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关键词： 胃癌   HER2   融合蛋白   靶向治疗   白介素2   干扰素γ  

摘要： 胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤,预后相对较差,严重威胁人类健康。早期胃癌临床症状不典型,故多数患者确诊时已为进展期,这些患者预后较差,除手术治疗外,均需辅助内科化疗等后续治疗。胃癌的内科治疗主要包括化疗、免疫治疗和靶向治疗。但化疗有效率有限,而且毒副作用高,免疫治疗尚未寻找到胃癌特异性靶点而进展缓慢。靶向治疗已在乳腺癌、肺癌治疗中广泛采用,特别是曲妥珠单抗（trastuzumab）在乳腺癌治疗中已被广泛认可。鉴于靶向治疗的精准性,人们已开始探索靶向治疗在胃癌中的应用。本研究旨在以HER2蛋白为靶点,构建并合成融合基因工程蛋白,探讨其对HER2阳性胃癌细胞的杀伤效果。单克隆抗体是目前应用较广泛的靶向治疗药物,抗体依赖的细胞毒作用（ADCC）是单抗发挥杀伤作用的重要机制,但单抗抗体分子量大,难以穿透肿瘤组织,这些弊端限制了单抗的应用,同时具有免疫杀伤作用的T细胞因表面缺乏与单抗结合的受体而不能被有效介导,从而削弱了机体对肿瘤的免疫反应。单链抗体（sc Fv）仅含有全抗的可变区片段,具有免疫源性小、分子量小、穿透力强的特点,因此是理想的肿瘤治疗靶向载体。CCL19是一类可趋化免疫细胞定向移动的小分子蛋白,可诱导T细胞、NK细胞、DC细胞等发挥抗肿瘤作用。IL7在T细胞的发育、分化及增殖过程中发挥着重要作用,可通过促进IFN-γ、TNF-α等细胞因子分泌抑制多种实体瘤的生长。所以本研究设计了以人源HER2 sc Fv为靶向载体,连接免疫细胞趋化因子CCL19及介导T细胞活化的IL7,构建了抗HER2sc Fv-CCL19-IL7全基因序列的慢病毒载体,转染并筛选出稳定表达融合基因工程蛋白的HEK293T细胞株,并从其培养上清中成功获得目标蛋白。获得目标蛋白后,第二部分实验验证了抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白的HER2靶向性及生物学活性。第三部分实验为融合蛋白抗肿瘤疗效研究,选用高表达HER2蛋白的NCI-N87胃癌细胞和HER2阴性的SGC7901细胞分别给予不同剂量融合蛋白,观察其杀伤效果。同时建立了人源化NOD/SCID小鼠模型,并建立胃癌移植瘤小鼠模型,给予抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白进行治疗,观察肿瘤体积变化,检测体内IFN-γ和IL-2细胞因子分泌水平,评价其体内抗肿瘤效果。第一部分抗胃癌HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白表达载体的构建及真核表达目的:构建抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白的表达质粒并筛选出稳定表达融合基因工程蛋白的HEK293T稳定细胞株。方法:从Genbank数据库中检索到人CCL19 c DNA序列（gene ID6363）,目的基因大小294bp,人IL7 c DNA序列（gene ID 9606）,目的基因大小531bp,抗人HER2 sc Fv基因由本实验室制备的鼠抗人HER2单克隆抗体杂交瘤细胞株中的VH、VL基因,经过密码子优化及人源化合成获得。按照抗HER2 sc Fv基因-连接肽基因-CCL19基因-连接肽基因-IL7基因形式排列,并于整段基因合成序列的两端分别设置的XhoⅠ/HindⅢ酶切位点,全基因序列合成,合成后的基因序列亚克隆在pc DNA3.1载体中,经过XhoⅠ/HindⅢ内切酶的酶切反应,将HCI-pc DNA3.1质粒中的抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因连接到慢病毒表达载体质粒上,酶切检验目的基因片段大小,并回收测序无误后使用慢病毒转染的方式将目的基因转染至HEK293T细胞中,并用PURO筛选转染后的细胞,以获得稳定表达融合蛋白的HEK293T细胞体系。将筛选得到的高表达融合蛋白的HEK293T细胞大量扩增培养,提取培养上清内表达的融合蛋白,利用His标签,通过镍柱亲和层析纯化目标蛋白,并通过Western-blot检测该融合蛋白在HEK293T细胞培养上清中的表达情况。结果:1.通过基因工程技术,成功合成了抗HER2 scFv-CCL19-IL7全基因序列,并亚克隆在pc DNA3.1载体中,通过基因测序证明基因序列正确,无突变。2.成功构建含有抗HER2 scFv-CCL19-IL7全基因序列的慢病毒载体,并通过慢病毒转染的方式成功的将目的基因序列成功转染至HEK293T细胞中,并筛选出稳定表达抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白的HEK293T细胞株。*** blot检测到抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白在HEK293T细胞培养上清中表达。第二部分抗胃癌HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白靶向性验证及生物活性分析目的:验证抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白的HER

关键词： 缺血性心脏病   活性氧   人胚胎干细胞   心肌定向诱导   胚层分化  

摘要： 背景：　　缺血性心脏病是心血管疾病中重要的一种，也是目前严重危害人类健康的一类疾病。由于成人心脏的心肌细胞再生能力十分有限，因此缺血后损失的心肌通常被非收缩性瘢痕组织所替代，而非缺血部位心肌会代偿性收缩，以保证心室正常功能，这部分心肌因负荷加重而出现代偿性肥厚，细胞功能异常及凋亡，最终导致心衰。心脏移植是目前唯一可用的替代病损心肌组织、恢复心功能的临床手段，但心脏移植很大程度上受到供体心脏供应不足以及高昂的治疗费用的限制。因此，以细胞为基础的心脏修复作为改善心脏损伤的一种替代方法应运而生。人多能干细胞（hPSC）具有分化为所有成体细胞类型的潜能，人多能干细胞衍生的心肌细胞(hPSC-CMs)目前已广泛应用于药物筛选与心肌毒性评估、体外心脏病模型构建及基础研究，同时由于hPSC-CMs作为一种具备相应心肌功能的成熟细胞，可以部分地替换受损心肌，改善心脏功能，因此hPSC-CMs细胞移植治疗在心脏再生医学领域具有极大的应用前景。　　由于hPSC-CMs在基础研究、药物筛选等方面的应用日益广泛，尤其是未来的临床治疗应用，使对于多能干细胞来源的心肌细胞的质与量都有着越来越高的要求。为获得足量、足纯的心肌细胞，尽管迄今为止已经建立了多种细胞因子及小分子化合物组合的含血清或无血清诱导方案，也已取得较大进展，然而由于心肌分化的调控机理复杂，尚未完全阐明，使目前体外诱导效率与纯度远未达到临床应用的要求，仍然需要进一步研究阐明心肌分化的调控机制，优化改进诱导方案以提高人多能干细胞的心肌分化效率。　　活性氧（ROS）主要来源于线粒体呼吸链和NADPH氧化酶的氧化过程。ROS化学性质活泼，过量产生和积累可导致脂质过氧化，蛋白质氧化和DNA损伤，其与衰老，肿瘤，糖尿病和其他疾病相关。但合适水平的ROS可以作为第二信使参与调控多种生理过程，使细胞发挥正常的生物学功能。本课题在前期研究的基础上，针对活性氧（ROS）在人胚胎干细胞中胚层以及心肌分化过程的作用，通过干预ROS水平观察其对中胚层和心肌分化各方面的影响，并进一步探索优化人胚胎干细胞心肌分化的诱导方案。　　目的：　　1.观察人胚胎干细胞心肌定向诱导过程中升高及降低ROS水平对于中胚层分化的效率及细胞质量的影响;2.观察升高及降低ROS水平对于人胚胎干细胞心肌定向诱导分化效率以及最终成熟心肌细胞总数的影响;3.探索优化人胚胎干细胞心肌定向分化的诱导方案。　　方法　　1.采用实时荧光定量PCR技术、蛋白免疫印迹技术以及流式细胞术分别检测人胚胎干细胞心肌定向诱导分化过程中特异性中胚层标记基因Brachury/T的表达变化;2.测量、计数中胚层分化期间拟胚体的大小、数量以及细胞总数;3.通过PI染色及AnnexinV染色，采用流式细胞术检测比较细胞凋亡和细胞周期的情况;4.流式细胞术检测心肌分化末期心肌特异性标记心肌肌钙蛋白T（cardiacTroponinT,cTnT）的阳性率、荧光信号几何均数以及细胞总数，并计算心肌细胞终产量。　　结果：　　1.升高ROS促进中胚层markerBrachyury/T基因和蛋白水平的表达，增加中胚层分化期间拟胚体的大小及数量，而降低ROS的作用相反。　　2.降低ROS促进中胚层细胞的凋亡，而升高ROS对细胞凋亡无影响;干预ROS并不引起中胚层细胞周期的改变。　　3.升高ROS提高人胚胎干细胞心肌分化最终自主搏动拟胚体的比例以及cTnT阳性率，降低ROS的作用相反。升高ROS对最终的细胞总数无影响，但降低ROS明显减少细胞总数。　　4.中胚层阶段提高ROS水平而心肌分化阶段降低ROS水平能在提高心肌诱导效率的基础上进一步促进细胞存活，提高最终心肌细胞产量。此外，心肌定向分化阶段干预ROS对其最终诱导效率无影响。　　结论：　　***对于人胚胎干细胞心肌定向诱导分化早期的中胚层分化是必要的，适度升高ROS水平可促进人胚胎干细胞向中胚层分化;***促进人胚胎干细胞心肌分化的主要机制之一是其促进了早期中胚层分化，心肌定向分化阶段干预ROS对其最终分化效率无影响;3.通过分阶段控制细胞内ROS水平，即在分化早期适度升高ROS水平，并在分化中后期适度降低ROS水平，可进一步提高心肌诱导效率并增加心肌细胞产量。

关键词： 干细胞毒理学   纳米材料   胚胎干细胞   发育毒性  

摘要： 由于纳米材料具有良好且稳定的理化性质，目前已被广泛应用于工业生产、生物医疗以及生活中的方方面面。流行病学研究表明，纳米材料的使用会危害人体健康，特别是对婴幼儿健康造成影响。一般认为，纳米材料能通过呼吸道、消化道以及皮肤暴露的形式进入人体组织，在细胞内造成自由基升高以及炎症因子的异常表达。同时，许多纳米材料还被证实能透过胎盘屏障进入胚胎，对胚胎发育造成影响。因此，从发育角度衡量纳米材料的毒性，将有助于更好地对纳米材料生物安全性进行评估。干细胞毒理学的出现，可在体外水平帮助我们探究纳米材料的发育毒性。此研究中我们的研究对象为超细碳纳米颗粒，目前被广泛应用于橡胶、印染等各个行业。为了全面而详细地评价其毒性，我们采用了胚胎干细胞毒理学模型对其进行毒性探究。　　首先我们利用多种手段如电镜等对超细碳颗粒物进行了表征。实验结果表明，超细碳颗粒粒径大小约为50nm，能在培养基中均匀分散。急性毒性实验数据表明，超细碳颗粒72h给药处理不会造成胚胎干细胞细胞活力降低，但却能特异性下调其多能性基因SOX2的表达。此外，通过高光谱技术对暴露的碳颗粒进行定位，我们还发现碳颗粒倾向于分布在细胞与细胞之间。　　其次通过诱导胚胎干细胞分化为拟胚体，我们探究了超细碳颗粒物暴露对早期胚胎发育三胚层的影响。通过冰冻切片图片发现，在拟胚体形成过程中超细碳颗粒物能主动蓄积在拟胚体内;虽然此蓄积效应对神经外胚层、中胚层以及内胚层标志基因表达无显著影响，但是却能促进非神经外胚层基因的过量表达。此结果提示我们，超细碳颗粒物可能会影响非神经外胚层相关细胞，特别是表皮中角质形成细胞的发育过程。　　为了进一步探究超细碳颗粒暴露对非神经外胚层的潜在危害，我们定向将胚胎干细胞分化为角质形成细胞并暴露在超细碳颗粒物中，重点关注了超细碳颗粒物对表皮发育过程的影响。研究结果表明，1μg/mL至10μg/mL超细碳颗粒物给药处理会干扰角质形成细胞分化过程，具体表现在促进角质形成细胞早期标志基因KRT8、KRT18和ΔNP63的异常表达，同时抑制角质形成细胞成熟基因KRT14、KRT5、KRT16和COL7A1的表达。同时，此过程还伴随着牛皮癣相关基因S100A7和S100A9上调，以及炎症相关因子的高表达。因此，我们认为，超细颗粒物会影响表皮发育过程，增加表皮炎症疾病的发病率。　　综上所述，本研究通过胚胎干细胞毒理学模型，证明了环境相关浓度的超细碳颗粒物暴露对人体健康存在潜在危害，具体表现在影响胚胎干细胞的自我更新干扰角质形成细胞分化并伴随炎症反应的产生。该结果对于评价超细碳颗粒物毒性效应，理解纳米材料潜在发育毒性具有十分重要的意义。

摘要： 一、体外胚胎的法律属性 2014年的宜兴胚胎纠纷一案,二审法院尽管做出了判决,但判决书中并没有明确表明胚胎的法律属性是什么,而是从伦理、情感和特殊利益保护三个方面,判决冷冻胚胎的监管权处置权属于四人共同享有.由此以后学界对体外胚胎的法律属性也做了不少研究.

关键词： 人胚胎肝细胞   Ctnnb1(β-catenin)   TCF1   GATA6  

摘要： 人胚胎干细胞(Human Embryonic Stem Cells,hESCs)是分离自人囊胚的内细胞团,具有自我更新和多向分化的潜能[1]。hESCs生长在灭活的小鼠成纤维细胞(即饲养层)上,培养基里需要添加血清替代物(Knockout Serum Reβlacement,KSR)和多种细胞因子(如ActivinA和bFGF等),但是在此条件下培养的hESCs生长速度十分的缓慢,不能耐受单细胞消化,容易凋亡[2]。虽然市场上出现了商品化的Matrigel可以部分的替代饲养层细胞,但是培养在Matrigel上的hESCs同样存在易分化和易凋亡等缺点,而且Matrigel操作麻烦,价格也相对比较的高。因此,寻找hESCs的新的培养方法已成为当前再生医学的热点研究方向之一。我们前期研究发现Wnt/β-catenin信号通路的小分子抑制剂IWR1可以改善目前hESCs培养的状况。IWR1是Tankyrases的一个抑制剂,Tankyrases的功能主要就是促进Axin蛋白的降解,Axin蛋白是β-catenin降解复合物的主要组成成分,所以小分子IWR1处理过的细胞可以稳定Axin蛋白从而降解β-catenin。虽然抑制Wnt/β-catenin信号通路可以促进hESCs的自我更新[3],但是具体的作用机制还不清楚。所以就得到了我所研究的课题:探究IWR1维持hESCs自我更新的分子机制。因为抑制Wnt/β-catenin信号通路可以促进hESCs的自我更新,所以我们就利用逆向思维来研究W nt/β-catenin信号通路是如何促进了hESCs分化,从而解析出IWR1维持hESCs自我更新的分子机制。本课题主要分为以下几个部分:第一部分:以前的文献报道过,β-catenin的过表达快速导致hESC分化[4]。因此,我们要首先需要确定β-catenin的这一功能。用PiggyBac载体(PB-Ctnnb1)使Ctnnb1在hESCs细胞株中的表达量提高。其中Ctnnb1在密码子33处含有激活突变(S33Y:即当33位的丝氨酸(S)突变成酪氨酸(Y),导致β-catenin不能被磷酸化降解,从而稳定其在细胞内的含量)。在添加了ActivinA/bFGFF/IWR1的培养基中培养6天之后,PB-Ctnnb1S33Y细胞中与分化相关的基因Cxcr4,FoxA 和Mixl1的表达含量显著升高,然而转有空载PB的对照细胞仍保留传统的hESCs形态,处于自我更新的状态。比如具有碱性磷酸酶染色的活性,高表达与多能性相关的基因Oct4,Nanog和TRA1-81。这些结果表明Ctnnb1的过表达不利于hESCs的自我更新。因此,我们确定Ctnnb1的过表达能够促进hESCs分化。第二部分:为了验证Ctnnb1是否通过其转录活性诱导hESCs分化,基于Ctnnb1S33Y基因的特定结构域,设计了一系列的缺失突变体[5-6]。Ctnnb1蛋白由781个氨基酸组成,基于此,我们做了以下几个突变体:Ctnnb1S33Y/△N48-217:Ctnnb1蛋白缺失N端第48到217的氨基酸,Ctnnb1S33Y/△N218-467:Ctnnb1蛋白缺失N端第218到467的氨基酸,Ctnnb1S33Y/△C468:Ctnnb1蛋白缺失C端第468到781的氨基酸,Ctnnb1S33Y/△C694:Ctnnb1蛋白缺失C端第694到781的氨基酸。将这些突变体形式的Ctnnb1插入PB质粒中并在hESCs中成功过表达。将其在添加了Activin/bFGF/IWR1的培养基中传代2次之后,进行了一系列的功能性验证后发现Cnnb1S33Y和Ctnnb1S33Y/△N48-217诱导hESCs分化。PB和Ctnnb1S33Y/△N218-467细胞中大多数hESCs仍然保持多能性。TOPFlash报告基因活性的结果显示,Ctnnb1S33Y和Ctnnb1S33Y/△N48-217强烈激活TCF依赖性转录,但是S33Y突变对TCF转录的影响在很大程度上由于某些Ctnnb1结构域的缺失而消除,例如C末端(S33Y/△C468和C694)或armadillo repeats 3-8(S33Y/△N218-467)。因此,我们的数据与之前的模型一致,其中Ctnnb1通过armadillo repeats 3-8与TCF结合并通过其C-末端激活转录[33],并且还表明Ctnnb1主要通过与LEF1/TCF家庭成员相互作用诱导hESCs分化。第三部分:LEF1/TCF家族转录因子含有四个旁系同源物(LEF1,TCF1,TCF3和TCF4),并且都能够与Ctnnb1相互作用[7]。为了确定Ctnnb1主要与LEF1/TCF家族中哪个基因相互作用诱导hESCs分化。我们在hESCs中分别

关键词： 糖尿病   β-catenin   胚胎干细胞   胰岛素分泌细胞   CHIR99021  

摘要： 目的糖尿病现已成为危害人类健康的重要疾病之一,随着人们生活水平的提高和生活压力增大,以及遗传因素的影响,糖尿病的发病率正在日益增加。糖尿病发生发展的主要因素之一就是因为体内胰岛素分泌不足所导致的。针对此病虽然已有多种治疗的方法,但是这些传统的治疗方法不能从根本上治愈患者,导致患者终身依赖药物治疗,寻找全新的替代疗法已成为人们的主要攻克方向之一。胚胎干细胞分离自着床前的囊胚内细胞团细胞,在体外可以进行自我复制式的增殖(自我更新),同时还维持着变成神经、心肌以及肝脏细胞等不同胚层来源的各种细胞的能力(多能性),在临床的基础和转化应用方面有重要的价值。虽然前期已有很多研究将胚胎干细胞分化成胰岛素分泌细胞,但是这些细胞的功能以及分化效率都有待提高,且调控的机制报道的也不多。本研究在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞定向分化过程中激活Wnt/β-catenin信号通路,检测激活此信号通路是否可以促进小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化。方法前期有研究报道:在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化过程中,通过三个阶段,分别添加三种不同的溶液,即溶液1、溶液2和溶液3(具体配方见实验方法部分),可以很好地得到具有功能的胰岛素分泌细胞。基于此研究方案,我们选择研究了Wnt/β-catenin信号通路在此过程中的功能,因为Wnt/β-catenin信号通路在胚胎向中内胚层的分化中具有重要的功能。当细胞外有Wnt蛋白时,体内β-catenin降解复合物GSK3、Axin和CK1等激酶不能形成,β-catenin在体内得以稳定积累,从而进入核内激活下游靶基因表达。因此本研究在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的三个阶段中,通过在三个不同阶段的三个不同溶液中添加终浓度为3μM的GSK3蛋白的小分子抑制剂CHIR99021来激活Wnt/β-catenin信号通路,利用Western blot、q PCR以及免疫荧光等方法,检测胰岛素分泌细胞标志基因Pdx1、Ngn3、Pax4和Insulin1的表达情况;基于Tet-On表达调控系统,建立由小分子Doxcycline控制的β-catenin基因可诱导过表达胚胎干细胞系,在胰岛细胞形成的不同阶段进行诱导表达,观察其功能是否与CHIR99021类似;最后,利用慢病毒干扰系统,在胚胎干细胞中下调β-catenin的表达水平,观察其是否可以削弱CHIR99021在胰岛素分泌细胞形成过程中的功能。结果小鼠胚胎干细胞在三个不同时间段经过三种不同配方的溶液处理能够有效地分化成胰岛素分泌细胞。在胰岛素分泌细胞定向分化的早期和晚期阶段,添加CHIR99021和过表达β-catenin均可以提高胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的分化效率,表现为Pdx1和Insulin 1的表达上调(P<0.01),而干扰β-catenin基因的表达则削弱了CHIR99021的功能(P<0.01)。结论在小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的特定阶段,激活Wnt/β-catenin信号通路能够促进胰岛素分泌细胞的形成,得到了功能更好的胰岛素分泌细胞。研究结果有利于优化人胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的方案,将为获得更多有效降低血糖水平的胰岛细胞提供有用的线索,最终有助于未来找到糖尿病全新的治疗方法,从而造福患者。

关键词： L-天冬氨酸-α-脱羧酶   β-丙氨酸   密码子优化   自动诱导  

摘要： β-丙氨酸是一种重要的医药化工原料,在食品、医疗、环境等领域有广泛应用。L-天冬氨酸-α-脱羧酶（PanD）,可以特异性脱去L-天冬氨酸的α-羧基,将其转化为β-丙氨酸。为构建高产β-丙氨酸基因工程菌,本研究克隆了来源于枯草芽孢杆菌的L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因（panD）,在*** BL21（DE3）中异源表达。并采用不同方法对基因工程菌进行优化,逐步提高了PanD的表达量,进而提高β-丙氨酸产量。分别选用p ET-22b（+）、p ET-29a（+）和p ET-30a（+）为表达载体,构建重组质粒p ET-22b（+）-panD、p ET-29a（+）-panD、p ET-30a（+）-panD,在*** BL21（DE3）中进行异源表达,成功构建三株产β-丙氨酸的基因工程菌*** BL21（DE3）/p ET-22b（+）-panD（简称22b）、*** BL21（DE3）/p ET-29a（+）-panD（简称29a）和*** BL21（DE3）/p ET-30a（+）-panD（简称30a）,均能表达有活性的PanD。综合比较PanD的表达量和催化效果,优选p ET-22b（+）和p ET-30a（+）作为进一步优化使用的表达载体。依据大肠杆菌的密码子偏好性,对目的基因序列进行优化,构建密码子优化菌株*** BL21（DE3）/p ET-22b（+）-panD_o（简称22b-1）、*** BL21（DE3）/p ET-30a（+）-panD_o（简称30a-1）。经密码子优化后,菌株22b-1的PanD表达量和催化效果未有提高,而菌株30a-1的PanD表达量和催化效果明显提高,β-丙氨酸产量可达79.77 mmol/L,约为优化前的2倍。采取自动诱导的策略对菌株30a-1性能进行进一步优化。结果表明,经自动诱导后,细胞数量大大增加,菌体浓度为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG）诱导菌浓的2.2倍。β-丙氨酸产量提高到140.82 mmol/L,较优化前提高了2.5倍,酶活可达20.57 U/m L发酵液。综上所述,通过分子生物学手段,构建含有不同表达载体的β-丙氨酸基因工程菌。采用不同方法对菌株性能进行优化后,菌株30a-1性能较好,具有一定的应用价值,也为工业化生产提供了一些参考。

关键词： CONCEPTUAL structures (Information theory)   DEBATES & debating   DECISION making   ETHICISTS   GENETICS   MEDICAL ethics   POLICY sciences   ETHICAL decision making   GENETIC privacy  

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关键词： Bioethics   Intersex   Disorders of sex development   Informed consent   History  

摘要： This article argues that the rise of bioethics in the post-WWII era and the emergence of the legal doctrine of informed consent in the late 1950s should have had a greater impact on patients with intersex traits (atypical sex development) than they did, given their emphasis on respect for autonomy and beneficence toward patients. Instead, these progressive trends collided with a turn in intersex management toward infants, who were unable to provide autonomous consent about their medical care. Patient autonomy took a back seat as parents heeded physicians' advice in an environment even more hierarchical than we know today. Intersex care of both infants and adults continues to need improvement. It remains an open question whether the abstract ideals of bioethics-respect, patient autonomy, and the requirement of informed consent-are alone adequate to secure that improvement, or whether legal actions (or the threat of litigation) or some other reforms will be required to effect such change.