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关键词： 材料基因组   专利竞争情报   锗金属  

摘要： 材料是一个国家制造业的基础,材料领域的创新往往可以带来颠覆性技术革命的创新。新材料从发现到应用再到市场推广需要一个很长的周期,依赖于传统试错、科学直觉的研究方法已经不能满足新时代对于材料的需求。材料基因组技术是近些年来新提出的材料研究新理念和新思想,是我国乃至全世界材料科学与工程领域的最前沿技术。2011年6月24日,美国时任总统奥巴马宣布启动实施“推进制造业伙伴关系”计划,旨在重振美国在制造业的核心战略地位,“材料基因组计划”(The Materials Genome Initiative,MGI)是其重要的组成部分。几乎同时期在欧洲、日本都展开了类似的材料技术革新计划。云南省已将“稀贵金属材料基因工程”相关研究内容列入省内重点规划,并于2017年4月正式启动该重大科技工程。专利竞争情报作为科技创新的重要知识原料,对专利进行二次开发,借鉴已有专利的思路及方法,避开专利侵权问题,可以实现厚积薄发,在高新技术产业取得跨越式发展。云南省作为我国金属和非金属矿产资源富集省份,拥有我国有色金属和稀贵金属重要科研和产业基地。本文旨在抓住锗金属作为研究重点,在云南省稀贵金属材料基因工程大的背景下,通过检索专利数据库得到锗金属行业在世界、中国、云南省的专利情况,对于专利申请人、专利申请主分类、专利申请态势等研究点等,展开具体分析。通过专利数量的检索确定云南省锗金属在国际市场上的主要竞争对手(霍博肯-奥弗佩尔特公司)的专利情况并展开研究。之后通过SWOT分析法对于云南省锗金属行业进行细致研究,最终给出云南省在锗金属行业未来的发展方向以及专利导航。

关键词： 小鼠胚胎干细胞   细胞外信号调节激酶   Etv5   Tet2   Fgfr  

摘要： 细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)活性的动态平衡被多重反馈环路调控以确保小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)正常的自我更新。以前的研究证明,在mESCs中存在多种阻止ERK磷酸化(pERK)过度激活的负反馈环路。但是,在mESCs中一直都不清楚是否存在正反馈环路来维持pERK的最低水平。有研究表明pERK进入细胞核后可以激活一系列的转录因子,包括Etv4、Etv5、Dusp6、Spry和Sef等。其中Dusp6、Spry和Sef作为负反馈调控来调节pERK的水平,而Etv4和Etv5是通过负反馈还是正反馈调控来维持pERK的水平并不清楚。本研究用CRISPR/Cas9对Etv5基因进行了敲除(KO),再根据Etv5敲低(KD)的RNA-seq数据,用qPCR、Western blot、生物信息学分析、启动子克隆、双荧光素酶检测和甲基化测序等实验进行检测,主要获得以下结果:1.用CRISPR/Cas9在mESCs中敲除Etv5本实验设计了一对特异靶向Etv5基因第7号外显子的sgRNA,将其通过分子克隆连接到PX459M载体中,通过基因敲除获得了Etv5 KO B10、B13和B23三株克隆。2.确立了Etv5和pERK之间的正调控关系在Etv5 KO的mESCs中pERK蛋白的表达水平降低。Etv5 KO mESCs的生长速度减慢、Otx2基因表达显著上调、细胞核可以被荧光染料Hoechst 33258深染。3.在mESCs中发现了Etv5-Tet2-Fgfr2轴介导的正反馈环路来调控pERK为了探索在Etv5 KO mESCs中导致pERK下调的分子机制,本研究分析了之前在mESCs中Etv5 KD的RNA-seq数据来确定FGF-ERK信号通路中哪个基因的表达既显著下调又能够使pERK去磷酸化,最终发现Fgfr2在Etv5 KD mESCs中不仅显著下调其表达丰度在mESCs中也比较高。在Etv5 KO mESCs中Fgfr2的mRNA和蛋白表达水平也都下降。为了进一步研究Etv5是怎样调控Fgfr2的表达,我们将生物信息学预测的Fgfr2启动子克隆到了PGL3载体中,双荧光素酶实验的检测结果发现与对照组相比过表达Etv5仅能产生大约两倍的荧光强度。为了探究Etv5是否通过其它因子的介导来调控Fgfr2的表达,我们使用Cistrome网站中的ChIP数据库,分析了结合在Fgfr2启动子区的转录因子,结果发现有43个转录因子结合在Fgfr2启动子区,而在这43个因子中Tet2在Etv5 KD后下调最显著。Tet2的mRNA和蛋白在Etv5 KO mESCs中的表达也都显著下降。我们又检测了Fgfr2启动子区的甲基化程度,结果发现在所检测的Fgfr2启动子区Etv5 KO后的甲基化程度为16.7%,而野生型J1细胞甲基化程度为2.5%。总之,我们在mESCs中发现了调控pERK的一个新模式,即Etv5促进Tet2的表达,而Tet2去甲基化Fgfr2启动子区从而促进Fgfr2的表达,Fgfr2反过来再继续激活ERK信号通路,这为理解早期胚胎发育过程中细胞命运决定提供了新的参考。

关键词： 人类基因组计划   思维能力  

摘要： 辩论,是彼此用一定的理由来说明自己对事物或问题的见解,揭露对方的矛盾,以便在最后得到共同的认识和意见的活动。开展辩论,旨在培养人的思维能力。下面,笔者结合多年的教学经验,谈谈如何在高中语文教学中开展辩论活动。一、设置合理的辩题好的辩题不仅能启发学生深入思考,还能极大地调动他们的学习积极性。高中语文教材中有很多优

关键词： 护阳养坤方   胚胎干细胞   早发性卵巢功能不全   早发性卵巢功能不全  

摘要： 目的:采用去氧乙烯基环己烯(4-vinylcyclonhexene diepoxide,VCD)诱导的早发性卵巢功能不全(Premature Ovarian Insufficiency,POI)小鼠模型,探讨护阳养坤方通过调节TAK1-TGF-β通路改善卵巢微环境促进胚胎胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)移植重建并恢复卵巢功能的作用的机制。方法:实验一:将16只C57B/L6小鼠随机分为对照组(CON)和模型组(MOD),每组8只。以160 mg·kg-1的剂量对模型组进行连续共15天的VCD芝麻油溶液腹腔注射建立小鼠POI模型,对照组给与等量芝麻油腹腔注射,第50-55天根据小鼠当天动情周期情况,选择动情间期取材。实验通过采集阴道脱落细胞涂片监测动情周期变化,并对卵巢组织切片进行HE染色后计数各级卵泡数目,进行比较分析,判断造模是否成功。实验二:将雌性C57B/L6小鼠共100只,随机分为对照组(CON)、模型组(MOD)、护阳养坤方组(HY)、干细胞组(SC)和干细胞联合中药组(SCHY),每组20只。对照组(CON)于实验第1天(D1)起持续腹腔注射与VCD芝麻油溶液等体积的芝麻油15天,每天1次;实验第1天(D1)起持续灌胃与护阳养坤方药液等体积的生理盐水直至取材。模型组(MOD)于实验第1天(D1)起持续腹腔注射VCD芝麻油溶液15天,每天1次;实验第1天(D1)起持续灌胃与护阳养坤方药液等体积的生理盐水直至取材。护阳养坤方组(HY)于实验第1天(D1)起持续腹腔注射与VCD芝麻油溶液15天,每天1次;实验第1天(D1)起持续灌胃护阳养坤方药液直至取材。干细胞组(SC)于实验第1天(D1)起持续腹腔注射VCD芝麻油溶液15天,每天1次;实验第1天(D1)起持续灌胃与护阳养坤方药液等体积的生理盐水直至取材;造模后10天(D25),经尾静脉注射小鼠胚胎干细胞悬液1次。干细胞联合护阳养坤方组(SCHY)于实验第1天(D1)起持续腹腔注射VCD芝麻油溶液15天,每天1次;实验第1天(D1)起持续灌胃护阳养坤方药液直至取材;造模后10天(D25),经尾静脉注射小鼠胚胎干细胞悬液1次。通过阴道脱落细胞涂片监测小鼠动情周期,称量小鼠体重及卵巢和子宫重量计算脏器指数,制备肝、肾组织的病理切片进行HE染色后观察判断干预措施对肝肾的影响,通过卵巢组织HE染色病理切片计数各级卵泡数目,并通过ELISA法检测小鼠血清性激素FSH、AMH、E2的水平。实验三:在实验二中取材得到对照组、模型组、护阳养坤方组、干细胞组和干细胞联合护阳养坤方组小鼠的卵巢组织。对部分卵巢组织进行病理切片和免疫组化染色,并在光镜下观察各组间 TNF-α、IL6、FSHR、PR、ER、TGF-β、BMP4、TAK1、Smad4和JNK的蛋白表达,并拍片进行定量分析。对部分卵巢组织分别进行miRNA和mRNA的提取,设计引物并通过RT-qPCR的方法对miR143、miR145、miR135、miR429以及 TAKI、TARF6、TAB1、TAB2、Smad4、Smad2、Smad3、MKK6、P38 和 JNK 基因 mRNA进行荧光定量检测。留取部分卵巢组织提取总蛋白,进行Western-Blot检测卵巢中TGF-β、Smad4和FSHR蛋白的表达。综合各项指标结果研讨护阳养坤方联合干细胞治疗VCD诱导的早发性卵巢功能不全的疗效机制。结果:实验一:1.动情周期:对照组小鼠均出现规律的动情周期,有典型的阴道脱落细胞种类和比例的动态变化,动情周期全部正常;而模型组小鼠正常者仅1只。计算正常率,对照组为100%,模型组仅为12.5%,两组间比较有统计学意义(P<0.05)。2.卵巢形态:对照组卵巢内可见各级卵泡存在,并有较大窦状卵泡,卵泡形态典型,卵巢内血管丰富。模型组卵巢体积减小,其内几无各级卵泡,残存较多闭锁卵泡,血供较对照组减少。3.各级卵泡计数:相比对照组,模型组的各级卵泡数均减少(P<0.05),有统计学差异。实验二:1.小鼠脏器指数:VCD造模后小鼠卵巢及子宫的脏器指数相比于对照组均下降(P<0.05),差异有统计学意义;而护阳养坤方、干细胞和干细胞联合护阳养坤方治疗的三组,相比于模型组,脏器指数均升高(P<0.05),差异有统计学意义;其中三种治疗干预措施对卵巢和子宫脏器指数的影响之间无统计学差异。2.动情周期:各组小鼠动情周期的改变有统计学差异(P<0.01),除对照组小鼠动情周期正常率为100%外,各组小鼠动情周期均发生改变,联合治疗组中周期重度失常率最低,正常率最高(5.26%)。3.肝肾组织结构的变化:光镜下观察,各组小鼠肝脏、肾脏组织病理形态正常。4.各级卵泡计数:与对照组相比,模型组小鼠卵巢内各级卵泡数目均减少(P<

关键词： 甲状腺激素   甲状腺自身免疫   COUP-FT1   铁   脑发育   胚胎干细胞   流行病学  

摘要： 背景:神经系统尤其是大脑的发育是一个复杂而被多重因素精确调控的过程。其中,甲状腺激素对脑发育起着至关重要的作用。多种原因导致的妊娠期甲状腺激素缺乏,将损伤子代的神经发育,导致神经分化和迁移的不可逆转的损伤。大脑皮层参与人类和动物的高级认知(例如语言、学习、抽象思维、情感)、感觉功能,自主运动功能等,甲状腺激素缺乏导致的后代智力低下,运动失调与大脑皮层功能障碍有关。甲状腺激素核受体(Thyroid hormone Receptor,TR),分为二种亚型:TRα1和TRβ1,分别由TRα和TRβ基因编码。这两种亚型在调控机体的发育具有不同的功能。其中,早期脑发育主要接受TRα1的调控。TRα1在脑组织发育早期即开始广泛表达,表达量占所有TR的60%;TRβ1主要在出生后表达且部位局限,仅占TR的30%。甲状腺激素对脑发育的调控存在时间、空间特异性,其机制目前不清。在脑组织结构中,大脑皮层是发育得最早的组织。人类孕8周开始,大脑皮层开始表达TRα1,大鼠研究中亦发现TRα1在母鼠孕11.5天出现(相当于胎鼠神经管形成时间),之后在脑组织中广泛表达,但是甲状腺激素缺乏导致大脑皮层损伤主要发生在母鼠孕16天之后,导致胎鼠大脑皮层神经元数量减少和神经元的成熟障碍(树突和轴突形成)、神经元迁移障碍等,但对神经管的形成、大脑皮层神经前体细胞的增殖无影响。尽管既往针对甲状腺激素对脑发育的影响研究较多,但大都集中在妊娠晚期及出生之后。甲状腺激素对胚胎期神经的早期发育的作用仍不清晰。不仅甲状腺激素对脑发育起着重要作用,妊娠期甲状腺自身抗体也会影响后代脑发育。流行病学调查表明,母体甲状腺自身免疫阳性的后代,其在智力评分、运动评分、外向型表达方面存在差异。因此,影响母体甲状腺自身抗体的因素对后代脑发育起着关键作用。近年来,铁对脑发育的影响已被越来越广泛的认知。在脑生长发育快速时期,脑摄取铁也最高。铁缺乏本身可导致大脑发育的不可逆损害,包括情感行为异常、认知功能下降和注意力缺陷等脑功能异常表现。尽管既往对铁和甲状腺激素分别对脑发育的影响研究较多,但铁与甲状腺激素及甲状腺自身抗体之间是否存在相互作用,并且是否可以共同对脑发育发挥调控作用这一过程仍不清晰。鸡卵白蛋白上游启动子转录因子(Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factors,COUP-TF)是属于核受体中孤核受体家族的一员,其有COUP-TF1和COUP-TF2两个亚型,它们在脑组织中广泛表达。研究发现:COUP-TF1在脑组织早期即表达,广泛表达于神经前体细胞和神经细胞中。母鼠孕7.5天时,胎鼠脑组织内可以检测到COUP-TF1,之后其在脑组织内广泛表达,孕13.5天在大脑皮层内的表达最高,之后显著下降。COUP-TF1在脑发育早期不同脑组织部位的高表达提示其在脑发育中可能发挥了重要的作用。条件性敲除大脑皮层内COUP-TF1的小鼠大脑皮层运动区扩大而感觉区缩小。即COUP-TF1基因敲除会改变大脑皮层发育的自然进程。甲状腺激素核受体α和COUP-TF1核受体在妊娠早期均开始出现,提示COUP-TF1和甲状腺激素核受体α极有可能共同参与了调控早期脑发育的过程。基于以上认识,本研究拟通过建立体外培养小鼠胚胎干细胞在体外定向诱导分化为锥体神经元的模型,探讨甲状腺激素对胚胎干细胞向神经元分化过程的影响。并利用慢病毒转染技术和CRISPR/CAS9技术获得COUP-TF1基因敲除的C57BL/6N ES细胞系,研究COUP-TF1对胚胎干细胞向神经元分化过程中对神经发育的影响。以及甲状腺激素和COUP-TF1是否存在对神经发育的共同作用。利用多中心大样本横断面研究,探讨在铁与甲状腺激素及甲状腺自身抗体之间是否存在相互作用。方法:本研究实验部分采用皮层神经元分化方法对小鼠胚胎干细胞(ESC)进行体外分化。小鼠ESC的皮层神经元分化发生在两个阶段,每个阶段使用特定的条件培养基。利用这种方法,我们能够在第一阶段获得高比例的巢蛋白阳性祖细胞,并在第二阶段分化中获得皮层神经元。采用免疫荧光及细胞电生理功能实验验证所分化的细胞为锥体神经元。在胚胎干细胞分化为神经元过程中各阶段用梯度浓度T3处理细胞时,采用Real time PCR、免疫荧光细胞化学检测T3对神经早期分化,增殖期,神经晚期分化的影响,以及分化神经元的突触生长情况,探讨T3对胚胎干细胞神经发育过程中的左右。利用Real time PCR分别检测TRα和COUP-TF1在胚胎干细胞向神经元分化过程中mRNA的表达情况。利用慢病毒转染技术和CRISPR/CAS9技术获得COUP-TF1基因敲除的C57BL/6N ES细胞系,利用Real time PCR、免疫荧光细胞化学检测和RNA Seq分

关键词： 表皮生长因子   基因工程表达   冻干粉   乳液  

摘要： 人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)是一种含有53个氨基酸的单链多肽,可有效促进表皮细胞、成纤维细胞等多种细胞增殖。医学上被用于烧伤烫伤、溃疡和角膜损伤等治疗,同时也用于皮肤修复、去除粉刺、痊疮等,具有很大的市场应用价值。作为生物大分子,其存在透皮吸收差的困扰,本实验室在前期构建了高透膜型、靶向释放的hEGF(P-hEGF),经细胞及动物实验证实具有很好的生物学活性及透皮吸收释放能力,但其基因工程表达效果依然不甚理想。针对这一问题,本研究开展了如下内容:对P-hEGF的大肠杆菌表达系统进行了优化:采用四因素三水平的响应面分析法优化了培养基组成成分为:葡萄糖9.80 g/L,酵母粉10.93 g/L,大豆蛋白胨9.78 g/L,硫酸铵 0.90 g/L,氯化钠 0.50 g/L,KH2PO4 3.0 g/L,Na2HPO4.12H20 17.10 g/L,培养条件为接菌量3%,诱导剂IPTG终浓度为10 mM下37℃诱导10h,250 mL锥形瓶装液50 mL。在此条件下,将P-hEGF的表达菌株在5 L的发酵罐中37℃下连续培养30 h,保持转速400 r/min,溶氧量20%以上,pH值7.1,P-hEGF的表达量较优化前提升了 8倍左右,达到了 520 mg/L。经MTT分析显示重组产物具有很好的hEGF活性,能有效促进Balb/c 3T3成纤维细胞增殖,初步人体实验检测显示对脸部,眼部的细皱纹明显有所改善,对熬夜造成的皮肤干燥,红点有所改善。另一方面,考虑到大肠杆菌表达体系会存在内毒素残留污染的风险,而酵母提取物则已被国家列入化妆品添加剂目录中,因此实验同时构建了 P-hEGF的酵母菌表达系统:按毕赤酵母偏爱的密码子对P-hEGF目的基因进行优化,连接到pPIC-9k表达载体上构建获得P-hEGF酵母菌胞外分泌性表达质粒,转入毕赤酵母GS115中,经筛选得到阳性重组菌株,甲醇诱导表达后,经Western blot检测得重组目的蛋白P-hEGF成功表达,产量为20 mg/L。MTT检测显示酵母表达产物也能有效促进Balb/c 3T3成纤维细胞增殖。最后,实验对P-hEGF的冻干粉剂和乳液的制备工艺进行了研究,冻干保护剂选取甘露醇、蔗糖、脱脂奶粉,正交试验确定最佳配比为10%、15%、5%,长期实验结果表明,40℃下放置3个月后依然稳定。乳液的感官(色泽、气味、外观)及理化(pH、耐寒、耐热)指标符合QB/T1857-2013行业标准,且通过了吸湿率测试。综上所述,本实验优化了高透膜型、靶向释放的P-hEGF的基因工程表达及冻干粉剂和乳液的制备工艺,为其工业化生产进一步奠定了基础。

关键词： Genetics  

摘要： Background: Telomeres are specialized heterochromatic structures found at the ends of chromosomes that serve to protect the integrity of the genome. Theoretically, telomeres, and thereby chromosomes, should be constantly shortening however that is not the case. Telomere length homeostasis is maintained via the activity of the enzyme Telomerase as well as a complex of 6 proteins, called the shelterin complex. Decreased telomere length is associated with a variety of neuropsychological diseases such as Alzheimer's disease, and chronic depression. Objective: The primary objective was to understand the effect of alcohol exposure on telomere dynamics, specifically on telomere length as well as the expression of the shelterin complex genes. This was accomplished using human embryonic stem cells (hESCs) as models. This study was exploratory with the goal of increasing our knowledge of genes involved in telomere maintenance. Methods: hESCs were cultured in cell culture media containing 25 mM, 50 mM, or 100 mM of ethanol. After a 3-, 7-, or 14-day ethanol exposure plus a 24-hour withdrawal, hESCs were collected and genomic DNAs and total RNAs was extracted. Ethanol-induced telomere length changes were examined by quantitative polymerase chain reactions (qPCR).Ethanol-induced shelterin complex gene expression changes were examined by reverse-transcription and quantitative polymerase chain reactions (RT-qPCRs). Results: Extended alcohol exposure exerted a deleterious effect on telomeres, causing them to diminish in length. The effects of alcohol on the expression of shelterin complex genes were varied, ranging from consistent upregulation or downregulation to a combination of both. The concentration of alcohol was inversely correlated with the expression of shelterin complex genes, and the correlation was influenced by the duration of ethanol exposure. Conclusion: Chronic exposure to alcohol resulted in the shortening of telomeres. The effect ethanol was both time- and concent

关键词： 胚胎干细胞   自我更新   Tfcp211   Esrrb   重编程  

摘要： 着床前胚胎的发育和由早期囊胚衍生而来的干细胞系受到高度调节。从小鼠的囊胚期,可以分离出三种不同的干细胞类型并且可以在体外进行培养。这些干细胞类型包括来自滋养外胚层的滋养层干细胞(Trophoblast Stem,TS);来自原始内胚层的干细胞样胚外内胚层(Stem-cell-like Extraembryonic Endoderm,XEN)细胞以及分离自着床前的囊胚内细胞团细胞(Inner cell mass,ICM),即胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs);其中研究最热的是小鼠胚胎干细胞(mESCs)。在体外合适的培养条件下,ESCs只保持无限增值的能力而不发生分化,简称“自我更新”,同时保留分化成三个胚层的能力,简称“多能性”。到目前为止,虽然已经建立了多个物种的类似胚胎干细胞的细胞系,但是只有来源于小鼠和大鼠的胚胎干细胞可以产生嵌合体后代,称为naive多能性状态。有趣的是,在自我更新的特性和形态方面,人胚胎干细胞(human Embryonic Stem Cells,hESCs)更类似于小鼠外胚层干细胞(mouse Epiblast Stem Cells,mEpiSCs)而不是mESCs,我们称这个状态为primed多能性状态。值得注意的是,通过过表达单个基因,例如Stat3,Tfcp211和Klf4,可以将primed多能性状态的ESCs重编程回到naive多能性状态。mESCs和mEpiSCs需要不同的培养条件来维持多能性。mEpiSCs主要依赖成纤维细胞生长因子(Basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)和重组人激活素-A(Recombinant Human Activin-A,ActivinA)来维持自我更新。而mESCs可以通过两种不同的培养体系来维持自我更新:添加白血病抑制因子(Leukaemia inhibitory factor,LIF)的血清培养基,以及添加两个小分子抑制剂(2i)的无血清培养基N2B27,2i指CHIR99021和PD0325901,它们维持自我更新分别是通过抑制糖原合成酶激酶-3(Glycogen synthase kinase 3 beta,GSK3β)和分裂原活化蛋白激酶的激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase,MEK),而LIF维持自我更新是通过激活信号转导与激活因子3(STAT3),从而进一步激活STAT3下游的一些多能性基因,比如:Tfcp211,Kl4,和Piml等,其中的每一个过表达都可以替代STAT3来维持自我更新。但是,只有下调Tfcp211的表达才能够削弱LIF/STAT3信号通路介导的自我更新和mEpiSCs的重编程。先前的文献报道,作为LIF/STAT3下游的靶基因,转录因子Tfcp211(Transcription factor CP2-like protein 1),在建立和维持mESC naive多能性状态中扮演着很重要的角色。Tfcp211的过表达不仅可以取代LIF和2i中的任何一个因子的作用来促进mESCs的自我更新能力,还可以提高mEpiSCs重编程为naive多能性状态的效率。但是,Tfcp211是通过下游的哪些靶基因的作用来维持自我更新还不清楚。为了研究这个问题,我们首先鉴定出Tfcp211下游的靶基因,再对其进行一系列的验证。根据2014年Dunn S J在Science杂志上发表的一篇文献[Doi:10.1126/science.1248882],Estrogen related receptor beta(Esrrb)和Salian-like gene(Sa114)可能是Tfcp211下游的靶基因。为了验证这一预测,我们首先在小鼠胚胎干细胞中过表达Tfcp211,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析Esrrb和Sa114的表达情况。结果显示,过表达Tfcp211只有Esrrb的表达量较高,我们初步确定了Esrrb是Tfcp211的下游靶基因。接着,为了进一步确定Esrrb是Tfcp211的下游靶基因,我们实施了以下4个实验。第一,我们构建了一个Tfcp211可诱导表达的细胞株,并分时间段加入四环素(DOX)来诱导Tfcp211的表达,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析Esrrb的表达情况。结果显示,诱导时间越长,Esrrb的表达量越高。第二,在mESCs中下调Tfcp211的表达,qRT-PCR结果显示,Esrrb的表达量也随之降低。第三,我们从JASPAR数据库中分析了Tfcp211在Esrrb启动子上的结合位点,并进行了染色质免疫共沉淀实验(ChIP)。结果显示,Tfcp211在Esrrb启动子上具有很高的结合

关键词： ATTITUDE (Psychology)   BIOETHICS   BLACKS   CONCEPTUAL structures (Information theory)   DISCRIMINATION   DOMINANCE (Psychology)   FEMINISM   GROUP identity   HEALTH services accessibility   HEALTH status indicators   OPPRESSION (Psychology)   SOCIAL classes   SOCIAL groups   HEALTH disparities  

摘要： An editorial is presented which discusses the value of intersectionality in clinical medicine, encouraging health professionals to recognize multiple marginalizations faced by patients, and to confront biases that impact clinician-patient encounters. It mentions the benefit of empirical bioethics in the acknowledgment of intersections of power and oppression in patients' and health care providers' lives.

关键词： Neurosciences   Developmental biology  

摘要： In amyotrophic lateral sclerosis (ALS) spinal motor neurons (SpMN) progressively degenerate while a subset of cranial motor neurons (CrMN) are spared until late stages of the disease. Understanding the nature of CrMN resistance to ALS will allow us to better understand ALS and promises to open a new frontier for the development of therapeutic strategies. However, the study of differential vulnerability between SpMNs and CrMNs has been hindered by inaccessibility of large and homogenous populations of CrMNs. Using a rapid and efficient protocol to differentiate mouse embryonic stem cells (ESC) into SpMNs and CrMNs, we have identified that ESC-derived CrMNs accumulate less human superoxide dismutase 1 (hSOD1) mutant proteins and insoluble p62 than SpMNs over time. ESC-derived CrMNs rely more on the ubiquitin proteasome system to degrade misfolded proteins and are intrinsically more resistant to chemically induced proteostatic stress than SpMNs. Confirming the in vitro observations, ALS-resistant CrMNs accumulate less hSOD1- and p62-containing inclusions than SpMNs in the ALS hSOD1 G93A mouse model. Primary ALS-resistant CrMNs are also more resistant than SpMNs to proteostatic stress. Unbiased proteomic study reveals that ESC-derived CrMNs contain higher levels of proteasome 20S core subunits than SpMNs, suggesting differential proteolytic capacity verified by proteasome activity test. Moreover, chemical and genetic activation of the proteasome rescues the SpMN sensitivity to proteostatic stress. Together, these results establish an ESC-based platform to study ALS differential vulnerability and identify the greater capacity to maintain a healthier proteome, a possible mechanism to resist ALS-induced neurodegeneration.