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关键词： 茶氨酸   代谢工程   γ-谷氨酰甲胺合成酶   大肠杆菌   发酵优化  

摘要： L-茶氨酸是一种天然的、茶叶中特有的非蛋白质氨基酸。它赋予茶叶鲜美的味道和独特的风味,其在茶叶中的含量会在一定程度上影响茶的质量和价格。茶氨酸已被证明有许多有益的生理效果,如使人放松身心、缓解压力等,同时在预防心脑血管疾病等医疗保健方面也有显著的功效。除此之外,由于其特有的风味及保健功效,在食品工业上常被用作食品添加剂。近年来,随着茶氨酸市场需求量的逐渐增加,需要有效提高茶氨酸的产量和糖酸转化率,降低生产成本。一些细菌来源的γ-谷氨酰甲胺合成酶可以以L-谷氨酸和乙胺为底物,在有ATP供应的条件下通过生物催化合成茶氨酸,但反应成本较高。微生物发酵作为一种简单、高效、绿色、低成本的合成技术,目前已经应用于许多大宗氨基酸的工业化生产。因此为了减少反应成本,提高茶氨酸生产效率,本研究开发了一种利用重组大肠杆菌直接发酵生产茶氨酸的方法。通过系统代谢工程改造,构建了一株能够利用葡萄糖和乙胺发酵生产茶氨酸的大肠杆菌基因工程菌株。首先,将来源于Paracoccus aminovorans的γ-谷氨酰甲酰胺合成酶编码基因gmas整合至大肠杆菌基因组中,并构建了木糖启动子控制的T7RNA聚合酶-T7启动子系统控制该基因的表达,使得茶氨酸得到了初步积累;其次,增加TCA循环中柠檬酸合酶编码基因gltA的拷贝数,增强了草酰乙酸到α-酮戊二酸的代谢通量,引入来源于Corynebacterium glutamicum(ATCC13032)的谷氨酸脱氢酶编码基因cgl2079,增加了 α-酮戊二酸到前体物L-谷氨酸的代谢通量;随后,敲除了琥珀酰CoA合成酶编码基因sucCD,阻断了 α-酮戊二酸至琥珀酸的代谢,引入来源于***的丙酮酸羧化酶编码基因cgl0689,构建丙酮酸至草酰乙酸的代谢途径,回补了草酰乙酸,大幅度提升了茶氨酸产量;最后,引入来源于Mannheimia succiniciproducens磷酸烯醇式丙酮酸激酶基因pckA,增强了茶氨酸合成过程中ATP的供给。通过上述策略构建的工程菌TH7,摇瓶发酵茶氨酸产量达到38.41 g/L。使用单因素实验,在5L发酵罐中确定了乙胺的最优流加条件:发酵开始6h后,以30 mL/h的流速流加200 g/L的乙胺溶液,流加20 h后结束发酵。在上述发酵条件下,工程菌TH7经过26 h发酵可以产生70.6 g/L茶氨酸,糖酸转化率达到了 41.5%。同目前已报道的茶氨酸生产工艺相比,该工程菌在产量和转化率上具有显著优势,为茶氨酸工业化生产打下基础。

关键词： PICH   复制压力   基因组稳定性   重编程   诱导多能干细胞   胚胎干细胞   DNA损伤修复   胚胎成纤维细胞  

摘要： 胚胎干细胞和诱导多能干细胞中由于细胞快速增值和自我更新导致细胞复制压力增加,引起DNA损伤,进而对多能细胞基因组稳定造成威胁。体细胞中DNA损伤积累会引起基因功能的缺失或增加,最终可能导致疾病的发生。然而干细胞DNA损伤会遗传给分化的各种类型的细胞和器官。诱导多能干细胞在形态,功能和基因表达等方面与胚胎干细胞类似,给临床上个体化治疗带来希望,但是诱导多能干细胞基因组稳定性和致癌性使iPSCs在临床上的应用上存在安全隐患。有研究表明体细胞重编程过程中四因子的表达和细胞诱导转化成多能干细胞过程中细胞复制压力增加,导致DNA损伤积累,从而影响重编程效率和诱导多能干细胞的基因组稳定。所以提高重编程效率和维持诱导多能干细胞的基因组稳定性对多能干细胞在临床上的应用有着重要的研究意义。基因组稳定性维持对于准确传播遗传信息至关重要。它依赖于染色体的成功复制,以及随后染色体在有丝分裂期间的均匀分离。Plk1-interacting checkpoint "helicase"(PICH)是一种DNA移位酶,在细胞有丝分裂其有着特别的功能[1]。是有丝分裂后期超细纤维桥(UFBs)上的生物标志物。UFBs对细胞基因组维持非常重要,UFBs解离失败会影响有丝分裂后期细胞染色体准确的分离,从而影响细胞基因组的稳定。已有研究表明PICH能够促进有丝分裂其染色体的正确分离[2],在维持细胞基因组稳定上有着重要的作用。PICH在维持细胞基因组稳定中有着重要作用,然而PICH在干细胞和诱导多能干细胞中的的作用尚不明确,所以本课题在体细胞重编程诱导多能干细胞过程中胚胎干细胞中探究PICH的功能及相关的机制。首先我们检测胚胎干细胞,诱导多能干细和胚胎成纤维细胞中PICH的表达水平,发现干细胞中PICH表达显著增加。我们从PICH缺失的胎鼠中提取胚胎成纤维细胞细胞(MEFs)进行重编程实验,发现PICH缺失的MEFs细胞的重编程效率几乎为零。通过转录组测序我们发现PICH缺失导致细胞周期和DNA复制等通路相关基因表达受到抑制,同时免疫荧光实验发现PICH缺失的细胞中DNA损伤蛋白γH2AX阳性细胞,微核和染色体桥数目均显著高于野生型细胞。通过Co-IP和质谱联合分析我们发现干细胞中PICH与Rif1蛋白存在相互作用,已有研究表明Rif1对缓解细胞复制压力维持基因组稳定也有着重要的作用,我们研究结果发现干细胞中敲除Rif1时,严重影响干细胞基因组的稳定,我们还发现Rif1缺失也能导致重编程效率降低。综上所述,本课题首次发现了PICH蛋白在重编程过程中的重要性,并深入探究了PICH调控重编程效率的机制,揭示了PICH通过与Rif1相互作用缓解重编程过程中复制压力,维持重编程细胞基因组稳定,从而影响重编程效率。

摘要： 泰兴市位于江苏省中部,是一片银杏飘香的地方,更是一片红色的故土。著名的黄桥决战在这里打响,陈毅、粟裕等老一辈革命家长期在这里生活和战斗,以"三个不相信精神"为代表的革命精神激励着一代又一代泰兴青年继往开来、奋发图强。为激励引导广大青少年坚定永远听党话、跟党走,激发当好社会主义合格建设者和可靠接班人的使命担当。共青团江苏省泰兴市委员会紧扣"传承红色

关键词： 间充质干细胞   转化生长因子-β1   基因工程   器官移植   免疫耐受  

摘要： [目的]器官移植术后需要使用广谱免疫抑制剂治疗器官移植术后免疫排斥,寻求一种可替代或减少免疫抑制剂使用或增加免疫靶向性的方法。课题结合转化生长因子-β1（Transforming Growth Factor β1,TGF-β1）的免疫抑制、免疫调节作用与间充质干细胞的低免疫原性、免疫抑制性的特性,构建比格犬TGF-β1基因过表达慢病毒载体,转染比格犬骨髓间充质干细胞（Canine mesenchymal stem cells,cMSCs）并进行鉴定。[方法]1、采用OligoMix（?）寡核苷酸合成法得到全基因,PCR进行比格犬TGF-β1目的基因纯化,琼脂糖电泳回收并鉴定目的基因片段。以获取的目的基因（犬）TGF-β 1 与慢病毒载体利用 ClonExpress（?）Entry One Step Cloning Kit 将两者连接构建携带目的基因的LV5载体。培养制备以大肠杆菌为媒介的感受态细胞,以氯化钙法完成菌悬液转染感受态细胞。抽提质粒行双酶切鉴定,并将阳性克隆与目的基因（犬）TGF-β 1进行测序比对,用于后续实验。2、首先选用购进的293T细胞进行细胞复苏、计数、传代、冻存。采用以经过传代处理的293T细胞制备包装培养皿,以贴壁细胞达到80%-90%为宜。将无血清DMEM+辅助质粒V9120+慢病毒包装质粒按比例混匀加入RNA i-Mat e试剂中室温融合后接种于包装培养皿开始培养。将培养后细胞悬液离心收集及浓缩病毒液,进行病毒滴度检测。3、比格犬全麻下行骨髓穿刺术获取骨髓组织,密度梯度离心与贴壁培养法相互配合分离、培养细胞。当贴壁率大于90%时开始传代培养。第三代传代细胞根据惯用MSC判定标准予培养、鉴定,冻存备用。4、配置细胞感染液与含犬TGF-β1的病毒液和cMSCs,共同混合在24孔板中培养,在24小时、48小时、144小时进行显微镜和荧光显微镜观察、拍照,并进行嘌吟霉素（Puromycin,PM）抗性病毒筛选,确定最佳感染率。以筛选得出的最佳抗性病毒维持培养cMSCs-TGF-β1细胞,并采用定量即时聚合酶链锁反应（Quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR）检测及蛋白质印迹法（Western Blot,WB）检测TGF-β1-LV5慢病毒载体转染cMSCs后目的基因TGF-β1的转录和表达情况。[结果]成功提取TGF-β 1目的基因通过重组克隆与LV5载体相连,在转染感受态细胞后收取质粒,经过琼脂糖检测及与目的基因测序后证实成功获得表达目的基因的阳性质粒,并成功构建TGF-β1-LV5慢病毒载体病毒悬液。MSC经过细胞形态学观察,24 h后出现单个的贴壁细胞,量少无聚集;48小时后可见有大小不一、形态不规则的贴壁细胞,逐渐有聚集生长现象;5-7天,细胞生长较前逐渐加快,从初现长条梭形细胞逐渐融合成漩涡状排列,达到传代条件。犬骨髓间充质干细胞经过抗体检测显示:CD90、CD105（+）,CD45（-）,并可成功诱导成脂及成骨组织。TGF-β1-LV5慢病毒载体转染cMSCs细胞,在48小时及144小时观察到荧光及蛋白表达;Puromycin抗性病毒筛选:4ug/ml为最佳Puromycin筛选浓度,培养第9天荧光显微镜镜下可得到80%以上感染率。定量即时聚合酶链锁反应（Quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR）、Western blot检测结果显示TGF-β1高表达。[结论]TGF-β 1-LV5慢病毒载体构建成功;比格犬提取骨髓组织经过细胞分离、培养鉴定为犬骨髓间充质干细胞,且浓度达预期;转染比格犬骨髓间充质干细胞后,实验平均转染率在80%以上,获得高表达TGF-β 1细胞株。[展望]通过提取生物体骨髓组织分离、培养、鉴定获得犬骨髓间充质干细胞,在经TGF-β 1慢病毒转染,成功获得cMSCs-TGF-β1细胞,为后续T细胞共培养检测Tregs细胞研究及比格犬胰肾联合移植诱导自体免疫耐受提供前期实验基础。

关键词： 胚胎干细胞   角膜上皮干细胞   角膜缘上皮干细胞缺乏  

摘要： 目的将人胚胎干细胞(hESCs)诱导分化为角膜上皮祖细胞,构建组织工程角膜上皮片(AM+ES-CE上皮片),用于治疗角膜上皮干细胞缺乏症。方法将hESCs接种于低吸附培养板中,使用NP培养基分化培养8天后获得中间体细胞球,然后将细胞球消化成单个细胞,接种于培养皿中,使用上皮分化培养基继续分化7天,随后接种于去上皮羊膜表面,继续使用上皮分化培养基培养,构建出组织工程上皮片。每个阶段进行细胞分化状态检测及细胞标志物检测。将构建的上皮片移植至兔角膜上皮干细胞缺乏模型中,观察眼表面情况及细胞分化状态。结果人胚胎干细胞在NP培养基中悬浮培养8天后可分化成神经球样中间体,将神经球样中间体消化成单个细胞于培养皿中分化7天后接种于去上皮羊膜或培养皿中继续分化培养7天,PCR及免疫荧光染色显示P63、Pax6、Pan-CK和K14呈阳性表达。H&E染色显示接种于羊膜表面可以成功构建复层上皮样组织,单细胞测序结果证明诱导分化过程中每个阶段的细胞都具有其独特的生物学特性。通过对胚胎干细胞标志物POU5F1,角膜缘干细胞标志物ABCG2、LGR5、P63、K14和K15,上皮细胞标志物K7与K19,角膜上皮细胞标志物K3与K12,结膜上皮细胞标志物K13,以及皮肤上皮标志物K1的检测发现,诱导分化的细胞属于角膜缘上皮祖细胞。之后将构建的上皮片移植至兔角膜上皮干细胞缺乏模型中,未接种细胞的羊膜作为对照(AM对照组),8周后,实验组角膜透明度与正常组类似,而对照组的角膜被新生血管膜覆盖,透明度差。H&E染色及免疫荧光染色显示,实验组的角膜缘形态及中央角膜上皮形态与正常角膜类似,且表达角膜上皮细胞标志物K3/K12。而对照组角膜缘与中央角膜都只有1-2层上皮细胞。人核特异性抗体染色显示移植8周后兔角膜表面仍有大量hESCs来源的细胞存在。结论人胚胎干细胞在特点的培养分化条件下,在较短的时间内可获得Pax6阳性表达的角膜上皮祖细胞。构建的组织工程角膜上皮片(AM+ES-CE上皮片),为治疗角膜上皮干细胞缺乏提供了新的细胞来源。

关键词： 传染性疾病   微生物   结核病   基因工程   细菌性肺炎   病毒学   传染病   全世界  

摘要： 为什么新病毒会不断出现?一旦出现新病毒,人类为何难以攻克?下文试图结合《逼近的瘟疫》这本书中的记述去回应这一问题。书中提及的病毒演进,当然并非此次的新型冠状病毒,但我们却发现其过程与暴发后人类社会的反应,与以往无甚区别。我舅舅伯纳德1932年进入芝加哥大学学习医学的时候,他已经目睹过1918—1919年的大流感。他数着巴尔的摩街上缓缓走过的灵车,那时他才7岁。此前3年,他的父亲差一点儿死于伤寒热,是在巴尔的摩市中心得的病。后来,他的祖父死于结核病。

关键词： 胚胎干细胞   体细胞   细胞分化   SS18基因   相分离能力  

摘要： 胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells，ESCs)是一类衍生于早期囊胚内细胞团的多能干细胞。它能够在体外培养，具备无限增殖和向三个胚层谱系细胞分化的能力，因此可作为研究早期胚胎发育的调控机制和细胞命运决定的分子机理的体外模型。　　实验室前期利用CRISPR/Cas9介导的全基因组筛选和染色质免疫共沉淀技术，在JUN诱导的小鼠胚胎干细胞向体细胞转变(Pluripotent to Somatic Transition，PST)的过程中发现，哺乳动物SWI/SNF家族染色质重塑复合物BAF(BRG1-associated Factor)的组成亚基--SS18，其在染色质上的定位从OCT4/SOX2/NANOG等多能性因子结合的位点转移至AP-1家族等体细胞相关转录因子结合的位点，而且SS18功能的缺失能够显著延缓JUN诱导的小鼠胚胎干细胞向体细胞的转变。　　为揭示其背后的分子机制，我们后续凭借蛋白序列分析和一系列突变体实验发现，SS18含有大片段有利于液-液相分离的内在无序区域(Intrinsically Disordered Region，IDR)，而该区域富含的酪氨酸残基是SS18在小鼠胚胎干细胞中形成冷凝状液滴和发挥作用的关键。随后免疫沉淀-质谱联用的蛋白互作分析结果显示，SS18的酪氨酸残基突变体失去了与BAF复合物其他亚基相互作用的能力，这表明SS18的相分离能力可能是通过BAF复合物来调控JUN诱导的PST的。此外，我们还通过基因敲降和抑制剂实验发现，在JUN诱导的PST过程中起主要调节作用的是含有SS18的经典BAF复合物，而非PBAF(Polybromo-associated BAF)复合物，而且H3K27ac在该过程中对SS18-BAF起招募作用。　　综上所述，本研究发现细胞命运的快速决定需要与相分离相关的或伴随着相分离的染色质重塑复合物的重定位，初步阐述了小鼠胚胎干细胞向体细胞转变的分子机制，为进一步探究早期胚胎发育和细胞命运决定的调控机制奠定基础。

关键词： 敏感性核小体   SEM算法   转录因子   染色质状态  

摘要： 背景:核小体是染色质的基本组装单位。核小体一般由约147bp DNA缠绕组蛋白八聚体形成。核小体通过不同的机制在许多生物过程中发挥了重要作用,组蛋白变体、组蛋白修饰已经被证明是表观遗传标记中的重要部分。因此,核小体的组成和分布是研究转录调控的重要部分。由于MNase偏好消化连接DNA,MNase-seq常被用于研究核小体的位置信息,该方法通过使用酶消化未被核小体保护的DNA,从而根据剩余的核小体DNA推断核小体的位置。该方法发现在基因的启动子区域,核小体的含量明显少于编码区,因此该区域被称为“核小体缺失区域”。但是近年来,一些新的用于核小体研究的方法,包括Low MNase-ChIP-seq,MPE-seq和化学交联法,在核小体缺失区域中发现一种对于MNase十分敏感的核小体,这种核小体被称为“敏感性核小体”。由于对敏感性核小体的认识甚少,我们无法通过染色质免疫共沉淀等方法来特异地在实验中富集敏感性核小体。现有的针对核小体的生物信息方法大多仅考虑典型核小体的情况,不能够分辨不同类别的核小体,因此不适用于敏感性核小体的研究。目的:为了更好地研究敏感性核小体的组成及其生物学意义,我们希望能够建立一种分辨不同类别核小体的生物信息研究方法,并期望能够借此探究敏感性核小体产生的原因和其生物学意义。方法:本研究首先设计并实现了一种能够对核小体分类的算法,使用该算法对来自小鼠胚胎干细胞的Low MNase-ChIP-seq数据分辨不同类型的核小体。随后对于不同类型核小体周围染色质状态、转录因子结合情况进行了探究,试图寻找决定不同类型核小体的因素。最终基于以上结果,对不同类型核小体的生物意义进行了探讨。结论:我们开发了一种名为“Size-based Expectation Maximum(SEM)”的算法,成功将小鼠胚胎干细胞中的核小体分为不同类别,并且对它们的生物意义分别进行探究。我们利用SEM算法,根据核小体保护的DNA片段长度,成功将小鼠胚胎干细胞中的核小体分为小片段核小体(Small Fragment Nucleosome)、典型核小体(Canonical Nucleosome)和双核小体(Double Nucleosome)。结合核小体对于过量MNase消化的抵抗能力,我们细分出两个小片段核小体的亚类,其中位于开放顺式作用元件区域(Open Cis-regulatory Region)内的亚类在高浓度MNase消化下会消失,而另一类则如同典型核小体一般能够存留。通过对不同类别核小体周围染色质状态、染色质重塑子和转录因子结合的情况,我们推断位于开放染色质外能够抵抗高浓度MNase消化的小片段核小体亚类是处于准备状态的“敏感性核小体”。本研究探索了对于不同核小体类别的分析方法,SEM算法有着应用于更多核小体类型研究的潜力。

关键词： 人胚胎干细胞   心肌细胞   体外分化   多梳家族蛋白   PHC1  

摘要： 由于胚胎干细胞的多能性使其在再生和移植医学,建立疾病模型,药物筛选和人类发育生物学领域得到持续的关注和发展。与体细胞类型不同,多能干细胞仅在胚胎发生的最初几天短暂存在,并且没有能够在体内长时间维持多能性的环境,因此实验室中的hPSCs都是依靠细胞培养条件,各种通路信号刺激和合适的培养方法及模式维持hPSCs多能性并促进其分化过程。心脏的形成是一个复杂的过程,包含了细胞的快速特化和分化以及相关基因按照时间、空间规律顺序的激活和表达。这种基因严格按照时间、空间规律有序的激活并表达很大程度上由表观遗传修饰调控所决定的。多梳家族蛋白（Polycomb group proteins,PcG）是维持基因稳定表现及决定细胞命运的重要表观遗传分子,在细胞标识和维持适当分化过程中起关键作用,PHC1是PcG蛋白中重要组成部分。本论文尝试建立胚胎干细胞向心肌细胞体外分化体系并通过免疫荧光鉴定心肌细胞特有蛋白表达,通过实时定量PCR鉴定分化过程中中胚层、心生中胚层、心肌前体细胞、成熟心肌细胞基因标记物。然后构建shRNA进行胚胎干细胞PHC1敲降,在确定敲降不会影响细胞多能性维持的情况下在心肌分化未开始前和心肌分化中后期进行PHC1敲降,接着构建带标签的PHC1过表达质粒经过电转至胚胎干细胞,经潮霉素筛选后开始心肌细胞分化以确定PHC1在hESCs定向分化为心肌细胞过程中的作用。实验发现通过免疫荧光和实时定量PCR鉴定,确认诱导干细胞分化为心肌细胞的体系已建立;shRNA特异性敲降干细胞中PHC1对胚胎干细胞增殖和存活影响并不大,NANOG和OCT4、SOX2在转录水平仍旧有较高表达;过表达PHC1没有影响核心转录因子NANOG和OCT4、SOX2的表达;PHC1通过MESP1调控心肌分化前期阶段即中胚层形成时期来影响心脏发育。对进一步认识心肌分化与PcG之间的关系打下基础,也为临床通过胚胎干细胞治疗心脏疾病提供思路。

关键词： 雌酮-3-葡糖苷酸   孕二醇-3-葡糖苷酸   抗原结合片段   噬菌体展示   酶联免疫吸附测定  

摘要： 雌性激素包括雌激素与孕激素两大类,对女性发育和生殖功能至关重要。雌激素主要有雌酮、雌二醇和雌三醇,孕激素以孕酮为主。雌激素、孕激素水平是生殖监测中不可或缺的临床指标,性激素六项中就包含雌二醇和孕酮,对不孕症的病因诊断、疗效观察、预后判断及生殖生理作用机制的研究具有重要意义。国内外性激素常规检查方法以血清为样本,连续采血检测易引起病人心理压力,且存在安全风险,开发快速无创监测性激素水平方法有较大需求。近期研究发现,雌酮和孕酮的尿液代谢物,雌酮-3-葡糖苷酸(Estrone-3-glucuronide,E1G)和孕二醇-3-葡糖苷酸(Pregnanediol-3-glucuronide,PdG)浓度与血清雌酮孕酮浓度呈线性相关,使得通过尿液无创监控雌酮孕酮水平成为可能。但是E1G和PdG分子量低、免疫原性弱,是哺乳动物体内本身存在的代谢物,难以通过传统免疫方法稳定获得抗体,或高特异性和高亲和力抗体,成为此类检测产品开发的限制因素。随着基因工程和重组抗体技术的发展,第三代抗体尤其是抗原结合片段(Fragment antigen-binding,Fab),在制备小分子抗原抗体中展现出巨大潜力。结合体外展示技术,能高通量快速筛选出高亲和力高特异性抗体,且制备工艺简单、周期短,可应用于预防、诊断、治疗、检测等领域。本研究利用噬菌体展示技术分别构建了E1G和PdG的Fab抗体库,并通过3-4轮淘筛及酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)验证获得了E1G和PdG的Fab抗体,并对获得的抗体进行了序列分析。本研究主要结果如下:1.以半抗原E1G-BSA和PdG-BSA免疫小鼠,通过效价测定动态监测了小鼠体内相应抗体产生的趋势,结果表明两种半抗原免疫小鼠后均能产生高效价抗体。两种半抗原抗体效价在第9周达到峰值,E1G-BSA效价最高达到1:32000-1:64000,PdG-BSA效价达到1:16000-1:32000,且在小鼠体内抗体产生可维持约6周。2.选取免疫第9周的小鼠取脾脏,抽提脾细胞总RNA后通过反转录获得cDNA,再以cDNA为模板,经过三轮重叠延伸PCR得到Fab片段。通过酶切和连接构建了pComb3Xλ-Fab重组噬菌粒载体,电转化XL1-Blue菌得到两个库容分别为1.13×10～7和1.03×10～6的Fab噬菌体抗体库,其重组率分别约为78.57%和92.31%,背景连接率均为0%。3.对构建好的噬菌体抗体库分别进行3-4轮淘选,从富集到的阳性克隆中随机选择克隆进行可溶性抗体片段ELISA分析,获得了多个与E1G或PdG具有高亲和力的抗体。又从中选择了亲和力较好的共9个克隆进行Sanger测序和IMGT/V-QUEST比对,表明针对E1G或PdG的抗体具有类似的结构特征。随后选取两个亲和力较好的克隆E1G-F6和E1G-F8,对于E1G差别极小的三种小分子化合物进行了交叉反应测试,结果证实Fab抗体确实能够识别分子差异极小的小分子化合物。