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关键词： 胚胎干细胞   蛋白复合体   复制叉   基因调控  

摘要： 小鼠胚胎干细胞来源于小鼠胚胎囊胚内细胞团，能在体外进行长期稳定培养，并具有发育多能性。因此，小鼠胚胎干细胞是胚胎发育研究的重要模型，且在再生医学中具有巨大应用前景。基因组的稳定性对于胚胎发育至关重要，基因组不稳定将直接导致胚胎发育的失败以及机体癌变等，同时，基因组的稳定是小鼠胚胎干细胞在再生医学中应用的前提。相对于分化细胞，小鼠胚胎干细胞有着特殊而强大的基因组稳定性维持机制，但是，目前对于小鼠胚胎干细胞的这种特性还知之甚少，还有待进一步深入研究。\n 复制压力是造成基因组不稳定的最主要内源因素之一。相对于分化细胞，小鼠胚胎干细胞细胞周期较短，DNA复制频繁，G1期短暂且没有G1期检查点，因此，小鼠胚胎干细胞遭受着相对更大的复制压力。小鼠胚胎干细胞是如何应对复制压力来维持基因组稳定？掌握其中的机制，将有助于在体外长期大量扩增过程中维持小鼠胚胎干细胞基因组稳定性，从而促进小鼠胚胎干细胞的应用，也将有利于掌握相关疾病的病因，从而为疾病的诊断与治疗带来理论指导。\n 通过对小鼠胚胎干细胞与分化细胞进行比较，我们发现在同等程度的复制压力诱导过程中，小鼠胚胎干细胞保护新合成DNA链稳定性能力、启动阻滞复制叉重启复制能力以及启动处于休眠状态复制叉进行DNA复制的能力均相对较强，即小鼠胚胎干细胞具有更强的复制压力应对能力。\n 通过iPOND实验分离小鼠胚胎干细胞及分化细胞复制叉上的蛋白进行质谱分析，我们找到了小鼠胚胎干细胞复制叉上特异的蛋白复合体Filia-Floped，并且发现Filia与Floped缺失后，虽然小鼠胚胎干细胞保护新合成DNA链稳定性能力以及启动处于休眠状态复制叉的能力没有显著变化，但是其启动阻滞复制叉重启复制能力显著降低，进一步导致了小鼠胚胎干细胞基因组出现不稳定现象。\n 在Filia的质谱数据中发现Filia的相互作用蛋白包括了解旋酶Blm以及泛素化E3连接酶Trim25，并且经实验验证发现Filia-Floped-Trim25-Blm以复合体形成存在，都能定位于复制叉。当Trim25与Blm敲降后，小鼠胚胎干细胞也出现了与Filia-Floped缺失一样的表型，即小鼠胚胎干细胞在复制压力诱导过程中启动阻滞复制叉能力显著降低，并且在长期培养过程中小鼠胚胎干细胞积累了较严重的DNA双链损伤。\n 对Filia-Floped-Trim25-Blm复合体之间调控关系进行分析后发现，Filia-Floped相互协同共同调控Trim25与Blm之间的相互作用。Filia-Floped常态性定位于复制叉，当复制压力发生时，Filia-Floped在复制叉上聚集量被诱导增加且FiliaS151位点被ATR相关通路激活从而形成有功能的复合体，进一步促进Trim25对Blm进行K63位泛素化修饰，使得受阻复制叉上聚集更多的Blm来调控阻滞复制叉重启。与此同时，Filia-Floped复合体还能独立于对Trim25-Blm的调控能对ATR的激活起到一定作用，从而通过ATR对复制压力反应进行调控。\n 在分化细胞中，Trim25也能调控Blm进行K63位泛素化修饰并定位于复制叉，从而调控阻滞复制叉重启。在小鼠胚胎干细胞中，由于Filia-Floped特异复合体的存在，使得Trim25与Blm更高效的富集于复制叉发挥作用;同时Filia-Floped复合体也使得小鼠胚胎干细胞中ATR的激活效率高于分化细胞。因此，小鼠胚胎干细胞特异复合体Filia-Floped使得小鼠胚胎干细胞具有更强的启动阻滞复制叉能力。

关键词： 教学方法   手段   基因工程   实验   应用  

摘要： 基因工程是生命科学相关学科的主干课程,它在微观水平上研究核酸、蛋白质等生物大分子的结构和功能,实践性极强。传统的教学模式与方法已不能满足现代化生物领域人才培养的需要,因此,创新实验教学理念,更新实验教学方法对培养学生实践动手能力、创新思维和综合素质有着极其重要的作用。

关键词： 黄酮醇   生物合成   代谢调控   分子机制   基因工程  

摘要： 植物黄酮醇具有广泛生物活性,其生物合成及其调控研究日益增多,逐渐成为热点。对黄酮醇生物合成关键酶(FLS、F3H、F3′H、F3′5′H、UGT)和调控因子(如MYB等转录因子)相关的生化与分子生物学研究进展进行总结,重点对相关结构基因和转录因子对黄酮醇积累发挥关键作用的试验证据进行归纳,探索调控黄酮醇物质积累的有效途径及靶标分子,以期为利用基因工程定向积累具有重要生物学功能的黄酮醇物质提供参考。

关键词： 基因工程   耻垢分枝杆菌   重组   综述  

摘要： 耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)是一种在自然界中普遍存在的非致病性分枝杆菌。随着基因工程技术的发展,选择MS作为载体已在细菌、病毒、肿瘤和寄生虫等领域得到广泛应用,本文就基因工程重组MS的构建及免疫效果的研究进展作一综述。

关键词： 产业创新链   产业竞争情报   分析框架   应用研究   案例分析  

摘要： [目的/意义]引入创新链理论,将产业竞争情报分析立足于创新活动的全过程,既兼顾技术创新和产业创新,又兼顾定性和定量分析,提出一种新的分析框架。[方法/过程]在该框架下将创新链的5个环节作为产业竞争情报分析的主要环节,然后明确了各环节的情报分析内容。最后在提出的分析框架下,以国内基因工程疫苗产业为例进行了分析框架应用研究。[结果/结论]分析结果表明,国内基因工程疫苗产业的基础研究成果数量多,整体影响力不大,应用研究成果有一定数量,但是转移转化为可生产产品数量较少,市场化和产业化不足,发展空间较大。应用案例表明提出的基于创新链的产业竞争情报分析框架可以更系统、全面地把握产业创新发展的全过程,以及更准确地把握产业竞争态势。

关键词： 奶牛   无乳链球菌性乳房炎   基因工程疫苗   舍饲条件   田间试验  

摘要： 目的 构建无乳链球菌菌毛岛屿辅助蛋白BP、AP2主要抗原表位域融合表达重组载体，进行高效表达，并制备基因工程疫苗，验证对舍饲奶牛进行田间免疫试验的保护效果。\n 方法 利用DNAstar生物信息软件 Protean功能筛选 BP和AP2主要抗原表位域，并引入15位柔性多肽，通过重叠延伸PCR技术扩增融合BP、AP2主要抗原表位域基因， PCR扩增串联体基因片段BP+AP2，将其克隆至pET-30a(+)载体，转化至BL21（DE3）细胞，进行高效表达，目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。在验证其抗原性基础上，制备基因工程疫苗，对奶牛进行乳房炎免疫保护试验。\n 结果 PCR扩增出675 bp的BP和759 bp的AP2主要抗原域，经重叠延伸PCR获得了1380 bp的BP、AP2串联体基因片段，DNA测序结果表明，无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导后获得了表达，目的蛋白分子质量大小约55kD，纯化后重组蛋白的纯度达到96％，Western blot分析重组融合蛋白结果表明，能够被兔抗无乳链球菌阳性血清所识别。对奶牛乳房炎免疫保护率达到80.8%。\n 结论 本实验明确了 BP+AP2 亚单位基因工程疫苗对奶牛产生良好的抗原性。对奶牛乳房炎的免疫保护率达到 80.8%，为有效防控奶牛乳房炎，提高农牧民的经济效益，实现健康养殖提供了新途径，显示出良好的推广运用前景。

关键词： 肝细胞核因子4α   肝细胞癌   调节   基因工程  

摘要： 肝细胞核因子4α(HNF4α)是调节肝脏内特异性基因表达的转录因子,在肝细胞发育分化,肝脏脂质、胆固醇代谢及肝脏药物代谢中起重要作用,并且抑制肝脏肿瘤的发生。HNF4α主要通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化、凋亡,逆转肝细胞上皮-间质转化等过程,影响肝细胞癌(HCC)的发生发展。本文对HNF4α的来源分布、结构特点、生物学功能及其在HCC发生发展中的作用进行了系统综述,旨在探索HNF4α干预HCC的新思路。

关键词： 基因沉默   基因敲除   RNAi   CRISPR/Cas9  

摘要： 在现代基因功能研究中,基于基因沉默与基因敲除原理的实验技术被广泛应用,其中应用最广泛的是RNAi和CRISPR。其中由于原理不同,实验技术的过程及效果也各有不同。在不同实验目的及实验条件下,两种实验技术各有优劣。本文总结了两者原理的不同,及实验技术的特点和优劣,以期对实验手段的选择有所帮助。

关键词： 北美洲   印第安人   基因组   起源   DNA测序   阿拉斯加   陆桥  

摘要： 距今2．5万-1．5万年间，人类穿过白令陆桥，从亚洲来到了北美洲，这些古老的移民究竟是在什么时候以及有多少人走过了白令陆桥，一直存在激烈的争论。马萨诸塞大学本·波特的团队对2013年阿拉斯加中部塔纳那河盆地太阳河上游发现的一个具有1．15万年历史的婴儿遗骸中提取出的DNA测序表明，

关键词： 转基因作物   种植面积   发展现状   耕地  

摘要： 2015年，全球转基因作物的种植面积首次出现了下降——不到1％。