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关键词： PcG   PRC1   Pcgf6   转录激活   胚胎干细胞  

摘要： 研究目的近年来,越来越多的研究发现,表观遗传调控在生物个体发育中具有重要的作用。其中,Polycomb group(PcG)蛋白是一类在进化上保守的蛋白复合物,是发育相关基因的表观遗传抑制因子。PcG介导的基因沉默主要由两个针对组蛋白尾巴的蛋白复合物参与:PRC1介导的H2AK119ubl,以及PRC2介导的H3K27me3。PRC1的分子结构非常复杂,其中与核心RING1A/B蛋白相互作用的多梳环指蛋白(Polycomb Group Ring Finger,PCGF)家族就有6个成员(从PCGF1到PCGF6),因此PRC1介导的基因沉默的分子机制较为复杂。其中,经典 PRC1(classical PRC1,cPRC1)蛋白复合物中包括 PCGF2 或 PCGF4。cPRC1复合物又可根据 PCGF2/4 与 CBX(CBX2/4/6/7/8)或 PHC(PHC1/2/3)的相互作用关系进一步分类为特定的亚群。非经典PRC1(nonclassical PRC1,ncPRC1)与PCGF1,PCGF3,PCGF5 或 PCGF6 以及 RYBP(RING1 和 YY1 结合蛋白)或YAF2(YY1相关因子2)相互作用,但不与CBX2/4/6/7/8或PHC1/2/3相互作用。除了核心亚基RING 1A/B和PCGF外,ncPRC 1复合物的组分中还包含RYBP,KDM2B,BCOR,BCORL1,SKP1 和 YAF2。目前,已有许多文章报道了 Pcgf家族部分成员对胚胎干细胞(ESCs)的调控作用。Pcgf1可激活ESCs向中内胚层分化;Pcgf2促进ESCs向中胚层分化;Pcgf3/5则促进ESCs向神经前体细胞分化。本研究选取了在胚胎干细胞(ESCs)中高表达的Pcgf6为研究对象。目前未见文章报道Pcgf6对ESCs的表观遗传调控作用,因此本文将探索Pcgf6对ESCs的表观遗传调控作用,完善Pcgf家族的生理学功能,以期为ESCs的发育和分化研究提供更多的研究方向。研究方法体内研究主要利用斑马鱼为模式动物,通过显微注射Pcgf6 Morpholino和Pcgf6 mRNA,通过整封原位杂交、PCR、ChIP-qPCR等方法研究了 Pcgf6在斑马鱼发育早期,主要是三胚层形成前的作用。体外研究主要利用P19细胞系模拟ESCs,构建Pcgf6敲降模型和Pcgf6过表达模型,利用PCR、ChIP-qPCR等方法经一步验证体内结果。研究结果通过对斑马鱼Pcgf6表达模式研究发现,Pcgf6在胚胎发育至75%-外包之前,具有较高的表达水平,之后表达下降。此时正是胚胎形成三胚层的重要时期,ESCs逐渐向三胚层分化。过表达Pcgf6后,胚胎发育明显迟缓,与维持斑马鱼胚胎干细胞多能性相关的转录因子pou5f1、klf4、sox2表达升高,并且pou5f1、klf4、sox2启动子处与转录抑制相关的H3K27me3和H2AK119ub1水平降低,与转录激活相关的H3K4me3水平升高。此外,我们在体外利用P19细胞为模型,敲低或者过表达Pcgff6,得到了同样的结果,因此我们认为Pcgf6对与维持ESCs的自我更新和多能性非常重要,并且是通过激活多能性相关转录因子发挥的作用。研究结论***6调控斑马鱼的早期发育;***6参与维持斑马鱼ESCs多能性的维持;***6对斑马鱼pou5f1、klf4、sox2具有转录激活作用;***6参与维持小鼠P19细胞多能性的维持,并同样具有转录激活作用,激活oct4、klff4、sox2。研究意义本研究首次在体外体内证明了 Pcgf6的转录激活作用,以及对ESCs多能性的维持作用,这与以往认为的PcG转录抑制作用不同,Pcgf6的转录激活作用丰富了 PcG在生物个体发育中的功能,进一步说明PcG在生物个体发育中具有多重功能。

关键词： 去细胞肾脏支架   胚胎干细胞   肾脏再生   部分损伤  

摘要： 研究目的:制备SD大鼠去细胞肾脏支架,检测其相关特性,并初步研究利用小鼠胚胎干细胞结合去细胞肾脏支架进行肾脏部分损伤修复再生的效果。研究方法:通过结扎腹主动脉至肾动脉间血管分支得到灌注通道,利用蠕动泵经腹主动脉通过该通道向肾脏内依次灌注肝素、Triton X-100及SDS等溶液来制备SD大鼠去细胞肾脏支架。对制备得到的去细胞肾脏支架的相关情况进行观察,包括支架大体、组织染色、微结构保留和细胞因子含量等情况进行观察和分析,从而取得适合移植的去细胞肾脏支架。进一步对小鼠胚胎干细胞进行体外培养,将适宜浓度的小鼠胚胎干细胞通过去细胞肾脏支架的肾动脉及输尿管向支架进行种植。选取适龄雄性SD大鼠,麻醉后取左腹外侧区纵向切口,对肾脏下极进行部分切除。对照组:应用去细胞肾脏支架下极对切除后的肾脏遗留创面进行四周间断缝合后覆盖;实验组:应用注有小鼠胚胎干细胞的去细胞肾脏支架下极对部分切除后的肾脏遗留创面进行四周间断缝合后覆盖。术后在第1周、第2周和第4周对移植后肾脏的相关情况进行观测,包括利用超声探查肾脏血流情况及去细胞肾脏支架范围、肾脏冻干重量、肾功能和相关细胞因子。对实验所得到的实验结果进行比较和分析。研究结果:离体肾脏经过依次灌注肝素、Triton X-100及SDS等溶液后所制备的去细胞肾脏支架的外观通透,其细胞成分可以彻底去除,微结构保留较为完整,且所测细胞因子较普通肾脏变化不显著。应用去细胞肾脏支架修复肾脏部分缺损中,对照组及实验组均可见肾实质向去细胞肾脏支架方向增生,同时肾脏组织重量增加、肾内血流信号增强,肾功能恢复,但两组间无显著性差异。对照组及实验组移植侧肾脏组织内的TGF-β和VEGF含量均有所增加,但实验组的TGF-β和VEGF因子的表达高于对照组,存在显著性差异。研究结论:通过对肾脏进行离体灌注去细胞液,能够制备完整的去细胞肾脏支架,该支架可以为干细胞提供良好的生长分化环境。将小鼠胚胎干细胞置入这种天然组织工程支架材料中,再将部分支架移植回体内修复肾缺损,能够引导损伤肾脏再生,且更为活跃,对未来利用去细胞肾脏支架和小鼠胚胎干细胞来再生肾脏的研究提供更开阔的思路。

关键词： TRIM28   KRAB-ZFPs   胚胎干细胞   分化  

摘要： Krüppel相关盒结构域锌指蛋白(KRAB-ZFPs)是高等脊椎动物中最大的转录调节因子家族。TRIM28作为KRAB-ZFPs家族成员的辅助因子,在整个发育过程中发挥作用,且与染色质凝集、基因抑制相关。KRAB-ZFPs可以通过KRAB结构域募集TRIM28,进而催化异染色质形成和转录抑制。近年来对于TRIM28在细胞生物学不同方面的参与作用已有广泛研究。TRIM28对于发育和分化过程至关重要。KRAB-ZFPs同样参与许多生物过程,包括影响细胞分化。然而,TRIM28及其相关的KRAB-ZFPs在干细胞分化中的作用及分子机制尚未明确。为了探究TRIM28及其相关因子在胚胎干细胞分化方面的作用机制,在本文中,我们通过在小鼠ES细胞中的TRIM28质谱分析发现了TRIM28可能的辅助因子ZFP825。随后我们制备了识别ZFP825/ZFP825-like的抗体,构建了ZFP825和ZFP825-like的表达载体,利用免疫共沉淀实验验证了TRIM28与ZFP825和ZFP825-like的相互作用。在进一步的功能研究中,我们在小鼠ES细胞中用sh RNA将Zfp825/Zfp825-like进行敲减,RNA-seq结果提示Zfp825/Zfp825-like表达水平的下调显著影响了正常的发育和分化过程。随后的视磺酸(RA)诱导类胚体(EB)分化的实验证明了Zfp825/Zfp825-like表达水平的下调会导致干细胞向神经元方向的分化缺陷。为了进一步分辨ZFP825与ZFP825-like的功能,我们构建了两者特异的sh RNA用于后续实验。同时Ch IP-seq结果显示ZFP825/ZFP825-like与TRIM28在小鼠ES细胞中逆转录转座子处共定位,提示它们可能对这些转座元件具有调控作用。然而,TRIM28相关因子ZFP825/ZFP825-like影响胚胎干细胞分化的具体调控机制还需要进一步的研究。

关键词： 蛋白质   脱氧核糖核苷酸   互作机制   超级核酸酶   酶解效率   足迹检测   核酸保护检测技术   一代测序技术  

摘要： 蛋白质-DNA相互作用(protein-DNA interactions，PDIs)直接影响各种DNA代谢过程，包括DNA复制、基因重组和DNA修复。PDI异常可导致癌症、阿尔兹海默症等多种疾病。对PDI的精准表征有助于在分子层面深度理解相关疾病的发病机理，为相关药物的研发提供理论和实验依据,同时也为研究环境污染物的毒理效应与作用机制提供新的理论。我们利用超级核酸酶发展出新的、独特的PDI测序与分析技术，并应用于典型的复杂蛋白质-DNA相互作用。主要内容如下:　　首先，比较了超级核酸酶benzonase与常用的DNaseⅠ的核酸酶解效率。结果表明，不同金属离子辅助因子条件下两种核酸酶的活性有不同的影响，镁离子和钙离子分别提升benzonase和DNaseⅠ的活性，但在所测试的三种条件下，benzonase酶解效率均比DnaesⅠ高;两种核酸酶酶解dsDNA的效率均高于酶解ssDNA的效率，但DNaseⅠ显示的差异更大。超级核酸酶benzonase更适合PDI的测序分析研究。　　其次，发展了基于超级核酸酶的足迹检测方法。将高效率的benzonase酶切作用应用于大肠杆菌单链DNA结合蛋白(*** single-stranded DNA binding protein，SSB)与ssDNA相互作用研究。采用benzonase足迹检测方法可识别SSB与ssDNA底物的典型结合模式。同时，意外地发现poly(dA)、poly(dT)与SSB的结合不仅表现出较明显的亲和作用差异，还表现出结合模式上的差异。通过ssDNA底物不同位点的标记，以及与未标记ssDNA底物比较，发现荧光染料Cy5标记可影响SSB-ssDNA相互作用。　　在上述研究基础上，提出将benzonase酶切介导的核酸保护检测技术与一代测序技术结合，发展了一种新的评价蛋白质-ssDNA相互作用的解析图谱。在这些独特的技术中，为实现短ssDNA片段的测序，通过长链互补、S1酶切，可获得含有平末端接头的同源dsDNA片段，进一步通过T-克隆技术，将dsDNA片段连接至质粒后。通过扩增、Sanger测序技术可获得插入的dsDNA片段序列，进而准确推断出被结合蛋白保护的ssDNA片段。将该方法应用于SSB-ssDNA，RecA-ssDNA以及SSB-RecA-ssDNA相互作用的研究，可在单碱基水平获得SSB与ssDNA的结合模式与动态分布行为。所获得的结合模式与动态分布行为有助于理解这些蛋白在同源重组修复过程所发挥的作用。将这种以benzonase核酸酶解反应为基础的蛋白质-相互作用分析技术命名为单个受保护核酸片段分析测序技术(SPDF-Seq)。传统的单分子荧光共振能量转移技术仅能测定10nm范围内蛋白质-DNA的动态相互作用。而我们所发展的SPDF-Seq技术可超越这一限制。预期该技术可应用于其它多种类型的蛋白质-DNA相互作用，具有广泛的应用前景。

关键词： 胚胎干细胞   细胞外囊泡   早发性卵巢功能不全   PI3K/AKT通路  

摘要： 目的研究胚胎干细胞来源的细胞外小囊泡治疗化疗诱导小鼠早发性卵巢功能不全的效果,并进一步探索其可能存在的作用机制。方法本研究通过腹腔注射化疗药物环磷酰胺和白消安构建小鼠早发性卵巢功能不全(Premature Ovarian Insufficient,POI)模型。并通过尾静脉注射胚胎干细胞来源细胞外小囊泡(Small Extracellular Vesicles derived from Embryonic Stem Cells,ESCs-sEVs)给予治疗。在治疗后第1周和第2周分别检测小鼠血清雌激素、卵泡刺激素、抗缪勒管激素含量。HE染色评估卵巢结构及卵泡数目,TUNEL染色观察小鼠卵巢颗粒细胞凋亡。提取小鼠卵巢颗粒细胞进行体外培养,给予ESCs-sEVs干预后,通过EdU和CCK-8实验检测颗粒细胞增殖能力。Western-blot检测PI3K/AKT通路及下游凋亡相关蛋白表达情况。结果在应用ESCs-sEVs治疗后,小鼠血清性激素恢复至正常水平,卵巢内各级卵泡数目增加,凋亡颗粒细胞减少。进一步研究发现,ESCs-sEVs干预后颗粒细胞增殖活性提高,PI3K/AKT通路同时被激活,且下游凋亡蛋白Caspase-3及Bax表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达增高。而当PI3K/AKT通路被抑制时,ESCs-sEVs对颗粒细胞促增殖和抗凋亡的作用均减弱。结论本研究发现ESCs-sEVs可通过激活PI3K/AKT通路,影响颗粒细胞活性进而促进小鼠卵巢功能恢复,为临床治疗POI提供新的思路和方向。

摘要： On January 1, 2022, mandatory genetically engineered (GE) food disclosure labeling will be required nationwide in the United States. To date, the only mandatory GE labeling law implemented in the U.S. was Act 120 in Vermont. This thesis examines the consumer purchasing response to the implementation of Vermont Act 120 using store-level scanner data of food purchases. I measure the effects of Vermont Act 120 on the grocery store sales of non-GMO, organic, and GE- labeled products in Vermont. Using a difference-in-difference approach, I can compare stores in Vermont to control states before and after the law was passed, implemented, and repealed. I find that during the implementation period, sales of non-GMO and organic labeled products increased, and the sales of GE-labeled products decreased. The sales trend reverted after the law was repealed but not quite to the baseline levels for organic and GE-labeled products.

关键词： 胚胎干细胞   自我更新   细胞周期   基态   Na(?)ve多能态   P53  

摘要： 目的: 胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)是研究哺乳动物细胞分子机理以及胚胎发育的重要工具,在人类疾病建模和细胞治疗方向拥有巨大潜力。ESCs的细胞周期调控与其他体细胞之间存在显著差异,越来越多的证据表明,细胞周期调控网络与干细胞多能性维持、细胞命运决定以及起始分化都存在密切关联,但对于它们之间如何相互调控及其分子基础目前还知之甚少。 长期以来ESCs的体外培养条件都依赖于血清,但由于血清成分的复杂性并且无法阻断MEK/ERK信号通路对胚胎干细胞的分化诱导,且在细胞治疗应用研究中存在局限性,促使人们探索新型无血清培养系统。两种小分子抑制剂(PD0325901+CHIR99021,2i)的联合使用使ESCs的无血清培养成为了可能,其中PD0325901通过抑制MEK/ERK通路阻断分化诱导信号,CHIR99021通过抑制GSK3来模拟WNT信号,稳定β-catenin进而解除TCF3对多能性基因的抑制,帮助细胞维持自我更新。小鼠胚胎干细胞(mouse Embryonic stem cells,mESCs)在血清培养时由于MEK/ERK信号刺激同时受表观遗传学修饰的影响,细胞呈现倾向于启动分化的Primed多能态,而在2i培养时细胞呈现出更接近于胚胎中的内细胞团(Inner cell mass,ICM)的原初多能态,即Na(?)ve多能态,也称为基态(Ground state)。两种状态下的mESCs在分子生物学和细胞生物学等诸多层面都存在显著差异。 本论文着力于探究ESCs多能性的维持与细胞周期调控的关系,以及不同多能态之间细胞周期的差异调控,探索关键调控因子的作用机制,以期阐释ESCs在正常的自我更新过程中多能性维持与细胞周期调控相互联系的分子生物学基础。通过对胚胎干细胞自我更新和分化的核心调控机理研究,不仅可以帮助我们理解生命的起源,还能使我们更好地发掘胚胎干细胞的应用潜力,为人类疾病治疗提供新的助益。 材料和方法: 利用分子克隆技术构建CRISPR-Cas9基因敲除以及RNA干扰系统,利用慢病毒系统构建P53-KO稳定表达细胞株;Western blot和RT-PCR检测ESCs在不同多能态下,P53敲除前后干性标志因子以及特化因子的表达;流式细胞术检测细胞周期;流式细胞术检测细胞凋亡;流式流式细胞术检测细胞ROS水平;RNA-seq分析两种多能态基因表达差异,并进行KEGG通路富集分析; 结果: Na(?)ve mESCs的增殖速度相比于Primed mESCs显著减慢,增殖缓慢的原因是因为细胞周期G1期在Na(?)ve mESCs中被延长导致的,而非细胞凋亡。P53被激活是导致Na(?)ve mESCs G1期延长的原因,P53对细胞周期的调控显著依赖于P21和P27信号通路。MEK抑制剂PD0325901是导致P53被激活的主要因素。Na(?)ve mESCs胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平高于Primed mESCs,而诱导产生ROS的主因也是PD0325901,同时ROS也是激活P53的途径之一。实验中未检测到Na(?)ve mESCs因ROS水平升高而出现DNA损伤应激,提示着ROS可能对mESCs Na(?)ve状态的调节发挥功能。 结论: Na(?)ve mESCs相较于Primed mESCs,细胞周期G1期延长,S期缩短,细胞自我更新缓慢。P53在Na(?)ve mESCs中被激活,通过P21和P27信号通路调控细胞周期。PD0325901诱导Na(?)ve mESCs激活P53,并且诱导Na(?)ve mESCs产生ROS,同时ROS也是P53的激活因子之一。

摘要： 基因工程课程内容抽象、信息量大、知识更新速度快,同时教学内容涉及大量难以用传统的理论教学进行教授的实验技术手段。传统的注入式教学模式下,学生效率较低,教学效果并不理想。在基因工程课程的教学实践中,笔者发现,巧妙运用教学案例,可调动学生学习兴趣、提高学生学习效率。

关键词： PCV2   感染性克隆   疫苗   DNA疫苗   基因工程  

摘要： 自上世纪90年代以来DNA疫苗在全球范围一直是基因工程疫苗研究的重点领域,但其免疫效果还难以超越传统疫苗,其根本原因是DNA疫苗进入细胞效率低和目标抗原基因不能复制而表达水平低造成的。鉴于此,本研究提出了以包装缺陷病毒为载体的自主复制型DNA疫苗技术方案:选择一个子代病毒包装必需且其不参与基因组复制的基因序列作为DNA疫苗目标抗原承载区来构建重组病毒,重组病毒可通过表达包装蛋白的反式互补转基因细胞制备。该重组病毒作为DNA疫苗能以感染的方式高效进入宿主细胞,且目标抗原基因能随病毒基因组一起复制并大量表达,从而解决导致传统DNA疫苗免疫效果不理想的问题。而且,该重组病毒在动物体内因缺乏必须包装蛋白基因不能形成子代病毒而传代和增殖,解决了现有复制型病毒载体疫苗所存在的安全性问题。主要研究内容如下:1包装缺陷型病毒PCV2-GP5感染性克隆构建运用PCR技术,以PCV2病毒g DNA为模板扩增PCV2基因组序列,并运用线性PCR重组克隆技术将PCV2基因组克隆到p Omni载体质粒上,获得PCV2的感染性克隆p Omni-PCV2。用PRRSV活病毒疫苗提取RNA进行反转录,通过PCR扩增GP5基因片段,与上一步构建的p Omni-PCV2进行线性PCR重组克隆,获得重组病毒的感染性克隆p Omni-PCV2△CAP-GP5。结果表明,成功从PCV2病毒g DNA中扩增出PCV2基因组,并成功构建了该基因的感染性克隆p Omni-PCV2;成功从PRRSV病毒RNA反转录的c DNA中扩增出GP5基因,并成功构建了突变病毒的感染性克隆p Omni-PCV2△CAP-GP5。测序结果表明克隆的GP5全长561bp,与Gen Bank上的PRRSV GP5基因序列（登录号:AEI72610.1）比对同源性为100%。GP5基因成功插入并替代了PCV2的部分Cap基因序列,且与Cap基因N端融合形成一个完整的开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）。2包装缺陷型病毒PCV2-GP5的拯救将无内毒素p Omni-PCV2△CAP-GP5质粒转入能表达PCV2病毒Cap基因的CTC-PK-15转基因细胞中,转染后的细胞在G418维持浓度下盲传3代,每代收获PCV2-GP5病毒液。提取重组病毒PCV2-GP5盲传第三代的DNA进行PCR扩增,用CTC-PK-15细胞DNA作阴性对照,p Omni-PCV2△CAP-GP5质粒作阳性对照,1%琼脂糖凝胶电泳结果显示阴性组无条带,阳性组和实验组在561bp左右有特异性扩增条带,与目的片段大小相符,证明重组病毒PCV2-GP5拯救成功。3包装缺陷病毒PCV2-GP5的增殖缺陷验证通过PCR法检测PCV2-GP5在CTC-PK-15细胞中的增殖情况,并用模板无限稀释法测定PCV2-GP5病毒滴度,然后用PCV2-GP5病毒分别感染CTC-PK-15细胞和PK-15细胞,盲传3代后进行病毒特异性PCR检测。结果表明,重组病毒PCV2-GP5在CTC-PK-15细胞中能持续增殖。模板无限稀释法得PCV2-GP5病毒DNA有扩增条带的最高稀释度为10-4,而PCV2病毒DNA有扩增条带的最高稀释度为10-5,由此可推知PCV2-GP5病毒TCID50为约10～4。PCV2-GP5病毒在CTC-PK-15转基因细胞中能复制增殖,形成具有感染性子代病毒,但其虽然对PK-15细胞具有感染性（感染第一代细胞有特异性扩增条带,证明病毒进入了细胞并进行了基因组复制）,但不能形成子代病毒,因此盲传的P2和P3均无特异性扩增条带,说明重组病毒PCV2-GP5在PK-15细胞中因为包装基因缺陷无法增殖、传代。4包装缺陷病毒PCV2-GP5表达GP5验证将包装缺陷病毒PCV2-GP5感染PK-15细胞后,分别提取阴性对照PK-15细胞和感染包装缺陷PCV2-GP5病毒的PK-15细胞RNA,经反转录和GP5基因特异性PCR扩增。结果显示,这两个总RNA样品的D260/D280的比值均大于1.8,表明提取的RNA较纯,没有蛋白质污染;RNA电泳均出现3条完整的r RNA条带,即28s r RNA、18s r RNA、5s r RNA三条带,证明提取的总RNA质量比较好。RT-PCR扩增结果显示阳性对照与实验组细胞均有特异性扩增条带,与目的基因大小一致,而阴性对照组细胞无扩增条带,说明以包装缺陷PCV2为载体的GP5基因能感染PK-15细胞并得到表达,为后续进一步进行包装缺陷PCV2-GP5病毒的动物免疫试验提供了依据。

关键词： 胚胎干细胞   原始生殖细胞   dCas9-SAM系统   功能获得型筛选  

摘要： 生殖细胞是生物个体的起源,是遗传信息和遗传多样性的载体,伴随着精卵结合产生新的个体,完成生命的延续。因此,生殖细胞的产生和发育对于物种的繁衍至关重要。精子和卵子来源于胚胎阶段的原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs),其发育和成熟过程受到很多因素的调控,包括转录因子的调控、DNA甲基化以及表观遗传的修饰等等。近年来,伴随着体内原始生殖细胞数量限制等问题的出现,人们将研究视角由体内转为体外。本文利用不同方法诱导小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)分化为类原始生殖细胞(Primordial germ cell-like cells,PGCLCs),并将其与体细胞共培养继续发育进入减数分裂阶段,该分化体系能够应用在多个细胞系上,成功建立小鼠生殖细胞诱导分化的平台,体外诱导分化平台的建立为了解生殖细胞发育过程及其调控机制提供重要帮助。另一方面,胚胎干细胞向原始生殖细胞分化的过程受到众多基因的调控,我们利用CRISPR/Cas9基因组编辑工具,构建dCas9-SAM系统用于功能获得型筛选,通过高通量测序得到原始生殖细胞发育中具有调控作用的基因,随后进行基因功能验证。对原始生殖细胞特化和发育过程中相关调控基因的充分了解,为研究PGCLCs体外定向分化奠定基础,为全面掌握生殖细胞发育过程提供帮助,有益于我们了解生殖相关疾病的致病机理并为其治疗提供解决方案,尽可能减少不孕不育的发生。