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关键词： 猪瘟E2基因工程亚单位疫苗   育肥仔猪   免疫效果   断奶仔猪成活率   调查分析  

摘要： 为探究猪瘟E2基因工程亚单位疫苗相比于传统猪瘟C株弱毒疫苗(脾淋源)在免疫与生产上的优势,本文以汉中某一地方品种种猪场和代养场为调查对象,选择一批繁育母猪和育肥仔猪分别免疫猪瘟E2基因工程亚单位疫苗和猪瘟活苗,对比结果发现,母猪免疫猪瘟E2亚单位疫苗后哺乳仔猪断奶成活率平均提高了16.3%;且接种的两种猪瘟疫苗对育肥仔猪的免疫效果差异极显著(P<0.01),其中E2亚单位疫苗相比于猪瘟活疫苗能够明显提高育肥仔猪抗体阻断率和降低离散度,有助于育肥仔猪的健康生长,这为规模化猪场在选择猪瘟疫苗时提供重要参考依据。

关键词： 二代测序   循环肿瘤DNA   分子监测   血液肿瘤  

摘要： 传统淋巴瘤的疾病诊断和复发监测依赖于病理活组织检查和影像学检查,但各有其局限性,难以满足淋巴瘤患者个体化管理的需求。循环肿瘤DNA(ctDNA)是来源于肿瘤细胞的片段DNA。基于ctDNA的液体活组织检查是一种创新性技术,具有灵敏度高、特异度强、创伤性小、实时性和可重复性等优点,在淋巴瘤患者的诊断、基因分型、预后判断、疗效评估、指导治疗、复发监测和耐药机制探索等方面具有应用潜力。现就基于二代测序技术动态监测ctDNA在淋巴瘤患者中的研究进展进行综述。

关键词： 基因工程   课程思政   立德树人   教学效果  

摘要： 课程思政是推进和落实“立德树人”根本任务的必要手段。基因工程课程是生物类专业的核心课程,如何将课程思政元素有机融入基因工程课程,是该课程教学改革的重要目标之一,也是提高课程教学效果和质量的重要手段。本次教学改革探索了如何将课程思政元素有机融入基因工程课程内容,并进行了课程教学内容的一系列设计,包括设计课程目标、精心设计课程教学大纲、精心设计课程思政元素等,实现了基因工程教学内容与课程思政元素的有机融合,有力提高了基因工程的课堂教学效果和质量,具体体现在学生在课堂上的专注力增强、完成作业的积极性提高、学生各项成绩都显著提高、学生评教效果显著提升以及学生的综合素质提升等,解决了“为谁培养人”的问题。

关键词： 人类胚胎   干细胞研究   法律规制  

摘要： 人类胚胎干细胞具有很高的研究和临床应用价值,而目前我国关于人类胚胎干细胞研究的法规还在探索阶段,故尚存在临床研究备案制不足以防范伦理风险、对科研机构及其工作人员法律责任的认定不够细化、有关捐赠者与受赠者的知情同意规定不完善等问题;由剖析英、美、德等对人类胚胎干细胞研究的法律规范,对我国人体胚胎干细胞研究之科学立法原则、机构准入、科研机构及其工作人员法律责任和相关人员知情同意书等提出有针对性的完善性建议。

关键词： Cry1Ab蛋白   发育毒性   心肌细胞   细胞分化   胚胎干细胞  

摘要： 目的:通过胚胎干细胞发育毒性评价模型研究Cry1Ab蛋白对于细胞增殖和分化能力的影响,以评估其发育毒性。方法:设置Cry1Ab蛋白7个剂量组(31.25、62.50、125.00、250.00、320.00、1 000.00、2 000.00μg/L),以5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)为阳性对照,以磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline, PBS)为溶剂对照,分别处理小鼠胚胎干细胞D3(embryonic stem cell line D3,ES-D3)和小鼠成纤维细胞3T3。通过CCK-8法检测细胞活性,计算受试物对于不同细胞的增殖半抑制浓度(50%inhibition concentration of growth and viability, IC_(50))。设置Cry1Ab蛋白5个剂量组(125.00、250.00、320.00、1 000.00、2 000.00μg/L),设置溶剂对照(PBS),同时以5-FU为受试物进行模型验证,分别处理细胞后,通过拟胚胎体(embryonic bodies, EBs)培养法诱导ES-D3分化出心肌细胞;镜下观察EBs生长情况并测量其第3天和第5天的直径,观察并记录同批次EBs分化出搏动心肌细胞的比例,计算受试物的心肌分化半抑制浓度(50%inhibition concentration of differentiation, ID50),根据发育毒性判别函数对受试物的胚胎发育毒性进行分类;收集培养终点的EBs样本,进行实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative po-lymerase chain reaction, qPCR),检测心肌分化相关标志物(Oct3/4、GATA-4、Nkx2.5和β-MHC)的mRNA表达情况。结果:5-FU的IC_(50,3T3)为46.37μg/L,IC_(50,ES)为32.67μg/L,ID_(50,ES)为21.28μg/L,根据判别函数结果将5-FU分类为强胚胎毒性物质。不同浓度的Cry1Ab蛋白处理组的3T3细胞和ES-D3细胞活性与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,Cry1Ab蛋白处理组分化第3天和第5天的EBs直径差异无统计学意义(P>0.05),EBs形态也未见明显差异;不同浓度Cry1Ab蛋白处理组的心肌分化率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。5-FU使β-MHC、Nkx2.5和GATA-4的mRNA表达水平降低(P<0.05),且具有剂量依赖趋势(P<0.05),而与细胞多能性相关的标志物Oct3/4 mRNA表达水平则呈升高趋势(P<0.05);Cry1Ab蛋白处理组的成熟心肌标志物β-MHC、心肌早期分化标志物Nkx2.5和GATA-4、多能性相关标志物Oct3/4的mRNA表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验模型中未观察到31.25~2 000.00μg/L的Cry1Ab蛋白具有发育毒性。

关键词： Cry1Ab蛋白   成骨分化   发育毒性   胚胎干细胞  

摘要： 目的通过小鼠胚胎干细胞骨分化实验研究Cry1Ab蛋白对胚胎干细胞成骨分化过程的影响,以评估Cry1Ab蛋白的发育毒性。方法以Cry1Ab蛋白为受试物,设置5个剂量(125,250,320,1000,2000 ng/ml)染毒小鼠胚胎干细胞形成的拟胚胎体(embryonic body,EB),设置溶剂对照和阳性对照,同时向培养基中添加β-甘油磷酸盐(10 mmol/L)、抗坏血酸(50μg/ml)和维生素D3(500μmol/L)诱导EB向骨细胞分化,通过茜素红S染色和吸光度检测确定骨细胞钙化结节生成情况;收集EB制备细胞裂解液,通过BCA法测量细胞总蛋白浓度,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测试剂盒检测细胞裂解液中ALP活性;收集EB样本提取总RNA,通过qPCR检测骨细胞分化相关标志物Runx2、SPARC和I型胶原的基因表达情况。结果与对照组相比,不同浓度Cry1Ab蛋白处理组的EB细胞团大小、钙化结节数量无统计学差异(P>0.05);Cry1Ab蛋白各浓度组的细胞总蛋白浓度和ALP活性与对照组相比无统计学差异(P>0.05);Cry1Ab蛋白各浓度组的Runx2、SPARC和I型胶原基因表达水平与对照组相比均无统计学差异(P>0.05)。结论本次试验中,未观察到Cry1Ab蛋白对小鼠胚胎干细胞成骨分化过程产生影响,125~2000 ng/ml的Cry1Ab蛋白不具有发育毒性。

关键词： 人类基因组计划   测序技术   端粒到端粒(T2T)基因组拼接   参考基因组   精准医学   医学基因组大数据   基因组诊断和治疗  

摘要： DNA测序技术的飞速发展使人类基因组学研究迈进“端粒到端粒(T2T)时代”。这个时代的核心标志是实现每一个人类染色体分子——从端粒到端粒——高质量、高完整度的连续线性组装,成为精准医学质量控制的金标准,从而准确和稳定地识别个体变异信息。越来越多个体基因组的完整组装为我们揭示远高于预期的人类基因组差异,也为各人群采用自己的近缘参考基因组进行变异分析提供了关键的理论依据。近缘参考基因组可以更准确地识别和定位个体的基因变异,而准确的变异数据是精准医学中变异与表型关联研究的关键数据基础。这种以人群为单位的基因组分析和研究新范式,必将显著影响国际和国内未来精准医学发展的格局。

关键词： 鲎C因子   基因工程   鲎试剂   药典  

摘要： 鲎试剂广泛用于检测医药产品中的细菌内毒素,但由于鲎资源稀缺,制约了鲎试剂的生产。重组鲎C因子(rFC)作为鲎试剂的替代品,通过基因工程表达获得,可特异性检测内毒素,不依赖动物资源。综述了rFC的检测机制、发展历程及药典认可情况。研究表明,rFC方法具有特异性强、不依赖动物资源等优点,已渐被药典认可,是解决鲎试剂供应短缺的可靠方案,具有重要的应用前景。

关键词： 纤维素酶   基因工程   启动子强化   异源表达   CRISPR技术  

摘要： 纤维素是自然界中一种可再生能源物质,纤维素酶将纤维素降解为简单可用的小分子单糖或寡糖且转化过程绿色、低碳,被认为是纤维素资源化利用的可持续方法.实际工程应用中纤维素酶存在成本高、活性低等问题,因此,越来越多的研究致力于探索纤维素酶产生的机制、促进和优化纤维素酶的生产.对提高纤维素酶活性和促进纤维素酶生产的一些最新基因工程技术及研究进展进行综述.借助启动子强化与转录因子调控、密码子优化、CRISPR基因编辑技术等分子生物学手段改善或提高纤维素酶活性,通过将多种纤维素酶或是与其他酶建立共表达系统,将纤维素酶进行异源表达或过表达进行酶活性强化,拓宽纤维素酶的应用范围.现阶段,在优化纤维素酶的生产与活性研究方面已取得较大成就,但仍存在纤维素酶优化效率不高、难以工业化生产等不足.未来关于纤维素酶的研究在致力于开发优化纤维素酶基因的新技术的同时,可重点关注纤维素酶的协同作用与双/多功能纤维素酶系统的潜在优势,并借助荧光标记系统简化纤维素酶的测定,从而为实现纤维素酶的高效资源化利用提供方向指引.(图1表2参53)

关键词： 基因工程   农业生产   遗传改良   特定抗性  

摘要： 该文介绍了基因工程在动植物育种中以及农作物遗传改良中的应用成果,总结了转基因技术在培育抗虫害、抗除草剂以及具有特定抗性的动物品种方面的成功案例;论述了基因工程技术助力良种选育以及提高作物光合作用效率、固氮能力及优化营养价值中的应用,为基因工程相关研究人员提供参考。