关键词:
人肾小球系膜细胞
免疫球蛋白A
蛋白质谱
DNA测序
摘要:
目的:探讨人肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMCs)中是否表达免疫球蛋白A(immunoglobulin A,Ig A)。方法:培养人HMCs细胞系,以免疫荧光染色检测Igα、Igκ、Igλ在系膜细胞中的表达;以反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和DNA测序检测HMCs中Igα、Igκ、Igλ恒定区转录本表达;以Western blot方法检测细胞裂解液及培养上清液中Igα、Igκ、Igλ蛋白水平表达;以jacalin为配体的亲和层析纯化上清液蛋白质,以蛋白质谱检测纯化的蛋白氨基酸序列。结果:免疫荧光染色检测到HMCs细胞浆Igα、Igκ、Igλ的阳性表达;RT-PCR检测到细胞内Igα1、Igα2重链、Igκ轻链、Igλ轻链恒定区转录本表达,且其核苷酸序列与美国国立生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information,NCBI)数据库相应的mRNA序列比对,同源性分别达到99%、97%、98%和97%;Western blot检测到细胞内Igα1、Igα2和Igλ蛋白水平的表达,Igκ目前检测为阴性;细胞上清液中可见完整Ig A分子表达;以jacallin为配体亲和层析纯化的培养上清液中的Ig A,蛋白质谱测序所得的氨基酸片段序列与NCBI数据库比对,显示HMCs分泌的蛋白质与B细胞表达的Igα1恒定区52~104之间53个氨基酸、154~221之间68个氨基酸、以及276~327之间52个氨基酸的序列完全相同,与Igα2重链恒定区52~113之间62个氨基酸、151~204之间54个氨基酸、以及251~314之间64个氨基酸的序列完全相同,提示系膜细胞可以将合成的Ig A分泌到胞外。结论:HMCs可能合成并分泌Ig A。