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关键词： 基因工程   CRISPR/Cas9系统   免疫缺陷小鼠   cNSG品系   移植  

摘要： 目的 NOD/SCID/IL2Rγ-(/-NSG)小鼠品系是最严重的免疫缺陷品系,广泛应用于异种移植的研究。然而,SCID突变是Prkdc基因的一个自发性突变,会导致T细胞发育阻滞后渗漏而且很难进行基因型鉴定。因此,开发一个敲除Prkdc和IL2Rγ基因的新品系NSG小鼠非常重要。方法使用CRISPR/Cas9系统实现Prkdc和IL2Rγ基因的靶向敲除。将基因敲除小鼠与NOD背景小鼠杂交,我们产生了新品系NOD/SCID/IL2Rγ-(/-NSG)小鼠,称为cNSG(中国NSG)小鼠。结果 cNSG小鼠完全缺乏T细胞,B细胞以及NK细胞而且表达NOD突变。体内成瘤实验证实cNSG鼠是一种比免疫缺陷裸鼠更有效的异种移植模型。结论 cNSG小鼠与Jackson实验室的NSG鼠的免疫缺陷一致,有望成为中国生物医学研究的重要异种移植模型。

关键词： 胚胎干细胞   干性   调控网络   (磷酸化)蛋白质组学  

摘要： 目的:对人胚胎干细胞H9的(磷酸化)蛋白质组进行鉴定和深入分析,探讨维持人胚胎干细胞干性的核心调控网络。方法:利用新近发表的TAFT磷酸化肽段富集策略和高精度质谱鉴定技术,采用无标定量方法对H9细胞(磷酸化)蛋白进行定量分析;结合MOTIFX、iGPS、IPA等多种生物信息学分析软件,分析H9细胞的磷酸化基序-激酶、转录因子-靶基因调控网络。结果:获得了目前高度覆盖的H9细胞(磷酸化)蛋白质组数据集,鉴定到8674种蛋白质,其中3898种能够发生磷酸化修饰,包括13 676条磷酸化肽段,高可信度(class 1)磷酸化位点有11 870种。与已有的H9细胞磷酸化蛋白质组数据相比,其中2247种磷酸化蛋白质和10 025种磷酸化位点是本研究新鉴定到的。基于基序和激酶预测分析,推导出与干性维持相关的已知转录调节因子的新的磷酸化修饰基序以及调控其发生磷酸化的激酶。结合多能性转录因子对靶基因的调控信息,构建了多能性调控分子磷酸化修饰及其转录调控的核心网络。此外,还对特定位点的磷酸化修饰水平及其对应蛋白的总体丰度水平进行了比较及功能分析。基于各自的百分位数,比较磷酸化修饰水平与其对应蛋白的总体丰度,发现具有高丰度但低磷酸化修饰水平的蛋白倾向于参与物质转换或物质运输等生物过程,而低丰度但高磷酸化水平的蛋白质倾向于参与信息转导或调控过程。结论:提供了人胚胎干细胞H9高覆盖的(磷酸化)蛋白质组数据,这些数据有助于深入了解蛋白质磷酸化修饰在胚胎干细胞干性维持中所发挥的重要作用,为胚胎干细胞基础和应用研究提供了宝贵的数据资源。

关键词： 色氨酸合成酶   S-甲基-L-半胱氨酸   L-丝氨酸   甲硫醇  

摘要： 通过密码子优化设计构建色氨酸合成酶基因工程菌,单因素以及响应面法研究色氨酸合成酶基因工程菌制备S-甲基-L-半胱氨酸。结果表明,温度39℃、pH 8.5、L-丝氨酸浓度360mmol/L,反应平衡时间20 h,S-甲基-L-半胱氨酸的质量浓度为40.49 g/L。

关键词： 农业   转基因   作物   南繁试验   管理现状   安全性   分析  

摘要： 随着科技发展在农业转基因作物研究发展中,要推动农业基因生物安全评价试验工作顺利进行,充分利用好调查问卷和走访方式提高转基因的作物研究水平,同时需要很好处理好农业转基因作物南繁试验管理技术水平,保证对于疾病情况和条件充分认识,促进我国农业转基因作物发展。

关键词： 亚单位疫苗   包虫病   专家   羊   牛   效果评估   基因工程   免疫效果  

摘要： 近日,在四川省动物疫控中心组织举办的羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗对牛的免疫效果评估会上,专家通过严格评估一致认为,将羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗（简称羊包虫病疫苗）用于牛身上,同样可以取得明显的免疫效果。

关键词： ABO血型系统   B(A)亚型   血清学   家系调查   ABO基因分型   DNA测序   安全输血  

摘要： 目的鉴定罕见B(A)血型并探讨其临床安全输血策略。方法利用全自动血型分析仪检测ABO血型,发现正反定型不符的一位患者,利用血型血清学和分子生物学方法对该患者及其家系中9位成员进行血型鉴定和ABO血型基因测序,分析该家族血型的遗传特点;并对该血型的患者进行临床输血探讨,确保临床输血安全。结果患者为B(A)血型,与B101基因序列比对,均为nt640A>G,基因型鉴定为B(A)04/O01,B(A)型血清与同型红细胞以及O型、B型红细胞不凝集,B(A)型红细胞与同型以及AB型血清不凝集。结论血型血清学方法可以对正反定型不符的B(A)血型做出初步判断,分子生物学技术可以进一步准确判断该血型;临床输血应采取自体输血、同型输注及配合相容性输血。

关键词： 毒理学   公共卫生   北京大学   人类基因组计划   环境基因组计划   学院   医学   化学物质  

摘要： 随着大量外源化学物涌入我们的生产、生活及周围环境以及人类对化学物质毒性危害认识的日益深入,毒理学这一研究学科应运而生。同时,随着人类基因组计划的完成、环境基因组计划和表观基因组计划的启动及科学技术的进步,基础生命科学的大量新原理、新技术不断渗透到毒理学各个领域,国际上毒理学学科正在蓬勃发展,世界范围的毒理学领域正经历着巨大的变化。作为一名毒理学领域的探索者,魏雪涛已在这一领域深耕20载有余。

关键词： 基因工程   背景知识  

摘要： 《基因工程》这一专题内容抽象;教材侧重明显;对学生整体把握基因工程的知识点有很大的影响。教学过程中需要介绍一些额外的背景知识让整个教学内容连贯鲜活起来。

关键词： 脊髓损伤   神经元   细胞治疗   干细胞移植   胚胎干细胞   SCI  

摘要： 脊髓损伤修复及再生困难,传统治疗收效甚微,干细胞是一类具有分化为神经元潜能的细胞,通过弥补或替代受损神经元、分泌神经营养因子、抑制损伤局部炎症反应等发挥治疗作用,并且安全有效。常用于移植的干细胞类型较多,各有优缺点,移植方法主要采用直接移植法、经脑脊液注入移植法、经血管注入移植法等。本文就干细胞治疗脊髓损伤的可能机制、实验常用的干细胞类型以及干细胞移植方法等进行综述,以期对干细胞治疗脊髓损伤的基础及临床研究提供参考。

关键词： 人羊膜间充质干细胞   BMP9   细胞分化   基因工程   韧带组织工程  

摘要： 目的:探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)基因修饰对人羊膜间充质干细胞(h AMSCs)在体外向韧带成纤维细胞(LFs)分化是否有促进作用,并研究其分子机制。方法:体外分离培养h AMSCs及LFs,观察并比较两种细胞形态学差异。经Ad MAX系统体外构建BMP9基因腺病毒载体,经提纯及荧光法病毒滴度测定后转染P3代h AMSCs。实验分为三组,A组:携带绿色荧光蛋白(GFP)的空腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-GFP);B组:携带BMP9基因的腺病毒载体转染h AMSCs(h AMSCs-BMP9);C组:韧带成纤维细胞组(LFs)。于体外分别培养7天后使用荧光定量PCR检测并比较各组韧带相关基因Scleraxis(Scx)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、细胞连接素(TNC)、纤维连接蛋白(Fib)及腱调蛋白(Tnmd)m RNA的表达量。使用免疫荧光检测并比较三组细胞体外培养7天后ColⅠ的表达量。结果:在倒置相差显微镜下,h AMSCs原代呈多角形贴壁生长,传代后呈长梭状漩涡状生长。LFs原代呈长梭状贴壁生长,传代后呈漩涡状集落样生长。A、B组细胞转染8 h、24 h后,生长增殖缓慢,轮廓清晰,细胞形态未发生变化。荧光显微镜观察显示A组在转染8 h后可见GFP荧光表达,24 h后表达荧光的数量和强度均增多。实时荧光定量PCR显示,转染7天时B组SCX、Tnmd、ColⅠ、Fib及TNC的表达量均高于A组(P<0.05),而SCX、Fib、TNC及Tnmd的表达量低于C组(P<0.05),ColⅠ的表达量高于C组(P<0.05)。荧光免疫组化显示,转染7天后,B组ColⅠ的表达量均高于A组和C组。结论:BMP9基因可促进h AMSCs向LFs定向分化,并促进韧带特异性基因的表达和细胞外基质的产生,为h AMSCs作为韧带组织工程种子细胞提供了实验基础。