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关键词： 微小RNA   微小RNA302a   凋亡调节蛋白   Bcl2L11基因   叶酸缺乏   胚胎干细胞   细胞凋亡   胚胎发育  

摘要： 目的观察叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞系ES-D3中微小RNA302a(miR-302a)、Bcl2L11的表达变化,并对miR-302a与Bcl2L11的靶向关系进行预测和验证。方法取适量ES-D3细胞,置于缺乏叶酸的培养液中培养,分别于培养0、24、48、72 h(A、B、C、D组)时收集细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-302a、Bcl2L11 mRNA,Western blotting法检测细胞Bcl2L11蛋白(BimEL、BimL及BimS蛋白)。生物信息学软件预测Bcl2L11与miR-302a的靶向结合位点。以小鼠3T3细胞基因组DNA为模板,设计3’UTR扩增引物,PCR扩增基因的3’UTR序列,将其克隆到pmiR-RB-REPORT双荧光素酶报告载体中,构建Bcl2L11-3’UTR野生载体;设计突变引物将靶标序列突变,构建突变载体,miRNA-302a mimics及Negative Control分别与Bcl2L113’UTR双报告基因野生载体及突变载体共转染,分别为1组(Bcl2L113’UTR野生型载体+Negative Control)、2组(Bcl2L113’UTR野生型载体+miR-302a mimics)、3组(Bcl2L113’UTR突变型载体+Negative Control)、4组(Bcl2L113’UTR突变型载体+miR-302a mimics),转染后测算各组报告基因hRluc的相对荧光值,验证miR-302a与Bcl2L11是否存在相互作用。结果A、B、C、D组细胞miR-302a相对表达量分别为1.00±0.20、0.65±0.32、0.50±0.22、0.43±0.24,与A组比较,D组miR-302a相对表达量下降(P<0.05);A、B、C、D组细胞Bcl2L11 mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、1.22±0.19、1.82±0.37、3.49±0.45,与A组比较,D组Bcl2L11 mRNA相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimEL相对表达量分别为0.86±0.02、0.87±0.03、0.92±0.02、1.10±0.06,与A组比较,C、D组BimEL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimL相对表达量分别为0、0.09±0.02、0.16±0.04、0.26±0.03,与A组比较,B、C、D组BimL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimS相对表达量分别为0、0、0.11±0.04、0.18±0.04,与A组比较,C、D组BimS相对表达量升高(P<0.05)。miR-302a和Bcl2L11存在相互作用。1、2、3、4组报告基因hRluc的相对荧光值分别为1.00±0.07、0.64±0.02、1.00±0.03、0.95±0.06,与其他组比较,2组相对荧光值降低(P<0.05)。结论叶酸缺乏的ES-D3细胞中miR-302a表达下调、Bcl2L11 mRNA及蛋白表达上调。miR-302a与Bcl2L11基因有较强的相互作用,胚胎干细胞凋亡过程中Bcl2L11为miR-302a的靶基因。

关键词： 小鼠胚胎干细胞   微环境   旁分泌   细胞移植   白细胞介素6  

摘要： 本研究旨在探讨心脏成纤维细胞旁分泌能力对小鼠胚胎干细胞的影响。新生小鼠和成年小鼠成纤维细胞的条件培养基(ConM-NCF、ConM-ACF)分别稀释50倍(1:50)或5倍(1:5),通过RT-real time PCR技术、ELISA、细胞增殖检测以及计数心肌分化过程中跳动拟胚体(embryoid body, EB)的比例,观察这些条件培养基对小鼠胚胎干细胞的影响。结果显示,成纤维细胞细胞因子的分泌能力在发育过程中发生显著变化,其中白细胞介素6 (interleukin 6, IL6)随发育成熟显著增加。ConM-NCF抑制干细胞的增殖,但高、低浓度对干性基因表达的作用不同。Con M-ACF 1:50促进干细胞增殖并上调干性基因,但Con M-ACF1:5作用相反。ConM-NCF和ConM-ACF都能抑制干细胞的心肌细胞分化能力,但又各有特点:ConM-NCF 1:50抑制早期心肌分化但不影响晚期心肌细胞标记物的表达;ConM-ACF 1:50抑制早期心肌分化比ConM-NCF 1:50更显著,阻碍心肌成熟并上调分化晚期的心肌细胞标记物表达水平。此外,IL6中和抗体抑制ConM-ACF 1:50对干细胞的促增殖作用,但不影响ConMNCF 1:50的作用。干细胞分化过程中长期应用IL6中和抗体,抑制早期心肌细胞分化,但对晚期分化不产生影响。以上结果提示,心脏成纤维细胞分泌的细胞因子种类和浓度都对小鼠胚胎干细胞的增殖、干性基因表达和心肌分化有重要意义,其中ConM-ACF分泌的IL6是干细胞干性维持和心肌细胞分化的有利因素。

关键词： ABO亚型   血清学实验   分子生物学   DNA测序  

摘要： 目的分析3例ABO血型B亚型标本的血清学和分子生物学特征,并探索准确鉴定ABO亚型的方法。方法采用常规血型血清学方法分析3例标本ABO表型,通过对ABO基因第6、第7外显子和第3内含子直接测序确定其基因型。结果3例标本血清学表型分别为B3、Bχ、Bel。样本1在第3内含子存在5 G>A杂合突变,样本2、3分别在第7外显子存在541 C>T、502 C>T杂合突变,其基因型分别为B303/O02、Bx03/O01、Bel03/O02。结论血清学实验结合分子生物学方法可准确鉴定ABO亚型,分子生物学方法还有助于探索ABO亚型的形成机制。

关键词： 多能干细胞   胚胎干细胞   诱导性多能干细胞   大动物  

摘要： 多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)是可以无限增殖更新并具有分化为各种组织细胞潜能的一类干细胞系。而其中的iPS细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)的建立更是进一步拉近了干细胞和临床疾病治疗的距离,并且对农业经济发展和动物医学领域具有巨大的潜在应用价值。然而目前干细胞深层次的机制与应用研究主要还是集中在小鼠和人类干细胞上,而对于农牧业与兽医学关系紧密的大动物干细胞的研究主要还在初步建立与应用尝试阶段。而本文通过归纳整理相关文献,简述了胚胎多能干细胞以及诱导多能干细胞在猪、牛、马等大动物中的建立研究现状。

关键词： 水产动物   精原干细胞   胚胎干细胞   冷冻保存  

摘要： 生殖细胞及胚胎的低温冷冻保存不仅是水产动物种质资源保存的重要技术手段之一,也是为水产动物优良新品种创制和培育提供基础育种材料的主要途径。精原干细胞和胚胎干细胞冷冻保存技术是近年来水产研究领域新兴的一种低温冷冻保存技术,与传统冷冻保存的精子或胚胎相比,冷冻保存的精原干细胞及胚胎干细胞具有自我更新及多向分化的潜能,同时还具有可以进行体外分化与移植等优势。本文综述了近年来水产动物精原干细胞和胚胎干细胞冷冻保存技术研究及其应用成果,以期进一步丰富和完善水产动物精子和胚胎冷冻及保存技术的资料体系,为充分利用低温冷冻保存技术提高水产经济动物优质种质资源保护和新种创制效率提供参考。

关键词： 家族性肾癌   VHL基因   胚系变异   实时定量PCR   DNA测序  

摘要： 目的研究一个家族性肾癌患者家系的胚系变异,结合其临床特征,探索其发病的分子机制。方法收集患者和家系成员的外周血提取DNA,采用DNA序列分析、实时定量PCR,反转录PCR(reverse transcriptase-PCR,RT-PCR)方法分别检测和验证VHL基因单碱基变异、碱基的微小插入和缺失、单拷贝大片段缺失。结果实时定量PCR结合RT-PCR产物测序的结果显示该家系患者VHL基因第2外显子存在单拷贝的缺失性胚系变异。结论VHL第2外显子的胚系杂合性缺失是该家族性肾癌先征者临床表征的病因学基础。家族性肾癌家系中VHL基因的胚系变异筛查可作为一种有效的手段来预测个体患者预后。

关键词： 转基因作物   非预期效应   代谢组学   实质等同性  

摘要： 应用代谢组学方法分析转基因作物的化学组分,有望获得更多的植物细胞内化学成分数据信息,这些数据信息有助于评价转基因作物是否由于遗传转化而导致了非预期效应的发生,或转基因作物与来源亲本间不存在显著的差异,即是否具有实质等同性。本文介绍了转基因作物安全评价的一般性原则、非预期效应的概念、成因及代谢组学在转基因作物的非预期效应评估中的应用,旨在为转基因作物的安全性评估提供参考。

关键词： 人胚胎干细胞   成年造血   Runx1c   报告细胞系   CRISPR-Cas9  

摘要： Runt相关转录因子1c(Runt-related transcription factor 1c,Runx1c)与成年造血以及造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的产生密切相关,为了动态追踪人早期造血发育过程中Runx1c的表达,利用双切质粒载体联合瞬时转入B细胞淋巴瘤-特大(B-cell lymphoma-extra large,BCL-XL)基因的CRISPR-Cas9技术高效地构建了人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)来源的Runx1c-mNeonGreen报告细胞系,并经PCR、Sanger测序验证构建成功。随后,利用免疫荧光技术、实时荧光定量PCR技术、流式细胞术、畸胎瘤实验和数字化核型分析技术进行验证,发现该报告细胞系仍具有hESC样的多能性且未发生染色体异常和变异。此外,通过hESC体外单层诱导造血分化方法,利用流式细胞术追踪人早期造血发育过程中Runx1c的表达,结果表明利用该报告细胞系可以动态追踪人早期造血发育中Runx1c的表达。研究结果为阐明成年造血过程提供了新思路,并为体外产生功能性血细胞提供了可能。

关键词： 材料基因工程   高通量计算   高通量实验   大数据技术  

摘要： 材料基因工程是材料领域的颠覆性前沿技术,将对材料研发模式产生革命性的变革,全面加速材料从设计到工程化应用的进程,大幅度提升新材料的研发效率,缩短研发周期,降低研发成本,促进工程化应用。本文从基础理论与方法、关键技术与装备、新材料研发与工程化应用、人才培养以及材料基因工程新理念的形成和推广等方面,综述了中国材料基因工程的研究进展,并提出了未来发展方向建议。

关键词： 基因工程技术   生物燃料   新能源开发   生态环保  

摘要： 基因工程技术是对基因的结构和功能进行研究的现代化技术类型。在当前普遍追求可持续发展的环境下,人类社会的发展迫切需要新的能源来替代煤炭、石油等传统能源,助力工业生产和日常生活向生态环保的方向转变。近年来的实践表明,基于基因工程技术基础上开发出的生物燃料开发可以成为传统能源的替代品,并对生态环境的破坏性影响很小。因此,关于基因工程技术在生物燃料开发中的应用研究便成为技术应用研究的重点。文章在概括介绍基因工程技术的基础上,对当前生物燃料的开发状况进行概括说明,并就基因工程技术在生物燃料中的应用现状及未来探索发展加以探索分析,以促进基因工程技术在生物燃料中的进一步应用。