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关键词： BoNT/BL   TAT   基因工程   表达纯化   单链抗体   活性检测  

摘要： 肉毒毒素（BoNT）是由肉毒梭菌分泌的一类具有极强致死性外毒素,在国际上被归属为A类生物战剂。主要有A-H八种血清型,其中H型为新型报道的血清型,引起人类中毒的主要是A、B、E 3型为主。尽管肉毒梭菌所产生的神经毒素（AH）在其免疫学特性、毒力和自然致病动物类型上各不相同,但是它们的结构及生化作用极为相似,毒素从结构上可分为2个相对分子量不同的蛋白分子,即Mr约为50KDa的无毒性血凝素（HA）和Mr约为15KDa的神经毒素活性。后者由多肽链所组成,是在严格意义上所讲的肉毒毒素。产生BoNT的肉毒梭菌生长繁殖所需的条件苛刻,可是产生BoNT所需的条件相对宽松。人类BoNT中毒绝大多数是由于食入或误食含有肉毒梭菌而产生毒素亦或是含有肉毒毒素的食物而引起。从近年流行趋势看,食源性和婴儿肉毒中毒呈逐年降低的态势,而创伤性肉毒中毒呈增多趋势。肉毒毒素由口腔、咽喉等上消化道吸收后进入小肠等消化吸收主要作用神经突触及神经末梢,抑制神经突触间的介质乙酰胆碱（Ach）的释放,使肌肉收缩运动障碍甚至软瘫。本课题以筛选的抗B型肉毒毒素轻链（BoNT/BL）的pIT2-ScFv基因为模板,PCR扩增ScFv基因,插入含有TAT的原核表达载体pET28a-TAT,PCR、双酶切及测序鉴定表明成功构建重组表达载体pET28a-TAT-ScFv,将其转化至感受态***21（DE3）细胞中。添加IPTG于30℃诱导表达4 h后分析显示重组蛋白分子量约32kDa,蛋白主要以可溶性形式表达,优化诱导参数（培养基类型、诱导温度和时间）后进行高密度中试发酵。重组蛋白的纯化探索考虑其组氨酸标签与自身单链抗体的性质,将裂菌上清经chelating Sepharose Fast Flow（Cu2+）后,再经HiTrap Protein-A FF亲和层析柱精纯,得到高浓度高纯度的跨膜单链抗体蛋白（TAT-ScFv）,检测纯化的TAT-ScFv中内毒素含量为0.1EU/ml,免疫印迹法对ScFv进行鉴定并检测其与BoNT/BL的免疫结合活性,结果显示明显的特异性免疫印迹条带,利用非竞争酶免疫法检测TAT-ScFv和毒素的亲和常数为（1.133±0.273）×106L/mol。制备特异性绿色荧光蛋白（GFP-SNAP25-VAMP）,其中特异性添加的突触小泡膜蛋白（VAMP）为BoNT/BL作用底物,通过酶标仪检测荧光强度,判断BoNT/BL和TAT-ScFv活性,体外细胞实验培养小鼠成神经瘤细胞（N2a）,通过检测乙酰胆碱（Ach）验证BoNT/BL抑制Ach释放和TAT-ScFv中和BoNT/BL的活性。采用小鼠动物模型试验证实BoNT/BL LD50约为1.627 ug/只,小鼠体内救治实验证实制备的TAT-ScFv对BoNT/BL具有免疫中和活性。

关键词： 溶瘤痘苗病毒   细胞凋亡   miR-34a   Smac   多发性骨髓瘤   基因治疗   自噬性细胞死亡   组蛋白去乙酰化酶   白血病  

摘要： 恶性血液肿瘤主要包括白血病,骨髓瘤和淋巴瘤,是威胁全世界人类健康的主要恶性肿瘤之一,尽管新的研究技术和手段为血液肿瘤的治疗带来了希望,但是其发病率和死亡率仍然很高,尤其是白血病和MM。OVV疗法目前成为新型的抗肿瘤疗法之一,其不仅能凭其溶瘤效应激发体内的免疫应答,还能作为基因治疗工具介导外源治疗性基因的表达并发挥抗肿瘤效果。本课题分为两部分,第一部分是携带miR-34a和携带Smac的溶瘤痘苗病毒联合治疗多发性骨髓瘤的研究。第二部分是溶瘤痘苗病毒介导的Beclin-1基因过表达诱导的自噬对血液肿瘤的增殖抑制作用的研究。第一部分:携带miR-34a和携带Smac的溶痏痘苗病毒联合治疗多发性骨髄瘤的研究目的:构建携带miR-34a基因的溶瘤痘苗病毒OVV-miR-34a并研究它与OVV-Smac联合抑制MM细胞的增殖作用及其相关机制。方法:采用基因工程技术构建OVV-miR-34a;通过荧光显微镜和FACS技术检测OWs对MM细胞的感染效率;利用MTT法检测对照病毒OVV,OVV-miR-34a,OVV-Smac及双病毒联合对MM细胞株的体外生长抑制作用,同时感染正常细胞株和人正常原代细胞株检测OVVs的安全性;采用Real-time PCR和Western blot技术检测OVVs体外表达miR-34a和Smac的能力,以及对miR-34a的靶基因和Smac下游蛋白的调控;通过Wersterm blot和Annexin V/PI双染检测OVVs感染MM细胞后,是否有细胞凋亡的诱导和caspase信号通路激活;采用激光共聚焦显微镜观察Cytochrome c从线粒体内膜释放到胞浆的过程;构建RPMI-8226荷瘤裸鼠模型并瘤内注射OVVs,检测不同OVVs在体内抗肿瘤效果;组织病理学检测OVV-miR-34a与OVV-Smac体内抗肿瘤机制。结果:(1)成功构建出携带目的基因且而无野生型病毒污染的重组OVV-miR-34a。(2)OVV-GFP在MM细胞株RPMI-8226和U266的感染效率在48h,8MOI时高达49.28%和59.1%。(3)MTT检测结果显示相对于OVV-miR-34a和OVV-Samc单病毒使用,双病毒联合抑制MM细胞增殖的效果更强,且具有协同作用,同时对正常细胞株和原代细胞安全。(4)体外感染OVV-miR-34a和OVV-Smac后,目的基因miR-34a和Smac在mRNA和蛋白水平上都有高水平的增强表达,同时miR-34a的靶基因Bcl-2和SIRT1也都随着miR-34a的增强表达而下调且呈浓度依赖性。相对于miR-34a mimics而言,OVV-miR-34a表达miR-34a和下调Bcl-2的能力更显著,证明OVV可以作为一个良好的mircroRNA体外表达工具。同时,Smac下游的信号通路c-IAP/XIAP因OVV-Smac作用呈相应下调和被抑制。(5)OVVs感染MM细胞后,双病毒联合诱导的细胞凋亡率达58.1%左右,同时伴有PARP-1,caspase-9,caspase-3等凋亡蛋白的激活和剪切。激光共聚焦显微镜观察结果显示OVV-miR-34a与OVV-Smac联合作用能引起较强烈的Cytochrome c从线粒体内膜向胞浆释放。(6)体内抗肿瘤实验结果显示OVV-miR-34a与OVV-Smac联合作用能抑制RPMI-8226荷瘤裸鼠的肿瘤生长与延长小鼠的生存期,病理组织学检测结果证明双病毒联合能引起强烈的细胞凋亡,抑制血管的增生。结论:本课题成功构建新型的溶瘤痘苗病毒OVV-miR-34a,并从体外、体内多重方向上研究它与OVV-Smac联合抗骨髓瘤细胞生长的作用及其内在机制。本研究首次将OVV疗法与miRNA联合治疗MM,为进一步拓展OVV的临床研究领域奠定基础。第二部分 溶瘤痘苗病毒介导的Beclin-1基因过表达诱导的自噬对白血病和骨髓瘤细胞增殖的抑制作用的研究目的:构建新型的溶瘤痘苗病毒OW-Beclin1,并研究其诱导血液肿瘤细胞发生自噬性死亡途径及抑制血液肿瘤细胞增殖的效应。方法:采用基因工程技术构建携带自噬诱导基因Beclin1的新型溶瘤痘苗病毒OVV-Beclin1。利用OVV-GFP感染白血病细胞株HL-60和K562检测OVVs对白血病细胞的感染效率。采用免疫荧光染色技术(IP)以内质网标记蛋白Calreticulin作为内参,运用激光共聚焦显微镜观察经OW增强表达的Beclin1在细胞质内的亚定位。通过Real-time PCR和Western blot技术检测目的基因Beclin1在mRNA和蛋白水平上的增强表达。利用MTT法检测OVV和OVV-Beclin1对白血病和MM细胞株体外生长抑制作用,同时感染正常细胞株和人正常原代细胞检测OVVs的安全性

关键词： 遗传性疾病   基因工程   人类胚胎   基因编辑   芝麻开门  

摘要： 据《Scientific American》近日的报道,俄勒冈卫生科学大学(OHSU)的研究人员已经成功使用CRISPR-Cas9基因编辑系统,在人类胚胎中纠正肥厚型心肌病有关的基因突变。这一进展将遗传工程的实践操作从人类细胞进步到人类胚胎,是人类基因工程至关重要的一大步。人类的基因密码携带了大量的遗传信息,DNA和RNA分子决定了我们的过去(如我们与生俱来的能力)、我们的现在(如眼睛、头发

关键词： 基因工程   高中生物   教学体会  

摘要： 目的:观察基因工程知识配合高中生物教学对于提高学生学习效率的效果.方法:将2个高中普通班随机分为实验班和对照班,对照班采用常规生物教学方法,实验班在常规生物教学方法的基础上加用配合基因工程知识,分别观察两个班的教学效果.结果:实验班满意率85.0%,对照班满意率67.5%,两个班教学效果有比较有显著性差异.结论:应用常规生物教学方法配合基因工程知识教学方法对于改善学生的教学质量明显优于单用常规教学方法.

关键词： 小鼠胚胎干细胞   视网膜祖细胞   分化  

摘要： 目的 分析V6.5小鼠ESCs进行体外培养及扩增,分析该株小鼠胚胎干细胞的干性和增殖能力.方法 使用V6.5细胞株使其稳定传代扩增,用细胞免疫荧光染色法和流式细胞技术进行鉴定分析.结果 mESCs生长良好,能够实现体外大量扩增,细胞免疫荧光染色和流式细胞计数鉴定增殖能力标记物的阳性表达,细胞周期检测提示增殖活跃.mESCs诱导分化第20天,流式细胞术鉴定RPCs的特异性标记物,获得阳性率(51.34±3.02)％、(47.39±2.39)％、(33.41±4.21)％.结论 mESCs在体外培养能够有效保持其胚胎干细胞的干性和自我增殖能力,加上特定的诱导因子作用可实现mESCs定向诱导分化RPCs.

关键词： 多硫代二酮哌嗪类化合物   生物合成   ver基因簇   药效作用   顶头孢霉   AcRpn4基因   基因工程  

摘要： 罗杰斯无性穗霉(Clonostachys rogersoniana)是一株分离自西藏林芝的冬虫夏草定殖真菌，能够产生结构新颖，具有多种生物活性的多硫代二酮哌嗪类化合物verticillins。多硫代二酮哌嗪(Epipolythiodioxopiperazines，ETPs)是一类主要由真菌产生的重要的活性次级代谢产物，其二酮哌嗪母核中含有硫桥。Verticillins是二聚体的ETP类化合物。由于该类化合物在罗杰斯无性穗霉中组分复杂，产量极低，并且只能够在大米培养基上产生，严重阻碍了该类化合物的开发和利用。揭示该类化合物的生物合成途径，不仅可以用来提高化合物的产量、优化化合物的组分以及改进发酵条件，同时也有望发现一些新的有活性的同系物，并为该化合物的结构修饰与改造、作用靶点、机制研究、以及药效与毒性评价奠定基础。　　本研究以罗杰斯无性穗霉为研究材料，通过构建Fosmid基因组DNA文库，成功克隆得到了verticillin生物合成基因簇(ver)，并分析预测了基因簇中相关基因的功能，其中verP编码一个非核糖体肽合成酶，推测负责verticillin主骨架的合成。通过建立罗杰斯无性穗霉的遗传转化系统，我们对verticillin基因簇中各基因进行了逐一敲除。经大米培养基发酵，LC/MS检测发酵产物，发现该基因簇中包括verP在内的大多数基因突变株都不再产生verticillin，而verJ和verK基因敲除突变株中verticillin产量明显下降，verA突变株中verticillin产量与野生株相似。verP的遗传互补株能够恢复verticillin的产生。上述结果证明我们获得的ver基因簇负责verticillin的生物合成。我们通过生物信息学分析，对该基因簇中各基因的功能以及verticillin的生物合成途径进行了推测。此外，我们意外发现ΔverP菌株几乎丧失了产生分生孢子的能力，通过加入含有verticillin的发酵液提取物能够部分恢复其产孢，暗示着verticillin或其中间体在罗杰斯无性穗霉形态分化中起重要作用。　　在对verticillin的生物合成基因簇研究过程中，我们发现ΔverM突变株发酵产物的HPLC图谱中产生了新的化合物峰。进一步对ΔverM的发酵产物进行分离纯化和鉴定，得到了两个NRPS-PKS杂合的新骨架化合物，我们将其分别命名为gliocladiosinsA和B。verM编码一个可能的氧甲基转移酶蛋白，蛋白序列分析却发现VerM除具有氧甲基转移酶AdoMet-Mtase结构域外，还具有DNA转录抑制子Winged helix-turn-helix结构域，暗示着VerM可能具有调控功能。在完成罗杰斯无性穗霉全基因组测序的基础上，我们对该菌中可能的79个次级代谢物生物合成基因簇进行了生物信息学分析，并对其中的6个含有PKS-NRPS的聚酮合酶-非核糖体肽合成酶编码基因进行了转录分析。发现氧甲基转移酶基因verM的缺失能够引起一个在野生株中沉默的NRPS-PKS基因簇的激活，推测该基因簇可能与gliocladiosins A和B的合成有关。　　顶头孢霉(Acremonium chrysogenum)是临床上重要的抗感染药物--头孢菌素C(Cephalosporin C，CPC)的工业生产菌株。我们实验室前期工作通过对顶头孢霉T-DNA插入突变库的筛选，获得了一个显著影响顶头孢霉CPC产生以及产孢的基因，命名为AcmybA。我们通过RNA-Seq对顶头孢霉野生型菌株(WT)、AcmybA基因高表达菌株(AcmybAOE)及其敲除菌株(ΔAcmybA)的转录组进行了分析，得到了上百个AcmybA可能的靶基因。我们对其中的具有显著差异的10个靶基因分别进行了高表达研究，其中1个靶基因的过表达与AcmybA的敲除效果一致。序列分析表明该基因编码一个可能的26S蛋白酶体亚基合成的转录激活因子，我们将该基因命名为AcRpn4，AcRpn4全长1911bp，推测产物由636个氨基酸组成。AcRpn4高表达菌株(AcRpn4OE)分生孢子与头孢菌素C产量显著升高，而敲除株（ΔAcRpn4）的分生孢子及头孢菌素C产量较野生型菌株相比显著降低。转录结果表明AcRpn4OE中分生孢子形成的关键基因AcbrlA的转录量急剧升高，头孢菌素合成相关基因pcbAB和cefD1的转录水平较野生型菌株也有所提高。上述结果表明，AcMybA通过影响AcRpn4的转录调控头孢菌素C的产生以及分生孢子的形成。

关键词： 二十碳五烯酸   高山被孢霉   二酰甘油酰基转移酶   Δ17去饱和酶   基因工程  

摘要： 二十碳五烯酸（Eicosapentaenoic acid,EPA）,一种ω-3系列多不饱和脂肪酸（PuFAs）,是人体必须脂肪酸之一,因其具有抗凝血、降血脂、抗炎、抗癌、预防和治疗心血管疾病和糖尿病等重要生理功能而引起广泛关注。EPA传统来源于深海鱼油提取,因其受资源紧张、海洋污染等限制而难以满足市场需求,通过微生物发酵法生产EPA成为目前的研究热点。但是,目前微生物发酵法产EPA的含量仍较低,尚未实现产业化。因此,选育EPA高产菌株仍是研究重点。本文围绕选育EPA高产菌株展开,首先从高山寒冷地带筛选多株PuFAs生产菌株,同时克隆EPA油脂合成相关的关键酶基因MaDGAT,并在建立高山被孢霉遗传转化方法基础上,进一步构建产EPA的高山被孢霉基因工程菌,取得的主要研究结果如下:（1）筛选获得多株PuFAs生产菌株。从秦岭、大别山等地取土样,筛选获得大量微生物,基于关键酶基因Δ6去饱和酶基因克隆定向初筛多株产PuFAs菌株,利用气相色谱-质谱联用方法检测PuFAs生产菌株的脂肪酸组成成分,其中,7株菌可以合成花生四烯酸（ARA）,ITS序列鉴定这些微生物主要为被孢霉属真菌,未筛选获得可以合成EPA的菌株。（2）克隆获得微生物油脂合成关键酶基因MaDGAT,并在酿酒酵母中进行了功能验证。首先,利用RT-PCR的方法从高山被孢霉菌株中成功克隆获得油脂合成关键酶基因MaDGAT;其次,构建了酵母表达载体pYES2-MaDGAT,并转化甘油三酯（TAG）合成缺陷的酿酒酵母H1246进行功能验证,结果表明,MaDGAT基因在酵母中成功表达,使H1246菌株恢复了TAG合成和积累能力,荧光显微镜观察显示,酵母中重新出现了脂质颗粒,同时,酵母菌体油脂含量提高了35.6%。（3）建立了高山被孢霉遗传转化方法,并构建了产EPA的高山被孢霉基因工程菌。首先,建立了以红色荧光蛋白为筛选标记,农杆菌介导的高山被孢霉遗传转化方法,即农杆菌浓度达到OD600为0.8,与10～6个/mL的高山被孢霉孢子悬液等体积混合,添加乙酰丁香酮至终浓度为150μg/mL,于24℃,200 rpm共培养48 h,之后涂布含烯草酮72μg/mL的PDA平板,培养4-6天观察红色荧光筛选阳性转化子;在此基础上,构建了含MaDGAT基因和Δ17去饱和酶基因的表达载体pCAMBIA1303-DsRed-MaDGAT-D17,并成功转化高山被孢霉,获得5株产EPA的基因工程菌,其中产量最高的菌株摇瓶发酵结果显示,EPA占总油脂比例为10.5%,产量为0.91 g/L。以上研究结果为进一步构建高产EPA基因工程菌,推进微生物发酵法生产EPA的产业化应用奠定了基础。

关键词： DNA   高甲基化   VATS   局部晚期   纳米颗粒   胚胎干细胞   淋巴结   淋巴组织   钙信号通路   资讯  

摘要： 中国科学院昆明动物所发现肿瘤钙信号通路受高甲基化调控DNA甲基化严密调控着基因的表达,在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。肿瘤抑制基因启动子区往往发生DNA高甲基化,而癌基因启动子区则呈现出低甲基化。因此,异常的DNA甲基化通常被作为肿瘤诊断、分类和治疗的重要分子标记。然而,肿瘤是一种高度异质性疾病,尤其是在跨多种肿瘤类型的情况下,肿瘤DNA甲基化对基因表达的调控模式及规律并不十分清楚。

关键词： 材料基因组计划   材料信息学   高通量材料计算   材料基因组工程   Mat Cloud  

摘要： 总结材料计算和数据管理面临的挑战,阐述高通量材料集成计算的内涵,介绍我们在国内率先研制出的高通量材料集成计算平台和软件框架Mat Cloud.平台支持与不同高性能计算集群的动态绑定,基于图形化界面的第一性原理计算流程设计、持久化、解析和执行;大批量计算作业的生成、提交、运行监控,及容错和纠错的自动流程实现;支持数据的提取、规范化加工、及自动存储等.Mat Cloud形成了一个高通量材料集成计算软件框架,支持个性化插件的快速研发.

关键词： 罗非鱼   胚胎干细胞系   白血病抑制因子   未分化状态  

摘要： 胚胎干(ES)细胞来源于早期胚胎囊胚的内细胞团,具有自我更新与多向分化潜能,在再生医学、发育生物学、功能基因组学等领域具有极大应用前景,成为了当前生命科学研究的重点和热点课题。ES细胞分化的抑制是其体外培养的首要课题。自1981年小鼠胚胎干细胞首次成功建立以来,研究者相继采用饲养细胞、含不同生长因子如白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的条件培养基等抑制细胞的分化,但迄今仅少数物种如人、猪、牛、猴成功建立了ES细胞系。因此,ES细胞未分化状态维持及其分子机制在不同物种中的保守性如何,尚待进一步研究。鱼类ES细胞的研究主要局限于小型模式鱼类青鳉(Oryzias latipes)和斑马鱼(Danio renio)。采用无饲养细胞的条件培养基(含鱼类胚胎提取物、自身血清)目前已成功建立了青鳉、斑马鱼ES细胞系,同时从一些海水鱼中也得到了类似ES细胞的培养物。从而表明,饲养细胞对于鱼类ES细胞系的建立并非必需。罗非鱼(在本研究中,如未特殊说明均指尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus))作为世界性养殖鱼类,具有生长快、抗逆性强、繁殖周期短(14天)等特点,是开展ES细胞研究及其应用研究的理想对象。LIF是IL-6(白细胞介素-6)家族重要成员,在造血干细胞、间充质干细胞、原始生殖细胞、神经干细胞的增殖、存活等方面均具有重要作用,特别是在ES细胞未分化状态维持方面的作用,备受关注。大量研究表明,LIF通过激活JAK/STAT3、PI3K/AKT信号通路维持小鼠ES细胞的未分化状态,但其未能维持人ES细胞的未分化状态。LIF在其他物种ES细胞中的作用如何,对于揭示ES细胞多能性调控机制的分子进化具有积极作用。鉴于此,本研究以罗非鱼为对象,开展了以下两方面研究:一是采用条件培养基分离、培养罗非鱼胚胎囊胚中期细胞,成功建立了胚胎干细胞系(命名为TES1),通过体外多能性分子检测、体外分化诱导、胚胎嵌合体的形成等对其体内外多能性及分化潜能进行了鉴定,通过细胞增殖能力的检测对其培养基中的不同成分进行了检测与优化;二是对罗非鱼Lif蛋白(OnLif)在TES1细胞的增殖、存活及未分化状态的维持中的作用进行了深入研究,主要研究结果如下:1.胚胎干细胞系的建立1.1细胞的分离、培养从罗非鱼中期囊胚分离细胞,用含Hepes、青-链霉素、胎牛血清(FBS)、非蛋白因子5N(包括谷氨酰胺、丙酮酸钠、亚硒酸钠、非必需氨基酸和β-巯基乙醇)、人成纤维细胞生长因子(bFGF)、罗非鱼胚胎提取物(TEE)及其血清(TS)的DMEM条件培养基在28℃培养,获得三个细胞系TES1-3,都表现出ES细胞样的特征。本文以TES1为主要研究对象,在无饲养层培养条件下稳定传代至59代200天,仍具有ES细胞样的克隆形成能力及典型的ES细胞样表型特征(细胞圆形或多角形、核大、核仁明显等)。1.2体外多能性碱性磷酸酶(AP)活性及多能性基因的表达是ES细胞检测的重要指标。在本研究中,AP活性检测发现,第55代TES1细胞均呈现强阳性;RT-PCR分析结果显示,第16代及第50代TES1细胞均明显表达pou5f3,sox2,myc和klf4等多能性基因,此外,通过荧光免疫组化实验,从蛋白水平检测到Pou5f3显著表达于TES1细胞。这些结果证明,TES1细胞具有体外的多能性。1.3体外分化潜能证明ES细胞具有体外分化能力的重要手段是诱导细胞分化形成内、中、外3个胚层,并最终得到拟胚体(EB)。本研究中,通过在培养基中加入诱导剂RA,TES1经过10天悬浮培养,形成类似于EB形态的细胞团。现有研究已证明nf200,actn2,hnf3b和sox10分别是内、中、外3个胚层及神经嵴特异的分化基因,RT-PCR分析证实,EB细胞团均表达这些分化基因。同时在诱导后贴壁的细胞中也观察到多种不同类型的分化细胞如星型细胞、神经元细胞和扁平细胞等。由此表明,TES1具有体外多向分化的潜能。1.4体内分化潜能将标记了PKH26(活细胞红色荧光染料)的TES1细胞移植进入受体罗非鱼中期囊胚,胚胎发育后期发现有35%的胚胎(n=501)是PKH26细胞嵌合体,有13%嵌合体胚胎发育成幼鱼,同时观察发现PKH26阳性细胞随着胚胎的发育分布在罗非鱼身体的不同部位,如躯干、眼和鳍,从而表明,TES1细胞在体内具有多向分化潜能。1.5染色体分析对第40代TES1细胞的染色体经分析发现,在统计的100个细胞中,超过70%都是二倍体核型(2n=44),同时其形态未见异常。从而表明,长期培养的TES1细胞具有遗传稳定性。1.6不同成分对TES1细胞增殖活性的影响为优化培养条件,TES1细胞正常传代培养至第28代时,通过CCK-8分别检测多种因子对其增殖的影响。结