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关键词： 肝切除术   肝再生   肝损伤   化学药物   基因工程   临床介入治疗  

摘要： 肝脏是一种具有出色再生潜力的实性器官,其再生能力与肝脏疾病密切相关。深入研究肝再生的机制对于理解肝脏生物学和发展再生医学具有重要意义。小鼠凭借其技术、经济及解剖学等优势成为当前最优候选动物。目前已有的肝再生小鼠模型包括部分肝切除、化学药物损伤模型和基因工程模型等,本综述比较其优缺点及应用前景,为后续研究提供参考。

关键词： 基因工程   课程思政   生态保护   黄河战略  

摘要： 黄河流域生态保护和高质量发展已上升为国家战略,而推进落实黄河国家战略离不开涉农专业人才的支撑.基因工程是涉农专业本科生的一门核心主干课程,是涉农专业人才培养过程中的关键教学环节.在黄河国家战略背景下,文章论述了基因工程课程思政建设的重要性和必要性,讨论了基因工程教育目标和教学大纲思政化修订、黄河战略思政元素挖掘、思政教师队伍建设,探讨了借助多元化教学方法把思政教育贯穿教学全过程实现全程育人全方位育人等改革措施,以期为服务黄河国家战略培养更多高素质专业人才.

关键词： 胚胎干细胞   神经干细胞   分化   组蛋白修饰  

摘要： 选用人类胚胎干细胞系和由人类胚胎干细胞系分化来的神经干细胞系为研究对象,分析组蛋白修饰对胚胎干细胞分化过程的调控作用。得到了两种细胞系差异表达基因转录起始位点侧翼区域内八种组蛋白修饰的分布模式,以及组蛋白修饰功能簇。研究表明在两类细胞系中,八种组蛋白修饰谱分布模式一致,且呈现两种分布类型;H3K27ac, H3K4me3和H3K9ac组成的功能簇是保守的;H3K27me3,H3K36me3和H3K79me1组成的功能簇以及H3K9me3和H3K27me3组成的功能簇在胚胎干细胞向神经干细胞分化的过程中消失。结果揭示了组蛋白修饰对胚胎干细胞系向神经干细胞系分化过程的部分调控机制,为该分化过程分子调控机制的研究提供部分重要的理论基础。

关键词： TP53单克隆抗体   抗体,单克隆   基因工程抗体技术   载体构建   免疫组织化学  

摘要： 目的:利用基因工程抗体技术制备TP53重组抗体,并进行临床病理诊断应用的初步探究。方法:将杂交瘤来源的TP53单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与pGEM-T载体连接,测序分析并选择有效重链及轻链序列分别与pFUSEss-CHIg-mG2B、pFUSE2ss-CLIg-mk及pcDNA3.4载体连接。利用ExpiCHO-S™Expression System进行真核表达,经Protein A柱纯化获得TP53重组抗体。最后将TP53重组抗体和商品化TP53抗体进行蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)应用的初步探究。结果:通过抗体表达纯化获得TP53重组抗体,液相色谱-质谱测定结果显示TP53轻链/重链分子量分别为25 kDa和53 kDa,ELISA效价为1∶2180000,亲和力测定Ka值为6.6×10^(10) L·mol^(-1)。WB结果显示TP53重组抗体与商品化TP53抗体表达结果一致。IHC结果显示TP53重组抗体和商品化TP53抗体识别靶标均定位于细胞核,在人肾癌、人乳腺叶状腺癌、人乙状结肠腺癌及小鼠肝癌中的检测结果一致,且TP53重组抗体在人高分化鳞癌、人肝细胞癌和人乳腺癌中的免疫组化检测效果优于商品化的TP53抗体。结论:本研究成功制备了小鼠抗人TP53重组抗体,并为临床病理诊断提供初步的数据支持。

关键词： 类器官   三维牵引   三胚层   胚胎干细胞   激光共聚焦显微镜   胚胎细胞   小鼠胚胎   力学因素  

摘要： 目的力学因素在胚胎发育过程中扮演重要角色,如何对胚胎产生的力进行测量是一项艰巨的挑战。弹性微球等新型探针已经成功地在斑马鱼胚胎和小鼠胚胎中对胚胎组织产生的三维牵引力进行定量测量。体外培养的胚胎类器官比天然的胚胎更为脆弱,如何对其产生的牵引力进行测量,是一项更为艰巨的挑战。方法将弹性微球与OGTR1小鼠胚胎干细胞共同培养在180 Pa的三维纤维蛋白软胶中,通过添加不同的细胞因子组合诱导胚胎干细胞高效地发育为具有有序三胚层结构的胚胎类器官。在胚胎类器官发育的过程中,与胚胎干细胞黏附的弹性微球会被包裹到胚胎类器官内部,并会分布到胚胎类器官的不同位置。用Triton X-100去除胚胎细胞产生的力,并在处理前后用激光共聚焦显微镜对弹性微球和胚胎类器官进行三维成像,记录下弹性微球的位置和形态,计算出弹性微球的受力。结果在三维纤维蛋白软胶中,用细胞因子组合对胚胎干细胞进行诱导,可以诱导超过75%的细胞克隆形成具有类似天然三胚层结构的胚胎类器官。对处于不同胚层区域的弹性微球进行受力分析,发现中胚层区域组织产生的牵引力显著高于其他区域。结论本研究建立了在小鼠胚胎类器官中定量测量三维牵引力的方法,并发现不同胚层产生的牵引力的差异。

关键词： 人胸膜间皮瘤   从头测序   单核苷酸多态性   基因插入缺失   基因结构变异   基因拷贝数变异  

摘要： 通过DNA从头测序分析人胸膜间皮瘤发生的高关联度突变基因。提取恶性胸膜间皮瘤(MPM)组织和正常胸膜组织DNA,构建基因文库,用Illumina HiSeqX Ten PE 150平台测序,将测序结果与人类基因组数据库的参考序列进行比对、注释,并对测序结果进行过滤、错误率分布检查、GC含量分布检查分析。MPM组织DNA平均过滤37829946 bp,错误率小于0.12%,GC含量占41.17%,而正常胸膜组织DNA平均过滤39089681 bp,错误率小于0.1%,GC含量占41.7%,两者测序质量均在Q 30(≥80%)以上,MPM为87.43%,正常胸膜为88.36%。以上高质量测序数据通过BWA比对到参考基因组(GRCh 37/hg 19),得到最初比对序列,利用重复标记后的比对序列进行覆盖度、深度等统计,覆盖深度达到10 X以上该突变位点可信。结果显示,实验病例XL14覆盖深度达到10 X的占98.59%,覆盖率达到99.83%;对照病例Z5占98.50%,覆盖率达到99.79%。对该序列进行基因注释分析,发现一系列单核苷酸多态性、基因插入缺失、基因结构变异、基因拷贝数变异,筛选出总变异位点数29277个,可能致病的变异位点数22个,致病性的变异位点数5个,不确定变异有害性的位点数为3353个,其余变异位点均为良性。进一步对突变基因进行富集、关联性分析,预测出突变基因TXNDC2与人胸膜间皮瘤的发生高度相关,相关系数达到0.8以上;突变基因PIEN、ABCC1、UGT1A7、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A9、ALDH3B1、UGT1A5等与人胸膜间皮瘤有一定关联性,关联度在0~0.2之间。基因TXNDC2、PIEN、ABCC1、UGT1A7、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A9、ALDH3B1、UGT1A5的变异可能与人胸膜间皮瘤的发生发展有关。本实验为人胸膜间皮瘤分子诊断提供了参考。

关键词： 材料基因工程   稀贵金属   人工智能   机器学习  

摘要： 概述了国内外材料数据库现状及稀贵金属材料基因工程建设情况,以贵金属钎焊新材料、无铅焊料合金为例阐述了智能驱动稀贵金属材料基因工程的应用,并对Ag-Cu钎焊料的熔点进行了回归预测研究。针对稀贵材料基因数据库数据安全共享实际需求存在的不足,分析了稀贵金属材料基因数据库面临的问题和挑战,提出了共享和开放开发智能一体化的发展方向。

关键词： 单克隆抗体   基因工程   抗体类型转换   表达条件优化  

摘要： 为建立抗体类型转换和表达体系,以最新制备的1株IgM类抗体——鼠抗人DCP单克隆抗体7C2为研究对象,首先从7C2杂交瘤细胞中克隆IgM轻重链可变区,再将IgM可变区序列与鼠IgG1恒定区序列融合克隆至真核表达载体,并转入293细胞系中。利用蛋白质免疫印迹技术,成功检测到IgG1抗体在细胞内的表达并分泌至培养上清。在进一步优化密码子、宿主细胞和信号肽等影响抗体表达的因素后,建立了双质粒瞬转和基于双顺反子表达方式的稳转表达体系,可用于将鼠源IgM类抗体转换为IgG类抗体并进行表达。该研究为拓展非IgG类抗体的应用范围提供重要途径,同时为提高重组抗体在真核体系中的表达效率提供参考。

关键词： 肝癌   P53基因   聚合酶链反应   DNA测序  

摘要： 目的研究肝癌与P53基因外显子8突变的关系。方法收集了20例肝癌组织的石蜡标本,用于组织DNA的提取,运用聚合酶链反应(PCR)扩增P53基因的外显子8,扩增后的所有PCR产物经DNA序列进行检测其是否有突变情况。结果20例肝癌的患者均扩增出了P53基因外显子8基因的片段,经过Sanger的测序方法对DNA进行测序,通过DNA测序的结果分析,没有发现外显子8有突变。结论肝癌与P53基因外显子8突变无相关性或关联很小,P53基因外显子8的突变与肝癌的相关性仍需要更多的标本量进行研究以及对其他外显子进一步筛查。

关键词： 脊髓横断   瘢痕组织   胚胎干细胞   功能修复   丝素蛋白   材料硬度   脊髓损伤   定向分化  

摘要： 目的脊髓损伤修复是临床治疗的重大挑战。本课题组使用不同硬度丝素材料和视黄酸联合诱导胚胎干细胞神经向分化,实现了小鼠脊髓切断后运动功能的修复。但该体系如何实现小鼠脊髓完全性损伤后功能修复的机制尚不清楚,丝素材料硬度调控ESC神经向分化的分子通路也不明确,因此需要进一步探索丝素材料硬度调控胚胎干细胞定向分化修复脊髓损伤的机理。方法利用不同硬度的丝素蛋白/透明质酸支架作为载体并联合视黄酸在体外诱导胚胎干细胞神经向分化,通过免疫荧光染色和Ch IP实验探究不同硬度丝素蛋白诱导ESC神经向分化的机制。将带细胞的支架复合体植入小鼠脊髓横断处,通过小鼠行为学实验检测修复的效果,使用免疫组化、HE染色和单细胞测序等方法探究修复机制。结果在与天然脊髓弹性模量接近的丝素蛋白支架上,胚胎干细胞分化的细胞其神经细胞标志性marker显著表达增加;Ch IP实验表明,支架上的细胞神经向分化的H3K9甲基化程度低,染色质疏松,更有利于神经向分化的基因表达。该体系植入体内后可以调节损伤早期免疫反应,引导轴突跨越脊髓横断处;单细胞测序显示在修复过程中发挥主要作用的是神经细胞。结论天然脊髓弹性模量的丝素蛋白直接可以疏松染色质,促进胚胎干细胞神经向分化的基因表达;丝素蛋白-神经向细胞体系植入动物体内后可以减少瘢痕组织的产生,帮助轴突跨越横断处再生。