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关键词： 猪肺炎支原体   猪圆环病毒2型   杆状病毒   联苗   嵌合体蛋白  

摘要： 猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine,MPS)是一种慢性呼吸道传染病,也称为猪气喘病或猪地方性肺炎(swine enzootic pneumonia,EP)。猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起MPS的主要病原体。猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是造成猪断奶后多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原体。临床上Mhp常会与PCV2等病原体协同感染,增加相关疾病的严重性和潜在的持久性,最终导致死亡率上升。目前,防控Mhp和PCV2的主要手段是疫苗免疫。但传统的商业疫苗以灭活疫苗和弱毒疫苗为主,其普遍存在免疫原性不好、免疫反应持续时间不稳定或者毒力容易回复等缺点。而多联疫苗可实现接种一针预防多种疾病的目的,尤其在疫病长期共存的情况下,联苗将成为未来防疫的主要类型。通过基因工程方法制备的疫苗能同时表达多种疾病的抗原蛋白,达到联合疫苗的使用效果,同时也解决了常规联苗抗原组分相容性的问题。但目前可同时预防Mhp和PCV2两种病原体的二联基因工程疫苗未见报道。基于此,本研究的目的是通过昆虫杆状病毒表达系统的表面展示技术,在杆状病毒囊膜上同时表达Mhp的P97R1、P46、P42嵌合体蛋白与PCV2的Cap蛋白。并将此重组杆状病毒rvAc-P97R1P46P42-Cap作为活病毒疫苗免疫动物,初步分析其在小鼠以及仔猪上的免疫效果。为了检测蛋白表达和动物免疫效果,首先利用原核表达系统制备了 rP97R1、rP46、rP42和Cap重组蛋白,将rP97R1、rP46、rP42蛋白免疫新西兰大白兔分别制备了抗血清。通过间接ELISA分别检测了三种纯化后多抗效价,均达到1:400000以上,可供后续实验使用。然后构建了一种携带有mCherry和 EGFP双荧光标签的重组杆状病毒rvAc-P97R1P46P42-mCherry-Cap-EGFP,感染Sf9细胞后进行直接荧光观察以及间接免疫荧光、免疫电镜等实验的鉴定,证实了融合有mCherry标签的P97R1P46P42和融合有EGFP标签的Cap蛋白能表达并定位于细胞膜上,同时也能展示在杆状病毒囊膜表面。在此基础上,对含有荧光标签的重组杆状病毒载体去标签改造,得到重组杆状病毒rvAc-P97R1P46P42-Cap。将此重组杆状病毒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和脾淋巴细胞增殖实验检测表明,与PBS、野生型杆状病毒rvAc-dual以及商业疫苗相比,重组杆状病毒免疫后能引发小鼠产生特异性的IgG抗体(P<0.001),脾淋巴细胞在被相应刺激原刺激后能产生显著的增殖效果(P<0.001),且免疫血清能与两种病原体的野生株发生特异性的抗原-抗体反应。由此结果可知,此重组杆状病毒免疫小鼠后能够引发小鼠产生特异性的体液免疫和细胞免疫效应。在此基础上,重组杆状病毒免疫仔猪进一步进行验证,通过对免疫猪的血清进行ELISA检测后发现其与野生型病毒相比,同样能引发猪的机体产生显著水平的特异性抗体和细胞因子IL-4和TNF-γ(P<0.001)。说明重组杆状病毒免疫仔猪后同样能够引发特异性的体液免疫和细胞免疫效应。由此证明,重组杆状病毒rvAc-P97R 1 P46P42-Cap在小鼠和仔猪中都具有较好的免疫原性。本研究通过杆状病毒表面展示系统同时表达了 Mhp三种抗原(P97R1、P46和P42)的嵌合体蛋白和PCV2的Cap蛋白,并在小鼠和仔猪免疫实验中证实其具有较好的免疫原性,为进一步研制可同时预防Mhp和PCV2的二联基因工程疫苗奠定了基础。

关键词： 高通量基因测序   中草药   DNA   一体机  

摘要： 由深圳华大智造科技有限公司、中国中医科学院中药研究所、武汉大智造科技有限公司历经3年联合开发完成的我国具有完全自主知识产权的中草药基因测序智能鉴定仪——中草药DNA条形码高通量基因测序一体机(HMBI-G30)日前在京通过专家组验收。该仪器通过片段化测序和比对拼接解决高通量测序读长较短问题;通过DNA纳米球技术和RCA技术解决扩增子嵌合污染的难题;可实现一站式序

关键词： 生物伦理学   课程思政   教学理念   教学评估   持续改进  

摘要： 根据高校生物学、生物工程与技术、医药及相关专业综合素养课程生物伦理学的课程特性,本文深入挖掘课程中蕴含的思想政治教育元素,并从提升教师课程思政教学能力、教学内容、教学理念、教学模式、教学评价和金课建设等几个方面探讨了实施"课程思政"的措施、途径和挑战性。

关键词： 胚胎干细胞   诱导分化   星形胶质细胞  

摘要： BRD2(Bromodomain Containing 2)基因在发育中的神经系统高度表达,过去的研究发现BRD2基因突变与疾病(例如特发性癫痫)的产生相关,也有相关的研究证明Brd2(小鼠表示为Brd2)完全缺失会导致小鼠胚胎致死,小鼠胚胎神经管闭合缺陷。但目前BRD2在人中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)中的作用仍缺乏相关的研究。本课题的内容是通过把人胚胎干细胞定向诱导分化为神经元,并探讨BRD2对人神经元及人星形胶质细胞生理功能的影响。目的:研究BRD2对人类神经细胞(谷氨酸能神经元、γ-氨基丁酸能神经元、星形胶质细胞)的影响。方法:首先,在人胚胎干细胞诱导成谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元的过程中用siRNA敲低BRD2的表达,然后观察对神经元生长的影响。由于BRD2与免疫相关,我们也在人星形胶质细胞中利用siRNA敲低BRD2的表达,检测其炎症因子表达的变化。结果:敲低BRD2表达后,人谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元突起生长障碍,人星型胶质细胞炎症因子表达减少。结论:BRD2在发育过程中表达缺少时,人谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元突起的生长出现障碍,这可以影响神经网络的结构和功能,可能作为中枢神经系统疾病的发生的基础。同时,人星形胶质细胞的免疫因子表达也会变化,这与中枢神经系统炎症相关,免疫紊乱可以影响神经元的功能,甚至导致神经元死亡。

关键词： 恶性胶质瘤   溶瘤腺病毒   基因工程   Ad37   TRAIL   衣壳蛋白pⅨ  

摘要： 恶性胶质瘤(Glioblastoma Multiforme,GBM)是最高发的颅内恶性肿瘤,患者平均生存期不足15个月。由于其发生位置的特殊性及复杂的生物学特性,传统的手术、化疗及放疗很难完全将其治愈。近年来,溶瘤病毒疗法作为一种恶性肿瘤治疗的新型疗法被广泛关注。据统计目前至少有14项应用溶瘤病毒治疗恶性胶质瘤的方案开展了临床研究,使用的溶瘤病毒类型包括腺病毒、单纯疱疹病毒、呼肠孤病毒、脊髓灰质炎病毒等,其中应用最多的病毒类型为腺病毒。目前开发的溶瘤腺病毒大多是由人5型腺病毒(Ad5)改造而来,又称为条件复制型Ad5(CRAd5)。Ad5感染细胞依赖于病毒的纤维蛋白(fiber)结合细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR),实现病毒在细胞上的锚定。而CAR在胶质瘤细胞中通常低水平表达,正常组织细胞的CAR表达量普遍高于胶质瘤细胞,这将导致腺病毒对胶质瘤细胞的靶向感染性不强,严重限制了溶瘤腺病毒在恶性胶质瘤治疗中的应用。另外,由于血脑屏障的存在及病毒自身感染性质的限制,包括溶瘤腺病毒在内的、进入临床研究阶段的溶瘤病毒对恶性胶质瘤治疗的给药方式均为瘤内(颅内)给药。这种给药方式病毒的扩散受限,不能有效感染距离给药位置较远的肿瘤细胞。因此,对于极易多中心发生、侵袭性强、易复发转移的恶性胶质瘤而言,瘤内给药的方式治疗效果有限。针对上述问题,本论文的主要目的为:利用基因工程手段对溶瘤腺病毒衣壳进行修饰,改变溶瘤腺病毒的感染性质,增加溶瘤病毒对恶性胶质瘤细胞的靶向感染能力,并希望构建一种更适合于静脉全身给药治疗恶性胶质瘤的溶瘤腺病毒载体。迄今为止,已经发现数十种血清型的人腺病毒,归属于7个亚群。不同亚群的腺病毒感染性质不同,如C亚群的Ad5感染依赖CAR,而来自D亚群的Ad37则通过唾液酸(SA)感染细胞。唾液酸是神经发育过程中的重要分子,在脑内大量表达,并且有研究报道唾液酸的表达量与肿瘤的恶性程度相关。因此,我们假设:若将CRAd5识别受体的纤维蛋白头节区(knob)替换为Ad37的knob(Ad37-knob,K37),构建fiber嵌合型溶瘤腺病毒,或可改变溶瘤腺病毒的感染性质,使其可以通过唾液酸作为受体感染细胞,此嵌合病毒将有潜力更高效地感染并溶解胶质瘤细胞。另外,我们还期待该策略能够增强溶瘤腺病毒穿透血脑屏障的能力。本论文第一部分工作即围绕此假设展开。经过病毒骨架质粒构建、病毒包装筛选及纯化等步骤,我们成功构建Ad37-knob替换型溶瘤腺病毒(CRAd5/K37)。通过体内外研究探明了Ad37-knob替换策略可改变溶瘤腺病毒的感染途径,并证明了此策略可显著提升溶瘤病毒对胶质瘤细胞的感染能力(提升十数倍)。而后,对CRAd5/K37血脑屏障穿透能力进行评价,结果显示:CRAd5/K37相比于衣壳未经修饰的CRAd5,能更高效地穿透体外血脑屏障模型的细胞屏障;而在颅内荷瘤小鼠及正常Balb/c小鼠中,静脉注射后CRAd5/K37未见更多的脑内富集。这一现象可能的原因有两个:(1)鼠源细胞唾液酸表达量显著低于对应人源细胞,可能由于人鼠细胞唾液酸的表达差异造成体外人细胞模型中结果与小鼠体内结果不统一。小鼠模型可能不是评价Ad37-knob替换型腺病毒组织分布的合适动物模型。若要进一步明确Ad37-knob替换策略是否能有效提升溶瘤腺病毒血脑屏障穿透能力,可能需要选择更接近于人的动物模型,如灵长类猴模型等。(2)单一knob替换策略可能不足以大幅提升溶瘤腺病毒的脑靶向能力,或许可以通过进一步修饰实现溶瘤病毒的脑靶向。本论文第二部分拟在Ad37-knob替换的基础上,通过在CRAd5/K37的knob区域尝试插入可同时靶向血脑屏障及胶质瘤的双级靶向肽,以期进一步提升溶瘤腺病毒对血脑屏障及恶性胶质瘤的双级靶向能力。通过文献调研,我们首先选择了5种在非病毒载体或其他病毒载体上可成功介导脑靶向的5种靶向肽,并参考Ad5-knob的靶向肽插入位点,设计了10种在Ad37-knob HI loop环或C末端插入靶向肽的修饰形式(K37-peptide)。但在研究中发现:所有K37-peptide蛋白在大肠杆菌中表达效率均远低于未经靶向肽修饰的K37蛋白。而后,成功构建了4种pAd5/K37-peptide腺病毒骨架质粒,但分别与穿梭质粒共转染HEK293均不能成功包装出病毒。最后,我们构建了嵌合fiber(F5/K37及10种F5/K37-peptide)真核表达质粒,转染细胞后,所有F5/K37-peptide的表达均远低于F5/K37的表达效率。至此,我们推断:Ad37-knob的HI loop环及C末端不允许双级靶向肽插入,其具体原因和机制需要未来进一步的研究。除fiber外

关键词： 副溶血性弧菌   致病因子   流行病学   DNA测序  

摘要： 目的　　确定龙湾区副溶血性弧菌在食源性疾病和水产品及其制品中的流行情况和特点。通过DNA测序分析,揭示菌株间的毒力、耐药性差异以及遗传变异和亲缘关系。　　方法　　按照GB4789.7-2013食品安全国家标准《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》分离和鉴定辖区腹泻病人与水产品及其制品中的副溶血性弧菌，并对其流行情况和特点进行研究;对选取的24株临床分离株和22株食品分离株DNA进行二代测序后对序列进行组装、基因预测、数据库比对、聚类分析、亲缘关系分析。对分离并保存下来的所有副溶血性弧菌菌株tdh和trh基因进行实时荧光定量PCR分析和药敏实验，验证测序分析结果。　　结果　　1)对2015年1月至2017年12月在龙湾区第一人民医院采集的1028份粪便或肛拭子标本进行了分析，分离出77株副溶血性弧菌，总检出率为7.49%，其中2015年为5.24%，2016年为9.20%，2017年为8.72%，平均检出率为7.72%。发病年龄段主要集中在11～60岁，其中31～40岁检出率最高。副溶血性弧菌感染率男性高于女性。检出副溶血性弧菌的月份为5月至10月，其中9月份最高。水产品及其制品总检出率为36.72%，2015年为15.38%，2016年为64.52%，2017年为30.00%，平均检出率为36.33%。每年4至5月份检出率最高，其次为8～9月份。各种水产品中均有检出副溶血性弧菌，贝类检出率最高为58.82%，虾类次之为36.84%。副溶血性弧菌在带壳的海产品和不带壳类海产品中均有检出，其中带壳类海产品中检出率高于不带壳类。　　2)食品分离株基因呈现分布不集中的特点，系统发育图基因相似度较为松散，表现为明显的遗传多样性;部分食品分离株亲缘关系相近，没有明显的时间、地区和来源差异。临床来源副溶血性弧菌存在高度同源性，有一定的地区性，提示存在流行株，有食源性疾病爆发的潜在危险。部分食品株和临床株存在高度同源性，提示副溶血性弧菌引起的食源性疾病和进食水产品及其制品有一定的关联。　　3)比较了46株副溶血性弧菌的基因组序列草图，测出3618个共有基因（46株共有），990个共有毒力相关基因，231个共有耐药性相关基因。食品分离株共检出6283个食品特有的基因，其中533个为毒力相关基因，耐药性相关基因在食品分离株中没有;临床分离株共检出1054个病人特有的基因，其中113个为毒力相关基因，3个为耐药性相关基因，食品分离株和临床分离株之间存在较大的基因组差异。所有菌株均含有T3SS1相关的毒力基因;临床分离株基本上均携带T3SS2α和T3SS2β基因，食品分离株大部分不携带T3SS2基因。携带毒力基因的临床分离株占91.67%（22/24），食品分离株有31.82%（7/22），临床分离株比食品分离株携带更多的毒力基因（P＜0.05）。　　4)测序分析发现所有菌株都含有tlh基因。临床分离株同时携带tdh和trh基因为主，占87.5%，而食品分离株中不含有tdh和trh基因的菌株为多数，占81.82%;不存在含单个tdh或trh基因的菌株。tdh和trh基因的实时多重荧光PCR检测得出，62株临床分离物(96.88%)和7株(31.82%)食品分离株tdh阳性、trh阴性;2株(3.13%)临床分离物和15株(68.18%)食品菌株均不含有tdh和trh基因;未检出trh基因阳性菌株。毒力基因主要分布在临床分离株中。46株副溶血性弧菌采用测序分析方法和实时荧光定量PCR方法检测tdh基因的检出率分别为54.35%（25/46）和65.22%（30/46），两种方法检测结果有差异。　　5)临床分离株中，副溶血性弧菌对头孢唑林耐药率最高(76.56%，49/64)，其次为氨苄西林（59.09%，13/64）和链霉素（31.82%，7/64）;对庆大霉素、亚胺培南、阿奇霉素、左氧氟沙星100%敏感;有49株（76.56%）分离株存在耐药现象，6株（9.38%）分离株有多重耐药表现，最多可耐6种抗生素。食品分离株中，对氨苄西林（59.09%，13/22）、头孢唑啉（40.91%,9/22）、链霉素（31.82%,7/22）有较高的耐药性，对阿奇霉素、美罗培南100%敏感;有17株（77.27%）分离株有耐药性。　　结论　　证明了龙湾区各类不同来源副溶血性弧菌的流行情况，从DNA角度获得本地区副溶血性弧菌的亲缘关系、毒力基因和耐药基因的差异、以及疾病相关毒力基因分布，了解了耐药现状。提高大家对副溶血性弧菌的风险评估认识。本研究的发现为龙湾区临床和食品来源的副溶血性弧菌株之间的系统发育关系提供了新的认识。

关键词： Environmental science   Bioengineering  

摘要： In recent years, cyanobacteria have gained great importance as a potential source of biofuel due to their fast generation time and ability to directly convert carbon dioxide into free fatty acids. In this study, the sterol desaturase (SD) gene was overexpressed on the model cyanobacterium Fremyella diplosiphon B481 to enhance total lipid content and fatty acids. The effort resulted in a transformant designated as B481-SD with a 64-fold increase in mRNA transcript level. Results of gravimetric analysis and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) revealed a 27.3% increase in total lipid content and a 23% increase in unsaturated fatty acid methyl esters (FAMEs) from B481-SD transesterified lipids relative to wild type (WT). In the second phase, the effect of salinity stress on B481-SD growth, total lipid content, and fatty acid composition was examined. The halotolerant strain designated as B481-SDH exhibited a 38-fold increase in mRNA transcript level when compared to the WT. In addition, proteomic analysis revealed a band near the expected size of sterol desaturase in all strains. Four spots that potentially represent SD up-regulated in B481-SD and B481-SDH were identified using 2D-PAGE. In the third phase, the effect of various concentrations (0.05-3.2 mg L-1) of two iron nanoparticles (Nanofer 25 and 25s) on growth, photosynthetic pigmentation, total lipid content, and fatty acid composition of F. diplosiphon was investigated. Results of the study revealed a significant increase (P≤0.05) in growth of F. diplosiphon treated with Nanofer 25s ranging from 0.2-1.6 mg L-1 compared to the control; however, no significant difference was observed in growth of F. diplosiphon treated with Nanofer 25 relative to the control. Photosynthetic pigment quantification revealed no significant increases in chla and carotenoid accumulations in F. diplosiphon exposed to Nanofer 25s ranging from 0.4-1.6 mg L-1. Results of gravimetric analyses and GC-MS revealed significant increase

关键词： 肝细胞癌   微血管侵犯   全外显子测序   MutSigCV   通路富集分析   液态活检   循环肿瘤DNA   捕获测序   肝细胞癌   细胞外基质通路   早期肝癌   微血管侵犯   循环肿瘤DNA   术前预测   列线图  

摘要： 第一部分 基于早期肝癌组织样品高通量测序筛选MVI相关基因研究目的:微血管侵犯(MVI)是导致肝细胞癌(HCC)肝切除术后肿瘤早期复发的重要危险因素,与病人预后密切相关。既往的研究结果表明多种信号通路可能参与了肝细胞癌的MVI进程,但关注点大多是在基因的表达水平,且难以在术前获得。本研究中我们通过高通量测序技术,检测基因组DNA中MVI相关的突变特征,评估基因组DNA变异对MVI的影响。研究方法:研究共收集东方肝胆外科医院2013年6月至2014年12月间行肝切除治疗的180例早期肝癌病人的组织样品,通过高通量测序及分析,结合MutSigCV(Mutation Significance Covariates)方法筛选 MVI 相关的驱动基因。采用 GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)和 Reactome 数据库对驱动基因进行通路富集分析。结果:通过对16例早期肝癌病人的全外显子测序(WES)数据的分析,得到133个MVI组相关的驱动基因,34个非MVI组相关的驱动基因,通路富集分析表明,细胞外基质(ECM)信号通路是MVI组的关键通路。通过特定基因测序(TGS),我们对164例病人的肿瘤组织分别进行了 57个差异基因和123个肝癌高频突变基因的检测,经过MutSigCV方法分析,我们进一步得到24个有区分MVI潜力的基因,其中,ARID2、IGF2R、DENND5A、PIK3CA、IL6ST 和 ABCG2 可能是影响 MVI 发生机制的关键基因。结论:通过对早期肝癌的高通量测序数据,我们发现和早期肝癌MVI发生进程相关的突变基因和相关信号通路,为后续利用液态活检技术检测MVI突变特征提供了理论基础。细胞外基质信号通路是MVI发生的关键通路,提示肿瘤微环境改变可能影响MVI发生和肝癌早期转移。第二部分 基于液态活检测序检测早期肝癌患者外周血的MVI相关突变特征研究目的:MVI的诊断主要凭借术后对切除标本的组织病理学检查,虽然术前准确预测MVI对外科临床决策有重要的意义,但除了影像学、血清学检查指标,缺乏可以术前获得的MVI相关特征。本研究中,我们通过液态活检技术,提取外周血游离DNA(cfDNA)并进行高深度的测序,进而检测分析与MVI相关的突变特征。研究方法:本部分的研究共收集2016年6月至2017年6月间东方肝胆外科医院行肝切除治疗的214例患者的外周血样品,提取cfDNA和白细胞。cfDNA进行环化和滚环扩增后,再进行文库构建和测序,白细胞直接行常规文库构建和测序。进行cfDNA捕获的DNA探针包含42个基因,主要来源于“第一部分”研究的ECM信号通路基因和24个MVI相关驱动基因。通过比对白细胞的测序结果,利用VarScanv2进行体细胞单核苷酸变异(SNV)和插入缺失变异(InDel)的检测。研究结果:214例早期肝癌病人的外周血样品,其中200例通过了质量监测,进行后续测序分析。所有受检样品中,cfDNA中位浓度为6.09ng/mL,计算得到来源于肿瘤的循环肿瘤DNA(ctDNA)中位浓度为62.54ng/L,每位病人平均测序深度达8000X以上。共检测得到31774个遗传变异和702个体细胞突变,病人突变检出率达78.8%,平均每个病人检出4个体细胞突变。较显著的突变基因包括肿瘤抑制基因TP53、AXIN1和RB1,WNT通路癌基因CTNNB1,染色质重塑基因ARID1A和ARID2,细胞抗氧化防御基因NFE2L2等,细胞外基质信号通路中,FBN3、COL6A3、VCAN亦发现有较高的突变检出率。结论:通过液态活检结合高通量测序技术,我们得以在术前获取早期肝癌患者的MVI相关突变特征。我们设计的MVI-Selector探针组合,对早期肝癌患者有较高的突变检出率,有潜力帮助肝癌患者进行基因突变的术前筛查。第三部分 基于循环肿瘤DNA及高通量测序技术建立早期肝癌术前MVI的预测模型研究目的:术前MVI预测在肝癌患者手术治疗中具有潜在的临床意义,然而,目前尚无成熟的可应用于临床的方法,缺乏具有潜在推广应用前景的相关技术。此部分研究,在之前液态活检和高通量测序数据的基础上,检测外周血循环肿瘤DNA突变特征,结合临床相关变量,建立肝癌MVI预测模型。研究方法:收集2016年6月至12月的125例早期肝癌病人的外周血样品,进行cfDNA检测和测序,结合临床资料建立MVI术前预测模型。2017年3月至6月,前瞻性收集75例病人的样品和资料,作为验证组验证模型效能。液态活检检测及测序方法同“第二部分”。本研究的终点事件是病理诊断的MVI有无,通过单因素Logistic回归和前向性逐步回归进行变量筛选,使用Logistic回归和支持向量机(

关键词： 肺肿瘤   脑膜转移   临床病理   表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂   预后因素   鞘内注射化疗   甲氨蝶呤   脑膜转移   肺肿瘤   脑脊液   细胞游离DNA   DNA测序   脑膜转移   非小细胞肺癌   肺肿瘤   腺鳞癌   临床病理   预后  

摘要： 该博士学位论文由两部分工作组成,第一部分分为三章。第一章:肺癌脑膜转移的临床病理特点和预后影响因素分析背景与目的:脑膜转移(LM)是肺癌患者的严重并发症,缺乏有效治疗方法。本研究旨在探讨肺癌LM的临床病理特征和预后影响因素。方法:回顾性分析2014年1月至2018年12月确诊的肺癌LM 155例,记录临床资料、影像检查结果以及治疗方案,随访患者生存情况。结果:全组中位生存时间12个月。136例行基因检测,其中表皮生长因子受体(EGFR)21 外显子 L858R 突变 65 例(47.8%),EGFR 19 缺失 36 例(26.5%),野生型15例(11.0%)。女性、无吸烟史、病理类型为腺癌、以LM首诊、接受表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗及全脑放疗患者生存时间明显延长(均P<0.05)。Cox多因素分析显示以LM起病(P=0.019)、EGFR-TKIs靶向治疗(P=0.003)及脑放疗(P=0.004)是肺癌LM预后良好的独立影响因素。结论:肺癌LM总体预后差,但以LM首诊者预后相对较好,EGFR-TKIs及全脑放疗有助于延长患者生存期。第二章:鞘内注射甲氨蝶呤治疗肺癌脑膜转移的疗效分析目的:探讨鞘内注射甲氨蝶呤(MTX)治疗肺癌脑膜转移(LM)患者的疗效、安全性和预后影响因素。方法:回顾性分析2014年1月至2018年12月108例接受MTX鞘内注射化疗的肺癌LM患者的临床病理资料,总结其治疗方法、疗效和不良反应。结果:全组患者中位生存时间14个月。鞘内注射化疗后56例(51.9%)神经系统症状好转。相较于鞘内注射化疗前脑脊液(CSF)生化水平,CSF蛋白显著下降(P=0.011),CSF葡萄糖显著升高(P=0.003),但CSF氯变化无统计学差异(P=0.725)。Cox多因素分析显示,KPS评分、是否伴随脑实质转移、EGFR-TKIs治疗是肺癌LM患者预后的独立影响因素(均P<0.05)。结论:鞘内注射MTX化疗可改善患者临床症状。KPS≥60分、无脑实质转移的肺癌LM患者生存时间较长,联合应用EGFR-TKIs治疗可改善接受MTX鞘注化疗的肺癌LM患者预后。第三章:脑脊液游离DNA基因检测在非小细胞肺癌脑膜转移中的应用目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)脑膜转移(LM)患者脑脊液细胞游离DNA(CSF cfDNA),探索肿瘤的全基因组和染色体状态信息。方法:入组2016年10月至2019年2月间的42例肺腺癌伴LM和4例脑实质转移(BPM),在鞘内注射化疗前采集患者10 mlCSF和10ml血液标本。通过二代测序方法(NGS)检测血浆和CSF中cfDNA的突变基因。对3例NSCLC-LM CSF cfDNA进行全基因组测序(WGS),筛选染色体不稳定性(CIN)信息。结果:CSF cfDNA检出原发肿瘤驱动基因突变明显高于血浆cfDNA(95.5%vs 54.5%)。CSF cfDNA中测得237个特有突变,而血浆cfDNA特有突变仅48个。基因拷贝数变异(CNV)全部为CSF cfDNA特有突变,血液cfDNA中未检出CNV。3例NSCLC-LM CSF cfDNA均发生8号染色体短臂缺失或5号染色体短臂扩增。结论:CSF cfDNA较血浆cfDNA对LM的基因组变异检测更敏感,可以动态监测病情并指导用药。全基因组倍增(WGD)和染色体不稳定性(CIN)是否可以预测患者总生存期或复发风险尚需进一步探索。背景与目的:肺腺鱗癌是肺癌中的一种少见类型,混合有腺癌和鱗癌两种恶性组织成分,侵袭性髙、预后差。本研究旨在探讨腺鳞癌的临床病理特点和预后影响因素。方法:对72例肺腺鳞癌患者的临床病理资料进行回顾性分析,探讨影响患者预后的因素。结果:全组患者中位生存期位34.7个月,5年生存率为14.9%,肿瘤长径、转移(metastasis,M)分期、肿瘤-淋巴结-转移(tumor-node-metastasis,TNM)病理分期、基因突变、手术对患者预后的影响有统计学意义。结论:肺腺鳞癌恶性程度高、预后差,应采取手术为主的综合治疗,小分子酪氨酸激酶抑制剂治疗有助于延长患者生存期。

关键词： 材料基因工程   新材料领域   高层论坛   中国材料研究学会  

摘要： 今天(11月23日)上午,由中国工程院、云南省人民政府、中国材料研究学会主办的"中国工程院国际工程科技发展战略高端论坛—第三届材料基因工程高层论坛"在昆明开幕。论坛为期3天,将通过主题演讲、学术报告、讨论交流等方式,分享新材料领域最前沿的研究成果,探讨材料基因工程新理论、新技术变革,新材料研发和产业发展模式的新趋势。