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关键词： 甲醇   核酮糖单磷酸途径   大肠杆菌   定向进化  

摘要： 甲醇是一种重要的有机化工原料,价格低廉,碳还原度高,在生物化工中是糖质原料的理想替代原料。但是常用的工业微生物宿主如大肠杆菌不能利用甲醇作为碳源,这限制了甲醇在生物化工领域的应用。通过表达甲醇脱氢酶、3-己酮糖-6-磷酸合成酶和6-磷酸-3-己酮糖异构酶在大肠杆菌中构建可同化甲醇的核酮糖单磷酸途径。以基因工程菌作为出发菌株,通过连续传代和定向进化引入随机突变,突变株进行以甲醇为碳源的压力筛选,得到了2株可以利用甲醇生长的突变株。在以甲醇为辅助碳源的培养基中,25113Δfrm A/p ZWM1-13号突变株较原始菌株25113Δfrm A/p ZWM1菌体生长量增加27.6%。对25113Δfrm A/p ZWM1-13号突变株进行^(13)C示踪分析检测蛋白质合成氨基酸,结果表明氨基酸中^(13)C比例有明显提高。其中,甲硫氨酸^(13)C标记含量增加7.236%。因此,定向进化有效地提高了基因工程大肠杆菌的甲醇利用效率。

关键词： 人源铜锌超氧化物歧化酶   基因工程   巴斯德毕赤酵母   表达   优化  

摘要： 超氧化物歧化酶(SOD)由于具有高效清除氧自由基的作用而广泛用于食品、日化和医药领域。作者研究了提高SOD产量的基因工程新方法。利用密码子优化后人源铜锌超氧化物歧化酶基因,构建亚克隆及表达载体,最终转化进巴斯德毕赤酵母进行表达。通过正交试验,分析工程菌的最适摇瓶表达条件。摇瓶正交试验确定最优表达条件为:28℃,诱导剂体积分数1.0%,接种体积分数1.0%,最优表达水平为2 339.4 U/mL,与现有的一些研究相比,其表达量提高了近3倍。这些结果表明:对人源铜锌SOD经过适当的密码子优化和发酵条件优化,使酵母表达量显著提高,有助于解决SOD原料来源的局限。

关键词： 乳酸菌   基因工程   重组   综述  

摘要： 乳酸菌是人和动物肠道内常见的益生菌,具有提供营养、改善胃肠道功能、提高免疫力、抗菌等作用,随着基因工程技术的发展,选择乳酸菌作为载体传递系统,在细菌、病毒、肿瘤、寄生虫等领域构建了一系列重组乳酸菌。本文就基因工程重组乳酸菌的制备及防治效果作一综述。

关键词： 转基因作物   安全评价   代谢组学   差异代谢物   能量代谢  

摘要： 转基因技术的应用十分广泛,尤其是用于获得具备优良性状的农作物新品种。但在转基因作物商业化推广的同时,农产品的安全问题一直备受关注。组学技术的不断发展,为转基因作物的安全评价提供了新方法。鉴于代谢组数据具有即时性和可获得性的特点,本文基于之前的研究,通过收集转基因作物代谢组方面文章的数据,对6种作物的野生型和转基因型样本的比较结果进行整合分析,通过显著性检验得到了8种代表性差异代谢物。代谢通路富集分析结果显示与这8种差异代谢物关联的蛋白质主要参与能量代谢过程,与已报道的单一物种转基因非预期效应的研究结果相同。该研究从代谢物和蛋白质两个方面说明转基因事件影响了这6种作物的能量代谢过程,并且该现象很可能普遍存在于多种转基因作物中。希望本研究结果可以为转基因农作物的安全评价提供参考。

关键词： 生物化学   医学   教学改革   基因工程  

摘要： 本文阐述了探究、培养学生分析解决问题能力的重要性,通过对学生的问题意识培养进行探讨,构建 平等的师生关系,转变教学观念,提高学生问题意识,开放学生思考方式,强化学生基本知识和提高其基本技能.

关键词： 植物生物技术概论   基因工程   视频资源   视频实验期刊(JoVE)   教学  

摘要： 《植物生物技术概论》基因工程部分信息量大、概念和技术方法多、涉及范围广、内容抽象,但课时数有限,不利于学生吸收理解。将网络视频尤其是Jo VE视频应用于该部分内容的教学,对教学效果的提高大有裨益。对网络视频资源的应用在《植物生物技术概论》基因工程部分教学过程中取得的效果进行总结,可为该部分内容的教学提供一定借鉴。

关键词： 骨成型蛋白4   胚胎干细胞   生殖细胞   分化  

摘要： 目的探究骨形成蛋白4(BMP4)对小鼠胚胎干细胞向生殖细胞分化的调控作用。方法体外培养小鼠胚胎干细胞(m ESC),细胞被分为对照组、BMP4低剂量组(低BMP4组)和BMP4高剂量组(高BMP4组);低BMP4组和高BMP4组m ESC使用BMP4处理,剂量水平分别为5 ng/ml和10 ng/ml。干预72 h后,采用碱性磷酸酶(AP)染色法检测各组细胞内AP水平;采用Real-time PCR和Western印迹检测各组细胞多能性相关基因Oct4、c-Myc及生殖相关基因Vasa、Scp3、Stra8的表达水平。结果 AP染色结果显示低BMP4组和高BMP4组细胞AP水平显著低于对照组(P<0.05),且高BMP4组下降更为显著(P<0.05);Real-time PCR和Western印迹结果显示低BMP4组和高BMP4组细胞Oct4、c-Myc表达水平显著低于对照组(P<0.05),Vasa、Scp3、Stra8表达水平显著高于对照组(P<0.05),且高BMP4组这些变化更为显著(P<0.05)。结论 BMP4具有促进小鼠胚胎干细胞向生殖细胞分化的功能,可为应用BMP4诱导ESCs向生殖细胞定向分化提供理论基础。

关键词： 安全性试验   柑橘园   草铵膦   杂草   防效   L-谷氨酸   不可逆抑制   转基因作物  

摘要： 草铵膦（Glufosinate）是L-谷氨酸的膦酸衍生物，作用机制是通过对谷酰胺合成酶（GS）不可逆抑制及破坏后而引起植物死亡，具有广谱、非选择性、触杀、低毒，在土壤中移动性差、易降解的特点，在抗草铵膦转基因作物中广泛使用…。随着2016年7月对百草枯的停止销售和使用，国内非耕地柑橘园除草剂品种减少，为更好地防除橘园杂草，提高柑橘产量和品质，于2016年进行了草铵膦对柑橘园杂草的防效及安全性试验。

关键词： 基因工程   任务驱动   教学目标   设计任务  

摘要： "基因工程"课程是生物工程专业的专业基础课程。系统学习该课程可为众多相关专业课程的学习打下良好的基础。本文介绍了任务驱动教学法的概念,从明确教学目标、设计任务、任务执行、任务反馈等方面对任务驱动教学法在"基因工程"教学中的应用进行了简单介绍,并根据本教学法在"基因工程"课堂中的应用效果,提出了其在运用过程中的注意事项。任务驱动教学法的实施将课堂转变为学生主体、教师主导,提高了学生学习主动性、积极性,提高了"基因工程"课堂教学质量和效果。

关键词： 单纯性先天性心脏病   NKX2.5基因   DNA测序   基因突变  

摘要： 目的对中国南方地区单纯性先天性心脏病患者进行NKX2.5基因胚系突变的筛查,探讨其在单纯性先天性心脏病发生中的作用及基因型与表型的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)结合DNA测序技术,对我国南方地区224例单纯性先心病患者和121例健康个体进行NKX2.5基因(包括基因的编码区,5′和3′非翻译区以及外显子与内含子的连接区域)进行突变分析。结果 NKX2.5基因中未检测到致病突变,仅发现三种已报道的SNPs:rs2277963(c.63A>G,GAA>GAG,***21Glu),rs3729753(c.606G>C,CTG>CTC ***202Leu)和rs703752(c.975-61 G>T),基因型频率及等位基因频率与NCBI数据库中已报道的中国人群携带率无显著性差异。结论中国南方地区单纯性先心病患者中NKX2.5基因致病突变极少发生,其致病突变的发现可能限于某些家系或者有特殊表型的先心病患者中。NKX2.5基因在我国南方地区单纯性先天性心脏病中的致病作用有待进一步研究。