚体的形成,边缘光滑且中央呈黑色,第5天后贴壁培养,在贴壁培养的第7-9天左右会看到有自发跳动的拟胚体,到贴壁培养的第7天跳动拟胚体的数目达到峰值。选取诱导分化第12天的细胞胰酶消化,免疫荧光染色,可以发现心肌特异性α-肌辅蛋白表达,并且有明显的肌小节结构。选取诱导分化的第0、3、5、7、9、12天收细胞提取RNA,real-timePCR检测发现Nkx2.5与Gata4在诱导分化的第五天开始明显升高。心肌细胞分化晚期特异收缩蛋白基因的表达Myl2、Myl7及Tnnt2在分化的第9天开始显著上调(p<0.01)。表明心肌分化模型建立成功。2.内质网应激相关基因以及乙酰化修饰相关基因的检测选取诱导分化的第0、3、5、7、9、12天收细胞提取RNA,real-time PCR检测内质网应激相关基因以及乙酰化修饰相关基因表达谱,发现Bip、ATF4、Xbp1的表达随着诱导时间的增加先降低,再升高再降低,在第12天的时候显著升高,CHOP的表达也是先降低再升高在第12天剧增。说明内质网应激相关基因的表达存在明显的阶段性,由此初步得出内质网应激可能参与了心肌的分化。乙酰化修饰相关基因Hadc2、4、6、7以及Cbp/P300的表达也具有明显的阶段性。3.4-PBA对心肌分化的影响Real-time PCR结果显示内质网应激相关基因的表达存在明显的阶段性,而体外心肌细胞的分化过程分为三个阶段,早期第(1-5)天、中期第(6-9)天、晚期第(10-12)天,所以在细胞分化的不同阶段加入内质网应激抑制剂4-PBA(1M),通过对拟胚体跳动数目的观察初步确定,4-PBA对心肌分化的影响存在三个阶段,早期促进,中期抑制,晚期促进。选取不同的时间点第1-2天、第3-5天、第1-5天加4-PBA收细胞提取RNA real-time PCR检测Nkx2.5与Gata4

关键词： 转基因生物   安委会   知识产权保护   转基因植物   生物技术产品   基因工程   《农业转基因生物安全管理条例》   农业  

摘要： (接上期)47.种植转基因抗虫水稻对野生稻资源保护有影响吗?答:近缘物种间通过花粉传播进行遗传物质(基因)的交流,是一种普遍的自然现象,不管是转基因作物还是非转基因作物的大面积种植,都会发生近

关键词： sweetpotato (Ipomoea batatas (L.) Lam.)   abiotic stresses   diseases and pests   herbicide   quality   gene engineering  

摘要： Sweetpotato is the seventh most important food crop in the world. It is mainly used for human food, animal feed, and for manufacturing starch and alcohol. This crop, a highly heterozygous, generally self-incompatible, outcrossing polyploidy, poses numerous challenges for the conventional breeding. Its productivity and quality are often limited by abiotic and biotic stresses. Gene engineering has been shown to have the great potential for improving the resistance to these stresses as well as the nutritional quality of sweetpotato. To date, an Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation system has been developed for a wide range of sweet potato genotypes. Several genes associated with salinity and drought tolerance, diseases and pests resistance, and starch, carotenoids and anthocyanins biosynthesis have been isolated and characterized from sweetpotato. Gene engineering has been used to improve abiotic and biotic stresses resistance and quality of this crop. This review summarizes major research advances made so far in improving agronomically important traits by gene engineering in sweetpotato and suggests future prospects for research in this field.