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关键词： 阿魏酸酯酶A   双拷贝基因工程菌   酶学性质   小鼠   免疫原性  

摘要： 阿魏酸酯酶是一种能水解植物细胞壁的关键酶,并释放阿魏酸。另外,阿魏酸酯酶能从许多微生物中被分离出来,但阿魏酸酯酶的活性和表达水平低,制约了该酶的应用。为提高阿魏酸酯酶A的活性或表达水平,本研究构建阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌,并初步探究阿魏酸酯酶A的免疫原性。主要研究内容及其结果如下:1.阿魏酸酯酶A双拷贝基因工程菌的构建及其酶学性质的研究采用PCR技术从黑曲霉GIM3.452扩增出阿魏酸酯酶A基因的cDNA序列,全长为846 bp,总编码282个氨基酸。并经NCBI Blast序列比对发现,该基因序列与GenBank已报道黑曲霉阿魏酸酯酶A基因序列的同源性高达90%以上。该序列在GenBank上的登录号是KP126605。将不含信号肽的AnFaeA基因分别与毕赤酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA连接,获得重组表达质粒pPIC9K-AnFaeA和pPICZαA-AnFaeA。先将pPIC9K-AnFaeA重组表达质粒经Pme I线性化后电转化毕赤酵母GS115宿主菌。通过摇瓶诱导表达筛选,获得一株酶活性最高为2.4 U/mL的工程菌,命名为GSKFA3。再将Sac I线性化后的pPICZαA-AnFaeA重组表达质粒电转化GSKFA3感受态细胞,并将其置于含Zeocin抗性的YPDS平板上培养。经筛选得到一株高效表达的双拷贝基因工程菌(酶活性为10.6 U/mL),命名为GSKZαFA20。经PCR检测发现,该基因能整合至毕赤酵母基因组上,并有良好的遗传稳定性。SDS-PAGE电泳和Westem-blot检测发现,所获得的表达产物是分子量为40 kDa的阿魏酸酯酶A糖基化蛋白。通过优化重组蛋白的培养条件,结果发现经1%甲醇诱导培养7d后,其酶活性高达15.49U/mL。酶学性质结果表明,重组阿魏酸酯酶A的最适温度是50℃,最适pH为6.0,且温度低于45℃和pH值为4.0～6.0时均具有较好的稳定性。2.阿魏酸酯酶A对小鼠免疫原性的研究选用63只3周龄体重相近、健康的雄性昆明小鼠,随机分为3组,每组21只小鼠。试验组小鼠在第5、15、25 d时背部皮下注射0.1 mg阿魏酸酯酶A蛋白,空载组小鼠注射相同剂量pPICZαA转X-33酵母宿主菌的诱导表达上清。记录小鼠的采食量和体重变化,采用ELISA技术检测小鼠血清中IFN-γ、IL-4和IgG的含量。结果发现,体内注射阿魏酸酯酶A对小鼠的生长无显著影响(P>0.05)。但阿魏酸酯酶A可显著提高小鼠血清中IFN-γ、IL-4和IgG的含量(P<0.05),且对照组和空载组之间差异不显著(P>0.05)。Western-blot检测结果表明阿魏酸酯酶A具备良好的反应原性。以上研究结果表明,阿魏酸酯酶A具有良好的免疫原性和反应原性,能启动机体细胞免疫和体液免疫,影响小鼠机体的免疫水平。综上所述,本研究通过构建阿魏酸酯酶A的双拷贝基因工程菌,并经过优化培养条件获得了高效表达阿魏酸酯酶A的双拷贝基因工程菌;黑曲霉GIM3.452阿魏酸酯酶A具有良好的免疫原性和反应原性,能启动机体细胞免疫和体液免疫,影响机体的免疫水平。这将为今后开发高效表达的阿魏酸酯酶A提供有价值的参考资料,同时为后续深入研究阿魏酸酯酶A的功能提供一定的理论依据。

关键词： 羟基磷灰石结合多肽   胶原纤维内矿化   无定形磷酸钙   稳定剂   生物矿化  

摘要： 背景和目的天然的骨组织本质上是复杂的有机/无机复合物,有着显著的机械性能,高强度、高韧性。这些优越的性能归结于有机物和无机物的结合以及它们独特的具有严格等级的空间结构,即以有机胶原纤维支架为矿化模板,纳米羟基磷灰石有选择性的沿着胶原纤维长轴c轴定向沉积在胶原纤维内部。人们一直尝试以生物仿生(biomimetics)的思路,即通过体外模拟骨组织的形成过程,来合成骨替代材料。理想的骨替代材料应该具有和骨组织类似的结构和功能。近年来,不断有学者尝试用不同方法合成骨替代材料,即对生物仿生矿化模型的体外研究。过去,有学者将胶原支架浸泡于人工模拟体液(simulated body fluid,SBF)中,以模拟体内环境进行仿生矿化,但此种方法并未真正的模仿骨组织结构,因为矿物质大量存在于胶原纤维的表面,属于“top-down”的组装模式,即晶体成核过程迅速的发生在胶原纤维外部,由溶液中的离子聚集形成簇(cluster),随着离子的不断吸附,cluster的体积持续增大,达到一定大小后成为临界晶核,再通过表面离子的继续沉积使得晶体不断生长。此种方式形成的矿化胶原缺乏韧性和强度。这一结果是由于缺乏类似于骨组织中非胶原蛋白(non-collagenous proteins,NCPs)的调控作用。在生物体中,蛋白的参与组成起着至关重要的作用,如输送原材料,无机物合成的酶促反应,调控无机物成核、生长及晶体形态等。在生物体矿化过程中,硬组织的非胶原蛋白含量虽然很少,但却对晶体的生长有着重要的调控作用。比如骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein,DMP-1)以及牙本质磷蛋白(dentin phosphophoryn,DPP)等。但是由于分离高纯度的天然蛋白过程复杂、价格昂贵等原因,越来越多的学者一直在探索非胶原蛋白的替代物用于模拟生物矿化,如聚天冬氨酸(polyaspartic acid,pAsp)和聚丙烯酸(polyacrylic acid,PAA)等。近年来,基因工程肽(genetically engineered peptide for inorganics,GEPIs)被广泛地应用于无机物材料的合成。在前期研究中,我们从牙釉质表面利用噬菌体表面展示技术淘选出EHABP这一小分子肽链,可以和无机界面的晶体有特异性的空间位点识别及空间构象匹配,并对其成核、晶化过程有着良好的调控作用。在本文中,我们探索了利用小分子肽链EHABP有效地稳定及诱导无定形磷酸钙,并通过PILP的作用渗透扩散至胶原纤维内部,从而引导胶原纤维内的矿化的体外仿生矿化模型的研究。与此同时,与PAA诱导的矿化胶原的进行比较,证实了 EHABP在稳定无定形磷酸钙以及诱导纤维内矿化中的显著作用,同时也探索了 EHABP在此过程中可能的作用机制。材料和方法第一部分将合成纯度为95%的小分子肽EHABP(Mw:954.06g/mol)的粉末溶解于去离子纯水中,稀释浓度为10mmol/L,充分振荡混匀后4℃保存备用。参照Gower等人提出的PILP溶液的配制方法,预先配制2L的pH为7.4的TBS缓冲液,分装在两个1L的器皿中,将CaC12·2H20和K2HP04分别加入体积1L的TBS缓冲液中,振荡混匀。混匀后,将含有EHABP的CaC12·2H20溶液与K2HP04溶液等体积混合(EHABP体积较小,可忽略不计)。使得钙离子的终浓度为4.5mM,磷酸根离子的终浓度为 2.1mM,EHABP 的终浓度为 ***、0.2mM、0.4mM 和 0.8mM。同EHABP小分子肽矿化液的配制方法,将PAA(1800g/mol)粉末加入钙离子溶液,之后与磷酸根离子溶液等体积混合,PAA的终浓度为500μg/mL。矿化液配制好后,放置于4℃保存备用。配置好矿化液后,准备进行溶液的浑浊度(optical density)的检测,溶液的浑浊度数值越高,说明溶液的稳定性越差,溶液中的颗粒越大。将不同浓度的EHABP矿化液滴入96孔板,室温25℃下进行分光光度计的检测,波长为590nm。检测的时间点为Od(即钙离子溶液与磷酸根离子溶液混合之后立即测量)、10d、20d和30d,并绘制曲线。对照组为PAA矿化液和未加入聚合物的空白钙磷溶液。将EHABP矿化液和PAA矿化液以及空白钙磷溶液放置15天后,肉眼可观察到溶液是否澄清或浑浊,即肉眼观察三种溶液的稳定情况。接下来用电子透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)来观察溶液中的颗粒情况。第二部分将Ⅰ型胶原完全浸泡在EHABP矿化液中进行矿化,在不同时间段将EHABP矿化胶原捞出进行检测,包括透射电镜(transimission electron mi

关键词： 类器官   CF   实验室   癌症研究中心   胚胎干细胞   肠道干细胞  

摘要： 在50岁生日之前,埃尔斯·范德海杰登感到比以往更虚弱了。她出生时就罹患一种叫囊性纤维化(CF)的遗传性疾病。她努力和疾病作斗争,完成了大学学业,还找到了一份颇有挑战的咨询师工作。但是,住在荷兰小镇上的范德海杰登经常觉得"有一片乌云笼罩在头顶。"2015年,她开始感到疲劳,很容易就气喘吁吁,她觉得自己的生命可能走到尽头了。随后,她在报纸上看到了一个名叫费边(Fabian)

关键词： 价值理性   世界科学中心   人类基因组计划   人性世界   数学化  

摘要： 科学是人类的伟大创造,业已成为文明的基础,同时也背负了当代社会危机的原罪。人类倚重科学,摆脱了对于大自然的恐惧,却又陷入了对于"科学的"技术的崇拜,因而直面利弊选择的困境。科学在未来文明中将扮演什么样的角色,解读其历史或许有助于我们的探索,历史这面镜子可将现在的眼光反射成未来之像。科学的历史——科学重大进展的历程,包括科学的诞生及其发育成长的演化特征。我们今天所理解的科学,诞生在16世纪和17世纪之际的欧洲,

关键词： 沙门氏菌   全基因组测序   耐药性   等温扩增   LAMP   蛋及其制品  

摘要： 沙门氏菌是引发全球性的食源性疾病的主要致病菌之一,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)已经将其列为具有中等危害和严重危害的食物传播性病原。蛋及其制品、蔬菜、肉类等均是沙门氏菌重要的传播途径。在2 500多种沙门氏菌血清型中,肠炎沙门氏菌(Salmonella ***)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella ***)及海德尔堡沙门氏菌(Salmonella ***)是常见的3种致病血清型。因此,建立快速、有效的检测方法对上述血清型沙门氏菌进行检测,将在食品安全保障、公共卫生监测以及禽病预防和控制中发挥巨大作用。另外,沙门氏菌耐药性的不断增强一直以来也是备受关注的全球性问题,通过对耐药性的监测,不仅对防控沙门氏菌疫情暴发及合理使用抗生素提供科学依据,也为建立相关法律法规提供数据支持。近年来,全基因组测序(whole genome sequencing,WGS)技术发展迅速,尤其是在对食源性疫情暴发的检测和监控方面,起了至关重要的作用。全基因组测序技术在不久的将来在食品安全方面将发挥非常重要的作用。在众多沙门氏菌检测方法中,real-time PCR等分子生物学方法得到了广泛的应用,但是这些方法仍较耗时,且技术要求和检测成本均较高,仍有很大的完善空间。DNA等温扩增技术,尤其是环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以其特异性强、灵敏度高、快速、准确和操作简便等优点已经在众多领域的微生物病原体检测方面得到了日益广泛的应用。首先,本研究将通过对147株分离自蛋及其制品和鸡肉中的沙门氏菌进行全基因组测序分析,从构建的系统进化树、单核苷酸多态性及耐药基因分析等方面对3种常见血清型沙门氏菌(肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌及海德尔堡沙门氏菌)进行较为全面系统的对比分析,为沙门氏菌监控及流行病学调研等工作提供理论基础和数据支持。其次,首次对肠炎沙门氏菌的2种特异性检测目的基因prot6E和sef A基因的DNA序列及其产物蛋白结构进行对比分析,为肠炎沙门氏菌检测方法的建立提供理论基础。再次,首次应用Genie III系统分别建立肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌LAMP方法分别对食品中的肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌进行特异性检测,为食品及其所在环境中的沙门氏菌的检测及监测提供强有力的工具。另外,本研究以美国食品药品监督局(*** and Drug Administration,FDA)细菌学分析手册(Bacteriological Analytical Manual,BAM)标准方法为参照,首次对新型等温扩增仪器3M Molecular Detection System(MDS)、ANSR Pathogen Detection Syste(PDS)和Genie III检测沙门氏菌的效果进行评估,并与real-time PCR检测结果进行对比分析,为上述及相关检测系统的选择、使用、评估及新检测系统的研发等提供支持。目前,国内外传统检测方法种分离沙门氏菌所选用的增菌液和培养基种类繁多,且各种增菌液和培养基的分离效果的比较研究甚少。因此,本研通过对3M MDS和ANSR PDS仪器推荐的非选择性增菌液(蛋白胨缓冲液;buffered peptone water,BPW)与FDA BAM推荐使用的非选择性增菌液(乳糖肉汤;lactose broth,LB)在增菌培养中的作用进行了比较研究,并应用该两种方法对非选择性增菌(pre-enrichment)和选择性增菌(enrichment)后的样品进行检测,并将结果与FDA BAM的结果进行对比分析,筛选出更适宜的增菌液。最后,本研究探究存储温度及时间对待检样品氯化镁孔雀绿(Rappaport-Vassiliadis,RV)和连四硫酸盐(Tetrathionate,TT)增菌液中沙门氏菌存活的影响,旨在为完善沙门氏菌的传统检测方法,新试剂的研发,政府部门建立相关法规及降低工业界检测成本等方面提供理论和技术支持,进而提高检测及监测食源性疾病爆发的能力,确保食品安全。主要研究结果如下:1.通过对147株沙门氏菌全基因组测序结果进行对比分析,结果发现,肠炎沙门氏、鼠伤寒沙门氏菌和海德尔堡沙门氏菌菌株的进化随时间、地域、来源的不同呈现多样性,且菌株间存在种间水平基因转移。2.通过全基因组测序,对147株肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和海德尔堡沙门氏菌菌株携带的耐药基因进行对比分析,发现不同血清型及不同来源的耐药菌株携带耐药基因不同。其中,肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌耐药菌株携带的耐药基因表型多于海德尔堡沙门氏菌,鸡肉源性的沙门氏菌携带耐药基

关键词： 基因工程   转基因安全问题   转基因食品  

摘要： 随着科技的进步和时代的发展,曾经作为生命科学的前沿技术的转基因技术不仅走进了人们的生活,而且使人类的生活发生了很大的变化,该技术所带来的转基因食品也已经融入到了人们的生活之中。目前,转基因食品的安全性问题是大家都非常关心的问题,也是目前争论的一个焦点。在与此问题密切相关的基因工程原理课程的教学过程中,我们即引导学生进行思考并展开讨论,也向他们传授最新的研究现状与相关形势,从而形成科学的逻辑思维和辩证思考的能力。

关键词： 类胚胎干细胞   人类   生物钟   Development   成功  

摘要： 近日,一项刊登在国际杂志Development上的研究报告中,来自约翰霍普金斯大学的研究人员通过研究利用细胞信号化合物的混合制剂成功逆转了人类胚胎干细胞(ESCs)的生物钟,从而就能赋予细胞相同的灵活性;研究者表示,促进干细胞的发育生物钟回归至早期阶段或许就能够为我们提供机会来诱导人类干细胞成为任何一种类型的细胞,从而用作器官移植和遗传性疾病模型的开发中,最终这些细胞或许就能够被用来开发出嵌合体动物。

关键词： 海参i-型溶菌酶   毕赤酵母基因工程菌   筛选   饲料添加  

摘要： 溶菌酶是一种碱性蛋白酶,主要通过破坏细菌细胞壁中肽聚糖的β-1,4糖苷键,从而使细菌因为肽聚糖细胞壁的“散架”而死亡。研究发现,海参i-型溶菌酶具有较广泛的抑菌谱,具有较高的应用价值和应用范围。(1)本课题首先研究了海参i-型溶菌酶的高效表达,将实验室已经在基因水平上进行优化的三种海参i-型溶菌酶基因,进一步构建成三种毕赤酵母基因工程菌,即:工程菌一号(pPIC9K-Sj Lys/GS115),工程菌二号(pPIC9K-Sj Lys-HisN/GS1 15)和工程菌三号(pPIC9K-opt-Sj Lys/GS115),目的是筛选出高产溶菌酶蛋白的生产菌株。首先从大肠杆菌中提取表达质粒,即:pPIC9K-Sj Lys(工程菌一号质粒)、pPIC9K-Sj Lys-N(工程菌二号质粒)和pPIC9K-opt-Sj Lys(工程菌三号质粒),然后用内切酶Bgl Ⅱ线性化,再通过电转化法将质粒分别转入毕赤酵母菌株GS115中,构建出三种毕赤酵母基因工程菌,再利用MD平板进行组氨酸缺陷型筛选,进一步经G418抗:性筛选高拷贝转化子,甲醇诱导摇瓶发酵,后经SDS-PAGE凝胶电泳筛选高产菌株,并进行抑菌圈实验进一步验证其活性。实验得到1株能高效表达海参i-型溶菌酶的菌株,命名为HS1-1。(2)其次将海参i-型溶菌酶作为饲料添加剂饲喂海参。考察海参i-型溶菌酶对海参生长、免疫等方面的影响。实验对照组一:投喂饲料:对照组二:投喂饲料和益生菌;实验组:设置了五个溶菌酶梯度(1000～5000U/kg)。对海参生长情况进行比对,分别检测其体内的超氧化物歧化酶,碱性磷酸酶,酸性磷酸酶以及溶菌酶进,进行对比分析。结果表明,添加了 4000U/kg溶菌酶的实验组,海参生长性能最优,体重增加最多,且其免疫酶活性相对最高。通过实验得出初步结论,以溶菌酶和益生菌饲喂海参的最佳浓度为4000U/kg和1*108cfu/g,饲喂时间为45d时,海参体内与免疫和抗氧化相关的酶活性达到最高,以后趋向稳定。本课题的研究不仅对后期溶菌酶放大发酵试验提供了有力的物质基础,更是对海参i-型溶菌酶的应用提供了理论基础和实验依据,具有较高的研究价值。

关键词： 镉   心脏毒性   细胞凋亡   电生理变化   胚胎干细胞   信号通路  

摘要： 镉是一种有毒重金属,可经摄取镉污染的食物或吸入含镉的空气进入人体内。由于其在人体内很难被清除,因而会经血循环在多个器官与组织内蓄积,从而导致全身多器官损害,如肝、肾、脑、生殖系统和心血管系统毒性。其中,心脏是镉作用的重要靶位之一,且心脏对镉十分敏感,低剂量镉便能引起心脏毒性。在大鼠中低浓度镉就即可引发心肌细胞变性、坏死以及闰盘的损伤。此外,镉还抑制了大鼠心肌细胞传导系统的兴奋性,并可降低心肌细胞的能量代谢。然而,镉的心脏毒性机制研究大多建立在动物模型上,而动物心脏组织与人体存在很大的区别,如心肌结构蛋白的组成、细胞内钙信号的调节、电生理变化等方面。因而,建立在动物模型上的镉心脏毒性机制并不能如实地反映人体心脏镉中毒的情形,而正常人体心肌组织又难以获取且不可再生,同样不适于镉毒性机制的研究。为了解决这一难题,本实验通过人胚胎干细胞诱导分化成心肌细胞作为细胞来源,并将所得的细胞在氯化镉处理下体外模拟正常人体暴露于镉离子后的心脏毒性表现,并研究其潜在的毒性机制与治疗策略。在本实验中,我们利用人胚胎干细胞系H9(Human embryonic stem cell line H9,H9 hESC)定向分化为H9来源的心肌细胞(H9-CMs),该心肌细胞同样具有人源性。在H9-CMs经镉处理后,我们发现其形态学和电生理活动较对照组均有明显改变,并出现心肌细胞凋亡现象。而RNA水平检测结果提示MAPK信号通路在这一过程中有较明显的变化,随后我们对该信号通路加以验证,并发现镉对人源性心脏毒性可能的缓解机制。

关键词： WSSV   vp28   集胞藻   三亲接合转移   转基因藻纯化  

摘要： 对虾白斑综合症病毒（WSSV）自从1992年首次发现至今已在养虾业造成巨大损失。尚未见存在商业化的防治WSSV药物。至今对WSSV的防治手段主要是加强环境管理、筛选无病毒虾苗和选育抵抗力强的品种等。近15年来,已证明WSSV囊膜结构蛋白VP28在病毒感染细胞的过程中起关键作用。对虾摄入VP28后对虾的抵抗WSSV能力增强。我们研究团队已报导的对虾幼苗口服转vp28基因鱼腥藻后,再用WSSV攻毒表现出了对WSSV的抵抗力（成活率高达68-83%）。目前我们转vp28基因工程鱼腥藻的研发已经进入中试阶段。转基因鱼腥藻显示了它的一些优势,但仍然存在三方面制约工程藻效果和产量的因素:1)转基因鱼腥藻中vp28基因表达量较低,生长较慢;2)光反应器培养有待改进,以提高产品生产效率;3)生产过程还是有杂菌杂藻干扰。为此,本文从三方面做了探索,并取得以下结果:1.构建了生长更迅速vp28表达效率更高的转基因集胞藻6803:为了提高生物量,加快生长速度,减短生产周期。我们需要重新考虑vp28基因的宿主系统。集胞藻6803（Synechococcus ***6803）的优势有:1)单细胞,结构简单;2)遗传上既可以用三亲接合转化法又可以用更简便的自然转化法;3)适应性强,是首先完成基因组测序的光合生物。本研究从Genbank中查得vp28基因的序列,让公司全合成。然后用质粒p RL489连接目的基因vp28,构建了穿梭表达载体。然后转入大肠杆菌扩增。通过三亲接合转移法或自然转化法得到转vp28基因的集胞藻6803。2.测定集胞藻的生长条件,以及vp28基因的表达:转入外源基因的工程藻在生理生化上与野生型藻种相差较大。本文从生理生化两个方面来探索工程藻生长需求和基因的表达峰值,从而调整生产条件(350-400μmol·m-2·s-2间,最适温度上调至35±5℃,最适pH=7.5-8.0)达到效益最大化通过氧电极检测不同条件下的净光合找到工程藻的最适生长条件。用实时荧光定量PCR检测到vp28基因最佳生长条件下工程藻不同时期中vp28的基因表达是对数生长期表达率最低稳定期最高。情况来分析基因表达的峰值,从而确定采收的时间为12-15天。在测定其表达的同时发现集胞藻的基因表达效率优于现阶段使用的鱼腥藻。3.纯化藻种,减少杂菌杂藻干扰规模化生产转基因蓝藻由于涉及人员多,生产环节复杂,增加了藻种受杂菌杂藻污染的机会。这会造成多种不利影响:（1）受到杂菌杂藻的干扰培养液p H会变酸,藻细胞变黄,生长慢（2）不纯的转基因藻液混有杂质杂藻稀释转基因藻对产品的加工使工艺更复杂繁琐并使质量变差。（3）含杂菌杂藻的产品降低药效还会产生毒副作用。转基因藻种在形态上难以与野生藻区分,在生理生化上又难以和含转空载体的品系区分,所以需要从生理、生化和分子三个层面来分离这三种亚品系。过去报道的研究通常是从不同形态的物种中分离出所需的野生型藻种,而尚未见从相同形态的藻体中分离出转基因藻和野生藻种的报道,更未见转基因品系和转空载体品系纯化的报道,我们在本研究中开始做些探索。本研究中,以转WSSV病毒vp-28的鱼腥藻7120（Anabaena *** 7120）为例,探讨转基因蓝藻纯化的方法。首先从传统的划板/涂布法来获得单藻落开始,进而需要利用荧光定量PCR、电泳、Western Blot等分子生物学手段来鉴定以及分离转基因藻和野生藻,最终达到分离三种不同亚品系的目的。研究中发现转基因集胞藻6803相对于野生型集胞藻表现出了对极端环境更强的适应性,尚需进一步做研究。本文中虽构建了转vp28基因的集胞藻6803但是对其抵抗WSSV病毒的效果尚未检测,望之后的研究中能对该藻进行大规模生产的试验并进行药效检测。