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关键词： ESC   VSMC   收缩型   诱导分化  

摘要： 目的改进入胚胎干细胞H9向收缩型平滑肌分化方法的研究。方法从形态和细胞免疫荧光、碱性磷酸酶(ALP)鉴定人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)的全能性。采用单层培养H9诱导分化为中胚层(mesoderm,MES),进而改进诱导方法分化为收缩型平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)。采用real-time PCR、western blotting、细胞免疫荧光化学技术以及流式细胞术鉴定诱导分化方法的合理性以及效率。结果 hESC表面标志物蛋白分子OCT-4在细胞核内表达呈阳性(绿色),ALP显示呈黑紫色。Real-time PCR结果显示,随着时间的推移,VSMC标志基因a-SMC、SM22a、CALPONIN在一定的时间节点后呈爆发式上升;western blotting显示第6天后开始递增表达;细胞免疫荧光显示,分化18天的细胞a-SMC阳性表达(绿色);流式细胞术结果表明,分化第15天时,a-SMC阳性细胞达90%以上。结论改进后的诱导体系更适合H9向收缩型VSMC分化。

关键词： 胞二磷胆碱   酿酒酵母   基因工程   磷酸胆碱胞苷转移酶   生物合成   培养工艺   酶反应  

摘要： 课题涉及一种过表达磷酸胆碱胞苷转移酶(Cholinephosphate cytidylyltransferase,EC 2.***.7.15,CCT)酿酒酵母基因工程菌的构建和应用。该菌株是将酿酒酵母来源的编码CCT酶基因cct与p YES2.0-Kanmx载体构建重组质粒,然后将其转化于酿酒酵母DFH中,构建基因工程菌QZ-016。通过过表达反应关键酶CCT酶而提高胞二磷胆碱(CDP-C)的转化率和产量。经过优化YPD培养基后,该菌株的菌浓PMV可达70.2 g/L,可应用于以CMP和CP为原料,生物转化制造CDP-C,反应7 h摩尔转化率可高达73.1%。该菌株的产率高,应用于生产CDP-C,具有成本低、制造能耗低、反应周期短等优点。

关键词： 小鼠胚胎干细胞   维生素C   心肌细胞   PHBHHx膜   诱导分化  

摘要： 目的:观察3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)能否促进多能干细胞(m ESC)的存活、增殖以及分化,为心肌梗死的治疗提供新的治疗策略。方法:培养m ESC,传代培养至3代后与PHBHHx材料制成的生物薄膜共同培养72h,CCK-8试剂盒测定m ESC的活性及增殖,DAPI染色观察细胞,电镜观察m ESC生长。将小鼠m ESC向心肌细胞定向分化,15d后免疫荧光和流式细胞术定量测定心肌肌钙蛋白(c Tn T)。结果:CCK-8活性检测显示PHBHHx膜培养m ESC可以促进细胞更好的增殖;电镜扫描显示,m ESC在PHBHHx膜上能够粘附生长,细胞形态正常。加入干细胞分化培养基使干细胞向心肌细胞定向分化15d后,通过免疫荧光显示心肌细胞特异性标志蛋白c Tn T表达阳性;流式细胞术测得PHBHHx膜培养比传统的细胞培养方式能够促进细胞更好的分化,测得的c Tn T表达量明显增加。结论:PHBHHx膜与m ESC有较好的组织相容性,并且能够促进m ESC的增殖和分化。

关键词： Bt毒素   RNAi   受体验证   调控因子   毒性发挥   转基因作物  

摘要： Bt(Bacillus thuringiensis)毒素优异的抗虫性能和其环境友好性,使其代替了多种化学杀虫剂,在世界范围内得以广泛应用。但同时,过度依赖Bt毒素让许多害虫产生抗性,严重威胁转Bt基因作物和Bt杀虫剂的长期效能;而多种Bt毒素结合应用能产生协同作用或拮抗作用,有不确定性,稳定性较低,无法得到广泛应用。RNAi(RNA interference)技术能沉默特定基因的表达,且特异性强,不会造成环境污染,在害虫防治方面有巨大潜力。Bt毒素和RNAi技术的结合有望在害虫防治方面及抗虫育种的方面开辟一条新道路。为了研究Bt毒素与RNAi技术结合应用的优越性,就Bt毒素和RNAi技术在各自领域的应用及两者相结合应用的最新研究成果等方面进行了综述,总结了近年来RNAi技术与Bt毒素相结合在防控靶标害虫中的应用现状,并对该技术的研究前景提出展望。

关键词： 全外显子测序   胚胎干细胞   X染色体失活   变异  

摘要： 目的在全外显子DNA序列水平上分析X染色体异常失活与随机失活的人胚胎干细胞(hESC)在各种变异类型上的数量,比较两种不同失活模式细胞变异水平的差异。方法 10株人胚胎干细胞根据其X染色体失活(XCI)状态分为异常XCI组和随机XCI组。运用全外显子测序技术对干细胞进行DNA水平变异分析。对两组细胞总变异数、单核苷酸变异、微小插入、缺失变异、移码变异、无义突变、错义突变等数量进行统计分析,比较两种不同失活模式细胞间各变异是否有差异。结果两组细胞间均检出超过2万个变异,在变异总数量上两组间差异无统计学意义(P>0.05);在X染色体上两组变异均以错义突变和同义突变为主,对可导致蛋白编码错误的移码突变和无义突变,异常XCI组和随机XCI组各检出5.4个,两组间差异无统计学意义(P>0.05);对可导致蛋白编码改变的变异,在异常XCI组特异性地检出TCEAL6、UBE2NL、FTHL17三个基因变异,其功能主要与RNAⅡ型聚合酶启动子在基因转录调控及翻译的延伸作用及复制后的修复和相关蛋白的泛素化作用有关。结论在异常失活hESC和随机失活hESC两组细胞间并无明显的DNA序列变异差异。全外显子测序技术可以为在高分辨率水平上分析hESC遗传性状提供极好的技术支持。

关键词： 生物安全管理   转基因生物   转基因作物   生物技术   转基因技术   养分利用率   新品种培育   种植面积  

摘要： 为什么要进行转基因生物安全管理？ 答：一是转基因技术和产业发展的需要。生物安全和生物技术相伴而生，生物技术的发展对安全管理提出更高要求，2013年中国转基因作物种植面积达1．75亿公顷，比1996年增长了102倍，一些新基因、新性状、新方法、新产品不断出现，例如耐寒与提高养分利用率转基因作物、复合性状转基因作物等；安全管理也是我国转基因生物新品种培育重大专项实施的保障。

关键词： 核糖体失活蛋白   抗虫活性   转基因作物  

摘要： 核糖体失活蛋白(Ribosome-inactivating proteins,RIPs)是广泛存在于高等植物体内的一类毒蛋白,其作用位点多为细胞的核糖体大亚基RNA。该蛋白通过去除核糖体RNA(rRNA)中一个或多个腺嘌呤残基,导致rRNA断链且核糖体结构被破坏,不能正常结合蛋白质合成过程中的延伸因子,进而导致植物体的蛋白质生物合成受抑制。有研究表明,RIPs对多种病菌、害虫具有广谱抗性,这一特性使得RIPs在农业领域具有很高的应用价值,可用于培育转基因作物、抗虫活性、研制免疫毒素等。

关键词： Wdr82   小鼠胚胎干细胞   细胞增殖   细胞分化   多能性  

摘要： Setd1a复合物和Setd1b复合物(Setd1a/b)是进化上功能高度保守的表观遗传调控因子,主要包括Setd1a/b、Wdr82、Wdr5、Rbbp5、Ash2L、Dpy-30、Hcf-1等,催化组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)的甲基化,进而激活基因转录。Wdr82是Setd1a/b复合物中特有的非催化亚基,其在胚胎发育过程中的作用尚不清楚。该研究利用小鼠胚胎干细胞(moue embryonic stem cells,m ESCs)的体外培养和分化系统发现,在m ESCs分化过程中,Wdr82的表达水平显著降低。在m ESCs中敲低Wdr82后,m ESCs的增殖速度显著减缓,而其多能性不受影响。利用拟胚体分化体系发现,Wdr82敲低后,拟胚体的形成速度变慢,自主搏动的时间明显滞后。综上所述,该结果揭示了Wdr82在m ESCs体外增殖和分化过程中的重要作用。

关键词： 课堂教学   水果味   减负增效   基因工程  

摘要： 那是一节关于基因工程的课,我按照以下备课时的问题预设完成了一个班的教学:1、引导学生阅读书本相关内容,通过思考讨论总结归纳出以下问题:(1)什么是基因工程?基因工程又成为什么?(2)在基因工程中用到哪些工具?它们都有哪些特点和作用?(3)基因工程有哪些步骤?(4)思考各工具在基因工程各步骤中的应用。

关键词： 琼胶酶   表达条件优化   单因素实验   正交设计   酶活力  

摘要： 琼胶酶可催化长链琼脂糖分子内糖苷键水解产生具有生物活性的琼胶寡糖。琼胶酶具有重要的科研和应用价值,从而对琼胶酶的研究也日益增多。为获得基因工程菌株BL21（DE3）ply Ss-p ET28a（＋）-Aga0917重组琼胶酶r Aga0917的高效表达条件,本研究通过单因素实验及正交设计探索了种龄、诱导剂浓度、诱导时机、诱导温度和诱导时间对基因工程菌株表达的r Aga0917酶活力的影响。单因素实验结果显示,种龄6 h、诱导剂终浓度0.05 mmol/L、诱导时机4 h、诱导温度25℃、诱导时间16 h时酶活力最高;正交设计结果显示,r Aga0917的最优表达条件组合为：种龄6 h、诱导时机4 h、诱导剂终浓度0.1 mmol/L、诱导温度16℃。对正交设计结果的直观分析和方差分析结果均表明,四个因素对异源表达目的蛋白琼胶酶酶活力影响的顺序为：诱导时机〉诱导温度〉种龄〉诱导剂终浓度。