教学课程资源库 更多>>

关键词： 基因工程抗体   呕吐毒素   玉米赤霉烯酮   免疫层析   双特异性抗体  

摘要： 玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）是粮食中常见的真菌毒素,对生物体具有生殖毒性和遗传毒性等,因而建立快速检测方法限制受真菌毒素污染的粮食流入市场十分必要。基因工程抗体作为三代抗体,能够克服传统抗体制备的限制,实现高效制备,有效定向改造进化,可广泛地应用于免疫快速检测中。大肠杆菌BL21、毕赤酵母GS115、哺乳动物细胞Expi293F作为成熟的重组蛋白表达体系,广泛应用于基因工程抗体的制备中。本文以3种表达系统制备了ZEN和DON的单特异性和双特异性抗体。基于单特异性抗体构建胶体金免疫层析方法并应用于粮食谷物检测,基于ZEN和DON双特异性抗体构建同步免疫检测试剂盒,实现ZEN和DON的同时定量检测。本文的主要研究内容如下:（1）大肠杆菌BL21、毕赤酵母GS115表达系统的评价。从NCBI库获取DON和ZEN抗体可变区的基因序列（NCBI登录号:AAC53026.1,AAC53027.1;Y151141,AY151140.1）,将重链可变区和轻链可变区用（GlySer）连接构建单链抗体（single chain antibody,sc Fv）,并分别于大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中表达。结果表明,大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115表达的ZEN单链抗体（ZEN-sc Fv）均有活性,而DON的单链抗体（DON-sc Fv）对抗原均无识别活性。基于大肠杆菌BL21表达产物建立的酶联免疫吸附检测方法（Enzyme-Linked immunosorbent assays,ELISA）标准抑制曲线方程为Y=-0.009752X+1.275（R=0.9735）,IC为79.47 ng/m L;基于毕赤酵母GS115的表达产物的ELISA标准抑制曲线方程为Y=-0.01045X+1.218,R=0.9585,IC为68.71 ng/m L。（2）基于Expi293F哺乳动物细胞表达的ZEN和DON sc Fv、全长抗体（Immunoglobulin G,Ig G）以及双特异性单链抗体的评价研究。基于载体p CMV和p TT5,Expi293F细胞瞬时表达获得了ZEN和DON的sc Fv、Ig G、双特异性单链抗体,且基于p CMV载体表达产量更高。基于ZEN-sc Fv和ZEN-Ig G构建ELISA方法检测灵敏度分别为6.46 ng/m L和6.27 ng/m L;基于DON-Ig G和DON-sc Fv构建的ELISA方法灵敏度分别为140.35 ng/m L和69.01 ng/m L。双特异性单链抗体Bis-sc Fv对ZEN和DON具有结合活性,基于其构建的ELISA方法对ZEN和DON灵敏度分别为20.64 ng/m L和132.29 ng/m L,且具有较强的特异性。（3）基于基因工程抗体构建免疫检测方法。基于ZEN-Ig G,构建了检测谷物中ZEN的胶体金免疫层析方法,其视觉检测限为60 ng/m L,经HPLC方法学验证,该方法就有良好的准确性;基于双特性单链抗体建立双联酶联免疫检测方法,其ZEN和DON的定量范围分别为1 ng/m L～100 ng/m L和10 ng/m L～500 ng/m L,线性方程分别为Y=-0.4028Lg X+0.9614(R=0.9467,IC为13.98 ng/m L)和Y=-0.5275Lg X+1.585(R=0.9681,IC为113.99 ng/m L),该方法对玉米粉中的ZEN和DON的加标回收率为86.02%～108.14%,相对偏差小于15%。综上,基于大肠杆菌BL21、毕赤酵母GS115和哺乳动物细胞Expi293F三种宿主生物成功表达了ZEN和DON的单特异性抗体以及双特异性抗体,并基于哺乳动物细胞Expi293F表达抗体构建快检方法并实现应用,为高效的抗体制备和应用研究奠定了基础。

摘要： rhBMP-2定量的骨修复材料[结构特征]以重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)为原料,以药用明胶、大豆磷脂及羟基磷灰石为载体材料复合而成。[作用机理]通过填充骨组织缺损、发挥骨诱导作用,“促进骨和软骨的生成”,达到组织修复,并在体内可被降解吸收。[应用范围]用于骨缺损、骨不连、骨延迟愈合或不愈合的填充修复以及脊柱融合、关节融合及矫形植骨修复。[禁忌症]1、有严重心、肾功能不全、肝功能损害及造血功能障碍者禁用;2、有严重肿瘤史者禁用;3、需要全身联合应用糖皮质激素者慎用;4、代谢性骨病患者慎用;5、妊娠、哺乳期妇女、儿童慎用。

关键词： ZnONPs   植入前胚胎   胚胎干细胞   H3K9me3  

摘要： 目的 纳米氧化锌颗粒（ZnONPs）具有防紫外线、抗菌、除臭、耐热等性能,其广泛应用对人类的健康是否产生影响引起了广泛担忧。因其纳米材料属性,更易分散和侵入人体生理屏障,所以在生殖健康方面及生物安全性方面受到了广泛关注。有研究表明,NPs可以转移到卵巢、子宫和胎盘,对女性生殖潜力和胎儿健康产生负面影响。因此,探讨NPs对胎儿的影响机制对开发生殖创新疗法非常重要。 有研究发现,ZnONPs可以在卵巢中蓄积,进而可能影响植入前胚胎的发育。然而,目前尚无关于ZnONPs对哺乳动物植入前胚胎发育及胚胎干细胞（ES）多能性影响的研究报道,并且鲜少在多组学水平上对ZnONPs毒性机制进行研究。 本研究从ZnONPs对植入前胚胎发育及胚胎干细胞多能性影响入手,从表观遗传学机制的角度探讨ZnONPs暴露对人类生殖健康的影响机制,对生殖健康创新疗法提供了新思路。 方法 1.通过对小鼠受精卵发育至囊胚的发育率、发育时间、发育速度、植入前胚胎出生率及m ESCs碱性磷酸酯酶克隆形成、畸胎瘤的形成能力、畸胎瘤的分化能力、嵌合鼠的研究探究ZnONPs对植入前胚胎及m ESCs的毒性作用。 2.免疫荧光实验和流式细胞术实验探究ZnONPs对植入前胚胎和m ESCs产生毒性作用本质。 3.对ICM和m ESCs进行测序,相关性分析对测序数据的质量进行检测,利用生物信息学统计方法对测序数据进行分析,对基因进行差异分析。 ***对下调基因进行富集分析,GSEA分析ZnONPs对特异性基因的影响,荧光定量PCR实验对下调基因进行验证。 5.对CUT&Tag实验中的测序数据进行相关性分析,进行质量检测,基因差异分析探究下调基因与其相近H3K9me3的关系。ATAC-seq实验对测序数据进行生物信息学统计方法分析,探究ZnONPs对染色质可及性的影响。 6.透射电子显微镜观察ZnONPs进入细胞的位置,体外Pull-Down实验和IP实验对ZnONPs与H3K9me3的作用方式进行探究。 结果 1.临床研究结果表明,接受辅助生殖技术（ART）治疗的患者其尿液锌元素浓度与妊娠率呈负相关关系。 ***在体内和体外的暴露会显著降低植入前胚胎的发育。ZnONPs对植入前胚胎的发育率、发育时间、发育速度、出生率及m ESCs的碱性磷酸酯酶克隆形成、畸胎瘤的形成能力、畸胎瘤的分化能力、嵌合鼠的嵌合均具有毒性作用。 ***通过释放Zn2+产生毒性作用,Zn2+螯合剂TPEN可以减轻ZnONPs对植入前胚胎及m ESCs的毒性作用。 ***释放的Zn2+可以通过与H3K9me3直接结合来上调H3K9me3表达,该组蛋白抑制剂Chaetocin可以减轻ZnONPs对植入前胚胎及m ESCs的毒性作用。 5.上调的H3K9me3可以影响染色质ICM开放区域的可及性,下调特异性基因的表达,进而影响植入前胚胎的发育和m ESCs的多能性。 结论 本研究首先通过探究ZnONPs对植入前胚胎的发育及m ESCs的多能性的影响的表型研究发现ZnONPs具有毒性作用,之后通过探讨机制发现ZnONPs释放的Zn2+与H3K9me3直接结合后导致H3K9me3上调,该组蛋白影响染色质ICM开放区域的可及性从而导致特异性基因的下调,进而影响植入前胚胎的发育及m ESCs的多能性。

摘要： 在人类揭开自然界神秘面纱的征途中，基因工程已经从科幻小说中的幻想变成了现实中最令人心潮澎湃的科学实践。从古代农业中简单的育种选择到当代科学家对基因精准的编辑，人类对遗传技术的掌握已经实现了革命性的飞跃。设想一下，如果我们能够更精准地操控生命的基础代码，那么治愈那些曾被认为是绝症的遗传疾病、大幅提升粮食生产效率、“定制”

关键词： 交替传译   词汇误译漏译   定语从句   翻译腔  

摘要： 本篇英汉交替传译实践报告所采用的语料来自于牛津辩论会网络视频。牛津辩论会历史悠久,辩论传统是邀请专家、学者、学生等人分别进行正反立场的主题演讲并于网络公开发布。本篇实践报告选取其中一篇演讲作为语料,辩论主题为“基因工程是否会削弱人类天性”。在完成英汉交替实践后,笔者分析了英汉交传过程中会遇到的问题,并提出与之对应的解决策略。 报告选择实践中的典型案例,从“词汇误译漏译”、“定语从句翻译不当”、“译语出现翻译腔”这三个角度对此次实践进行分析并得出如下结论。针对于词汇误译、漏译可以采用结合上下语境内容推测生词含义及对概念补充说明的口译技巧;源语定语从句翻译不当,可以采用译成前置定语和重复先行词的应对方法;译语出现翻译腔可以采用归化和语态转换的口译策略。此外,笔者总结反思了此次交传实践任务的不足,并对未来的口译学习提出了一些意见。