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关键词： 基因编辑技术   基因治疗   基因增强   社会公平   生命伦理学原则  

摘要： 世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿在第二届国际人类基因组编辑峰会前公布,该事件引起全球科学界等对其安全性以及伦理性的热议。近来,基因编辑技术的快速发展不仅给科学发展带来了革命性突破,同时也在伦理方面带来了极大的挑战。CRISPR/Cas基因编辑技术,作为现代最为方便、快捷、高效和低廉的基因编辑技术,目前已被很多人掌握和运用,该技术以极快的速度持续发展。在此背景下,本文围绕基因编辑技术应用中带来的伦理问题展开讨论,结合生命伦理学原则予以剖析论证,并提出可操作性强的措施建议。在介绍选题缘由及研究综述基础上,本文第一章对于基因编辑技术以及基因编辑婴儿事件予以梳理由此引出“技术应用中的伦理问题”。基因编辑技术可以大致分为体细胞基因治疗、生殖细胞基因治疗、体细胞基因增强和生殖细胞基因增强。目前可以合法应用在临床的只有体细胞基因治疗。基因增强作为一种“基因优化”会涉及到诸多伦理问题,对生殖细胞进行基因编辑会使修改后的基因遗传给下一代,进而影响人类基因库。第二章梳理现有生命伦理学原则,把“敬畏生命”原则和比彻姆四原则作为基因编辑婴儿事件伦理审视的依据。生命伦理学原则虽然表述不同,但是有着众多相似的价值内核。原则与原则之间也没有绝对的优先级,原则之间是平等的,不过在具体的伦理应用情景中可能存在优先级。敬畏生命原则、自主原则、不伤害原则、公正原则和有利原则以作为基因编辑技术应用伦理风险解决的突破口。敬畏生命原则启示我们生命没有高低贵贱,要尊重生命的多样性,不要试图“扮演上帝”。即使一个人没有“工具性价值”,他的生命也并不是没有意义,没有人有权利对其绝育或者基因改造。同时,基因决定论的思想暗含在“基因编辑婴儿”事件中。人们在看待基因编辑技术时往往会陷入一种误区,即认为基因改造可以决定人未来的性状,也就是“基因决定论”思想;尊重自主原则启示要做好充分的知情同意;有利原则和不伤害原则启示我们要建立合理的“风险收益比”,尽可能风险最小化和收益最大化;公正原则启示我们充分考虑程序公正、机会公正等问题。第三章集中探讨“基因编辑婴儿所引发的伦理问题”,并结合生命伦理学原则,从生命伦理学视角对“基因编辑婴儿事件”予以进一步探究。本文认为“基因编辑婴儿”属于生殖细胞基因增强,不仅会影响下一代基因,而且存在社会公平风险、权利风险、生命价值风险等伦理风险。在权利风险中,基因编辑婴儿没有做到“真正的”知情同意。父母这种妄图修改后代基因的行为本身侵犯了后代开放性未来权利,让其不再是“自己未来生活的唯一作者”。同时,基因编辑技术不可避免的会涉及到人的基因隐私权的保护,基因隐私不仅仅是个人隐私,也是群体隐私,在实际操作中我们需要结合个人知情同意和群体知情同意。在社会公平风险中,基因增强这种“追求完美”的方式存在巨大的公平风险。基因增强已超过了治疗的目的,旨在提高人的性状和能力。它会降低人后天努力的价值、消解人对于“自然天赋”的尊重,使人不再对生命抱有一颗敬畏之心。基因增强会使得人与人之间的差距越来越大,社会两极分化严重,引发社会上严重的基因歧视。在人类生命价值风险中,基因增强消解了自然人和自然家庭的“自然性”,使得自然人和自然家庭不再是“道德选择之前不可选择的”道德伦理的逻辑起点。此外,基因增强损害了后代的尊严,也存在危及人的完整性的问题。第四章结合生命伦理原则的指导,在伦理审查机制、临床应用法律法规、行业自律和公众监督四个方面,提出操作性较强的建议。

关键词： 人胚胎干细胞   神经前体细胞   移植   脑梗死   继发性损伤   丘脑   BDNF   TrkB   神经营养   小胶质细胞极化   炎症   神经保护作用  

摘要： 背景与目的: 脑卒中是威胁人类健康的主要疾病之一,具有高发病率、高致残率和高死亡率等特点,以脑梗死为主要代表的缺血性脑卒中约占全部脑卒中的80%-85%。溶栓治疗和血管内治疗是目前治疗急性脑梗死最有效的方法,但由于治疗时间窗短,容易出现出血并发症,故它的临床应用受到限制。尽管动物实验已经证明神经保护剂治疗脑卒中是有效的,但目前仍无临床研究证实其有效性。因此,寻找更加有效的治疗脑卒中的方法是目前亟待解决的问题。近年来,干细胞治疗因其多效性而受到广泛关注,随着对干细胞研究的深入,利用干细胞治疗脑卒中已经成为脑卒中治疗领域的热点。 神经干细胞（Neural stem/precursor cells,NPCs）是一种具有自我更新能力的多能细胞,其特征是能够沿神经谱系分化为神经元、胶质细胞和少突胶质细胞。移植到体内的NPCs主要通过两种方式发挥作用,1)直接作用:参与中枢神经系统的功能性神经替代,2)间接作用:旁分泌效应,即NPCs合成治疗性基因产物,在脑损伤后为宿主脑组织提供神经营养支持、抑制炎症反应、增强内源性修复作用等。脑梗死不仅造成梗死灶局部及其周围脑组织损害,还可导致与病变部位存在神经纤维联系但远离原发病灶、非受损血管供血区的相关脑组织发生继发性损害,如丘脑、黑质、脊髓等。然而,既往的研究主要关注NPCs移植后对梗死灶变化、干细胞移植物命运及NPCs与宿主脑组织的结构和功能整合等方面的影响,NPCs对远隔继发损伤部位的治疗作用知之甚少。我们前期研究证实在大鼠一侧大脑中动脉远端闭塞（Distal middle cerebral artery occlusion,dMCAO）后1-4 w,远离皮层梗死灶的同侧丘脑腹后核（Ventral posterior nucleus of thalamus,VPN）出现神经元丢失和胶质细胞激活。大鼠皮层梗死后移植人胚胎干细胞来源的神经前体细胞（human embryonic stem cells-derived neural progenitor cells,hESCs-NPCs）能否减轻皮层梗死后同侧丘脑VPN区损伤,迄今未见报道。移植hESCs-NPCs通过何种机制对皮层梗死后同侧丘脑VPN损伤发挥神经保护作用,也有待阐明。 基于此,本研究首先在体外诱导、分化、扩增得到hESCs-NPCs,并于dMCAO48 h后将hESCs-NPCs移植至皮层梗死边缘区,4 w后观察移植的hESCs-NPCs的存活、分化、迁移以及对内源性神经发生的影响;观察移植hESCs-NPCs后对大鼠皮层梗死后的运动、感觉、学习和记忆等功能的影响。其次,明确移植hESCs-NPCs能否通过增强脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）/酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor B,TrkB）信号通路,重建皮层-丘脑之间的神经纤维联系,维持同侧丘脑VPN区突触结构完整性,从而减轻大鼠大脑皮层梗死后继发丘脑VPN区损伤。最后,证实移植hESCs-NPCs是否通过调控小胶质细胞的极化,抑制炎症反应,从而减轻大鼠皮层梗死后同侧丘脑VPN区损伤。 材料与方法: 体外实验:本研究采用了两种人ESCs株,即未经基因编辑的H1细胞株和基因编辑的带绿色荧光的H1-CAG-EGFP细胞株,均由中国科学院广州生物医药与健康研究院潘光锦教授研究组提供。利用单层贴壁诱导法将GFP-hESCs诱导分化成神经前体细胞。通过免疫荧光、流式细胞仪检测GFP-hESCs多潜能性基因,包括OCT4（Octamer binding transcription factor 4,八聚体结合转录因子4）、SSEA4（Phase specific embryonic antigen 4,阶段特异性胚胎抗原4）、NANOG。通过畸胎瘤实验检测GFP-hESCs具有向三胚层分化的能力。免疫荧光、RT-q PCR检测hESCs来源的神经前体细胞的生物标志物,包括Nestin、Sox1（Sry-related-high-mobility-group box1,Sry相关高迁移率组盒1）、Sox2（Sry-related-high-mobility-group box2,Sry相关高迁移率组盒2）、Pax6（Paired box protein 6,配对盒蛋白6）。 体内实验:本研究选取成年雄性SD（sprague-dawley）大鼠,体重约280-320g,采用电凝法制作大鼠大脑中动脉远端闭塞引起的局灶性皮层梗死模型,于dMCAO48 h后将hESCs-NPCs移植至皮层梗死边缘区,移植细胞量为3.0*10～5,4 w后免疫荧光观察Sham+hESCs-NPCs组、dMCAO

关键词： mESC   Igf2-H19   CRISPR/dCas9   DNA甲基化   H3K9me3  

摘要： Igf2-H19印记基因簇在调控胎儿及胎盘正常生长发育中发挥重要作用。研究表明,DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA参与调节印记的建立、维持和表达调控。本研究通过CRISPR/dCas9技术改变雌性小鼠胚胎干细胞中Igf2-H19基因簇内印记调控区(Imprinting control region,ICR)第三和第四个差异甲基化区域(m3和m4)的DNA甲基化修饰,研究印记基因表达调节中DNA甲基化和组蛋白修饰的协同作用。1.小鼠胚胎干细胞系Igf2-H19位点的DNA甲基化小鼠囊胚内细胞团在2i/L培养体系中培养后分离建立9株mESCs,获得的mESC系克隆形态呈“dome”状,碱性磷酸酶染色阳性,染色体数目正常;细胞表达多能性基因Nanog、Oct4和Sox2,增殖能力较强,具有三胚层分化潜力;DNA甲基化测序显示,雌性mESC中Igf2-H19基因簇内m3和m4区域的DNA甲基化水平低于雄性mESC。通过CRISPR/dCas9-Dnmt3a技术分别靶向修饰Igf2-H19基因簇内m3和m4的DNA甲基化,结果表明,靶向m3的修饰可提高该区域DNA甲基化水平,但Igf2和H19表达均未发生变化;靶向m4的修饰同样可提高该区域DNA甲基化,同时Igf2表达升高,H19表达降低;同时靶向修饰m3和m4区域后,相应区域DNA甲基化水平升高,Igf2表达升高,H19的表达降低。对比DNA去甲基化药物5-Aza-dC的作用,当使用20μM最适浓度处理细胞后,m4区域DNA甲基化水平降低,Igf2表达降低,H19表达升高。结果表明,m4区域DNA甲基化的改变对Igf2和H19的表达调节具有作用。2.H19 ICR区域DNA甲基化与组蛋白修饰的协同作用为进一步探究DNA甲基化和组蛋白修饰的协同作用对Igf2-H19基因座的调节,本研究利用siRNA方法对雌性m ESC中H3K9me3的甲基转移酶Setdb1进行干扰。免疫荧光和ChIP-qPCR均表明,干扰Setdb1表达后组蛋白H3K9me3修饰显著降低,m3和m4区域内DNA甲基化水平也降低,同时H19的表达升高,Igf2表达没有变化。另外,本研究分析了CRISPR/dCas9-Dnmt3a靶向DNA甲基化后组蛋白修饰的变化。ChIP-qPCR结果表明,DNA甲基化升高的m3和m4区域H3K9me3略有升高,H3K4me3无变化;而5-Aza-dC降低DNA甲基化后两者均没有变化。在干扰Setdb1和5-Aza-dC处理后,TET3在m3和m4区域的富集没有变化。综上所述,本研究分离鉴定的mESC中Igf2-H19基因簇内m3和m4区域的DNA甲基化水平在雌性细胞低于雄性细胞,CRISPR/dCas9-Dnmt3a系统可以靶向增加DNA甲基化。m4区域DNA甲基化的改变影响Igf2和H19的表达,m3和m4区域内DNA甲基化水平随H3K9me3降低而降低,同时H19的表达升高;但H3K9me3并未严格随DNA甲基化的改变而变化。上述表明,DNA甲基化和组蛋白修饰协同作用于印记基因Igf2的表达调节。

关键词： hES-MSCs   条件培养基   皮肤烫伤   炎症   干细胞治疗  

摘要： 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种可以分化为骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞的成体干细胞。其免疫原性较低,在进行异种移植时不会产生免疫排斥反应。同时间充质干细胞能够分泌多种生物活性因子,这些活性因子能够调控损伤组织的免疫与炎症反应,加快组织结构的重建,从而促进损伤组织的修复。因此越来越多的研究开始关注间充质干细胞治疗组织损伤的可行性。 烧伤是一种复杂的皮肤损伤类型,大面积或深度的烧伤会引发全身剧烈的炎症和免疫反应,延迟伤口的愈合。间充质干细胞具有抗炎和促进损伤组织结构重建的作用,目前已经广泛应用于烧伤治疗的临床前研究和临床试验中。然而在严重烧伤的临床治疗中需要的间充质干细胞的数量非常庞大,且成体组织来源的间充质干细胞在应用于治疗时,其活性会随着扩增次数的增多而降低,其功能也会随之减弱。从人胚胎干细胞中分化而来的间充质干细胞活性高、均一性好、可重复获得,有望应用于治疗烧伤。本实验室前期研究获得了一种人胚胎干细胞来源的间充质干细胞(hES-MSCs)。该细胞在体外培养条件下能够形成克隆,并且能够被诱导分化成为骨细胞和脂肪细胞。流式细胞术结果证实hES-MSCs不表达MSCs阴性表面标志物CD45,高表达MSCs阳性表面标志物CD90、CD29、CD105。 为了探索hES-MSCs治疗深度烧伤的效应和机制,本研究通过构建小鼠深二度烫伤模型来进行相关实验。结果证实,与未处理组的烫伤小鼠相比,在烫伤皮肤周围注射hES-MSCs或其条件培养基治疗后,烫伤小鼠的生存率得到了显著提高。伤口面积变化的统计结果显示注射hES-MSCs或其条件培养基后,烫伤小鼠皮肤表皮的愈合速度更快。HE染色结果也证实两种方式的处理能够促进小鼠皮肤组织的恢复。通过qPCR检测各组小鼠皮肤中细胞因子mRNA的水平,两种处理方式能够显著降低烧伤小鼠皮肤中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的水平,同时显著提升抗炎因子IL-10mRNA的水平。另外,促进皮肤组织修复的生长因子EGF、TGF-β1 mRNA的水平也显著提高。血小板-内皮细胞黏附分子CD31通常与组织损伤修复正相关,烫伤小鼠在移植hES-MSCs或其条件培养基后组织中CD31 mRNA的水平也显著提高。同时还检测到两种处理都能够显著降低小鼠脾脏中促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β mRNA的水平。 综上所述,人胚胎干细胞来源的间充质干细胞具有间充质干细胞的特性,并表达与间充质干细胞相似的表面标志物。hES-MSCs或其浓缩的条件培养基通过抑制深二度烫伤小鼠的炎症反应从而促进皮肤组织的再生和修复。考虑到hES-MSCs可以从人胚胎干细胞大量分化获得,为hES-MSCs代替其它来源的间充质干细胞治疗重度烧伤提供更多的可能。

关键词： 皮肤损伤修复   毛囊再生   间充质干细胞   胚胎干细胞  

摘要： 皮肤全层缺损的完美再生不仅包括创面的覆盖,还包括功能性的皮肤附属器再生。然而现有的组织工程皮肤与正常皮肤相比仍有一定差距,特别是皮肤附属器的缺失,影响着患者生存质量和心理健康,原因之一是未找到合适的种子细胞。越来越多证据显示间充质干细胞(MSCs)能够促进皮肤和毛囊再生,但体外扩增有限,不足以进行大面积皮肤缺损修复。人胚胎干细胞来源的MSCs(h ESC-MSCs)由于来源稳定、可体外大规模扩增、均一性高以及可质控等优点而受到广泛关注,是一种潜在的种子细胞。然而现有的人胚胎干细胞(h ESCs)向MSCs分化的方法效率不高且分化出的细胞功能不稳定。本课题开发了一种易质控的三阶段分化方法,高效地产生了来源明确的MSCs;单细胞分析数据显示h ESC-MSCs具有特异性表达的基因,如IGFBP5、HIF1A及TGFB2等,GO分析显示h ESC-MSCs与细胞周期正向调节、间充质发育、上皮间质转化、上皮细胞迁移相关;通过小鼠全层皮肤缺损实验,我们证实h ESC-MSCs可以促进伤口愈合,尤其在注射h ESC-MSCs的伤口周围毛囊增生显著;体外细胞共培养和si RNA沉默实验证明了TGF-β2是h ESC-MSCs促进毛囊细胞增殖的重要途径。本研究对于开发稳定、安全、有效的组织工程化皮肤的种子细胞提供了新来源,为h ESC-MSCs促进皮肤修复,尤其是毛囊再生提供了理论依据。

关键词： 转基因作物(GMC)   专利计量   农业生物技术  

摘要： 转基因作物(genetically modified crops, GMC)以其优良的性状和品质带来巨大的农业、社会经济和环境效益,被认为是缓解全球粮食危机的重要途径之一。本文基于incoPat数据库收录的专利数据,对转基因作物的专利研发情况进行分析。结合定量分析和定性研究,探讨转基因作物的全球专利研究态势、技术研发热点、主要国家的科研水平、重要专利申请人的研发布局。研究表明,近二十年,转基因作物专利数量不断增长,转基因大豆和转基因玉米是研发重点;美国是最主要的技术来源国,主导转基因作物专利研发;孟山都、先锋种业、斯泰种业、先正达是最主要的专利申请人,重点关注多种性状组合的转基因作物种质资源创制;中国研究者较多关注重要农艺性状基因挖掘。最后,本研究提出整合优势资源,抢占市场先机;促进院企合作,加速产业化进程;重视专利布局,完善防御体系的发展建议。本研究展现了转基因作物全球专利研发的全景图,为转基因作物领域研发布局和创新决策提供参考。

关键词： 胚胎干细胞   超级增强子   Klf5  

摘要： 胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)是囊胚期内细胞团(Inner Cell Mass,ICM)细胞在适当的条件下体外培养得到的一类细胞,其具有无限自我更新和分化为胚胎三个胚层的能力,在研究胚胎发育、细胞治疗、组织修复和再生等方面应用广泛。近年来的研究表明超级增强子(Super Enhancer,SE)作为细胞类型特异性的大型顺式调控元件,在调控ESCs多能性和自我更新中起着关键作用,提示我们可以将SE作为研究胚胎干细胞分子调控机制新的切入点。在本研究中,通过分析小鼠胚胎干细胞(mouse Embryonic Stem Cells,m ESCs)H3K27ac的染色质免疫共沉淀测序(Chromatin Immunoprecipitation sequencing,CHIP-seq)数据,鉴定出334个小鼠胚胎干细胞中的SE,并选取排名第一的SE进行研究。与SE在同一拓扑结构域(Topologically associating domain,TAD)内存在一个在胚胎干细胞中发挥着重要作用的基因-Klf5(Kruppel like factor 5),因此,我们将这个超级增强子命名为Klf5邻近超级增强子(Klf5 adjacent Super Enhancer,K5aSE)。本研究首先利用CRISPR-Cas9技术对K5aSE进行敲除,发现与WT(Wild type)细胞相比,K5aSE的缺失显著影响m ESCs的增殖和分化潜能,同时Klf5基因表达几乎被废除。而敲除Klf5同样影响m ESCs的增殖和分化,并且在K5aSE敲除的细胞系中过表达Klf5,能够恢复部分表型和基因表达,说明Klf5是其邻近SE发挥功能作用的重要下游靶基因。与此同时,虽然两种敲除产生相似的表型,但二者对m ESCs三胚层分化的调控作用不一致:K5aSE敲除抑制内胚层的分化并促进中外胚层的分化,而Klf5基因敲除主要抑制神经外胚层的分化;而且K5aSE敲除细胞系中大部分表达下调的基因,过表达Klf5不能够使其表达恢复,这些结果提示K5aSE可能还有其它靶基因。因此,为了发现K5aSE的其它靶基因,我们通过环状染色质构象捕获(4C-seq)实验找到了与K5aSE相互作用并且在其敲除后表达下调的靶基因,说明除Klf5外,K5aSE可能还调控其它基因与Klf5基因共同发挥作用,维持m ESCs的增殖和胚层分化。综上,我们发现K5aSE作为一个新的功能性SE,对维持m ESCs增殖和胚层分化十分重要,并且验证其下游靶基因Klf5在其中发挥重要的调控作用,同时也发现可能存在其它靶基因与Klf5的调控处于动态平衡。本研究为小鼠胚胎干细胞自我更新和多能性的分子机制提供了新的见解。

关键词： 隐源性肝癌   DNA甲基化   DMR  

摘要： 目的:本研究通过高通量靶向DNA甲基化测序技术,获得并分析隐源性肝癌与癌旁非癌肝组织的差异性甲基化谱,获得差异性甲基化修饰区域(DMR)和差异性甲基化修饰区域相关的基因(DMG),通过生物信息分析获得关键的信号转导通路,通过实时荧光定量PCR检测相关信号通路中的基因的m RNA的表达,为研究隐源性肝癌发生的表观遗传学机制提供依据。方法:我们使用Sure SelectXT人甲基化测序系统(Sure SelectXT Methyl-Seq Target Enrichment System)对安徽医科大学第一附属医院2017年1月至2018年5月行肝癌切除术的3例隐源性肝癌患者的癌组织及癌旁非癌组织进行了目标区域DNA甲基化测序(targeted DNA methylation sequencing),并进行生物信息分析;实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,Real-time RT-q PCR)检测所鉴定信号通路中HOXB-AS3、HOXB6、HOXB3、USP18、MAP3K6、TIRAP、TNNI2、SHC3、CTTN、TFAP2A的m RNA表达水平。结果:两种组织间筛选出38554个差异性甲基化位点(Differentially methylated sites,DMSs)和1728个差异甲基化区域(Differentially methylated regions,DMRs),与癌旁非癌组织相比,隐源性肝癌组织中Cp G高甲基化水平的DMSs共有21853个,Cp G低甲基化水平的DMSs共有16701个。隐源性肝癌组织中高甲基化DMRs共有868个,低甲基化DMRs共有860个,DMR主要分布于Cp G Island(55.4%),Cp G Island shore(60.8%),Cp G Island shelf(29.4%)和promoter(50.4%)等基因功能区域。通过基因注释获得DMR相关基因(DMG)2091个,与癌旁非癌组织相比,隐源性肝癌组织中与DMR相关的高甲基化基因有1129个,其中基因启动子区甲基化基因242个;与DMR相关的低甲基化基因有962个,其中202个基因的启动子甲基化差异显著。数据显示在隐源性肝癌组织中,DMRs中高甲基化比低甲基化更为常见。Real-time RT-q PCR实验结果显示,与癌旁非癌组织相比,隐源性肝癌组织中HOXB-AS3、HOXB3和MAP3K6的m RNA水平表达下调。而隐源性肝癌组织中TIRAP、SHC3、CTTN的m RNA水平表达上调。隐源性肝癌和癌旁非癌组织中HOXB6、USP18、TNNI2、TFAP2A的m RNA水平表达差异无统计学意义。DMG的GO富集分析表明,GO分类主要包括分子功能、生物进程和细胞组分三大类,高甲基化DMG在分子功能中主要富集于:结合(P=0.000140)、蛋白结合(P=1.32×10-6)、细胞骨架蛋结合(P=0.000709)和阳离子结合(P=1.29×10-3)等。低甲基化DMG在分子功能中主要富集于结合(P=7.93×10-10)、蛋白结合(P=5.58×10-5)、钙离子结合(P=5.19×10-7)、细胞外配体门控离子通道活性(P=4.75×10-5)等。DMR相关基因KEGG富集通路分析表明,高甲基化DMGs富集通路包括:雌激素信号通路(P=5.91×10-3)(基因包括ADCY4,ADCY2,ADCY8,ADCY7,EGFR,AK72,FOS,GPER1,KCNJ6,KCNJ9,NRAS,PIK3R2,PLCB2和MAP2K2)、Notch信号通路(P=9.04×10-3)(基因包括RBPJL,CTBP1,DTX1,HES5,JAG2,NOTCH4,NUMBL,NCOR2和MAML1)、调节干细胞多能性信号通路(P=1.26×10-2)(基因包括DLX5,APC2,AKT2,FGFR3,JAK2,JAK3,ZFHX3,NRAS,MAPK11,REST,MAP2K2,IK3R2,BMPR11A,WNT10A,FZD1,WNT5B和HAND1)和Rap1信号通路(P=1.41×10-2)(基因包括ADCY4,EPHA2,RASGRP2,EFNA5,RAPGEF3,ADCY8,RGS14,EGFR,ADCY2,ADCY7,AKT2,FGFR3,PFN3,NRNAS,RALGDS,FIK3R2,RALB,RALA,MAP2K2,MAPK11,PLCB2和CDH1)等通路,而低甲基化DMGs富集通路包括:癌症中蛋白聚糖(P=5.04×10-3)(基因包括FLNC,AKT1,CTTN,ANK1,GPC1,GFR,IGF2,HOXD10,MAPK11,MAP2K2,PIK3CD,PLC

关键词： 转基因作物   Bt Cry1Ab/Ac   时间分辨荧光试纸条  

摘要： 随着转基因作物种植面积的不断扩大,不仅需要对转基因作物进行定性检测,还需对其所表达的外源蛋白进行快速定量分析,用于判断转基因作物的抗虫或抗除草剂强度。本研究利用前期筛选的两株识别Bt Cry1Ab/Ac不同抗原表位的小鼠单克隆抗体4E5和1E6,以羧基荧光微球作为标记物与抗体1E6偶联,4E5单抗和羊抗鼠抗体作为试纸条检测线（T线）和质控线（C线）,制备了检测Bt Cry1Ab/Ac的时间分辨荧光试纸条。结合便携式荧光免疫分析仪,建立了定量检测转基因作物中Bt Cry1Ab/Ac外源蛋白的侧向层流免疫检测方法。通过筛选抗体量、反应时间等对试纸条进行优化,方法的检测时间为20 min,标准曲线线性方程为y=0.5804x-1.9123,相关系数R2=0.998,定量检出限为1.5 ng/mL。采用所制备的时间分辨荧光试纸条测定植物样品中Bt Cry1Ab/Ac外源蛋白的含量,与商品化试剂盒检测结果（检测时间为1.5 h）比较,两种方法检测结果相关性高（R2=0.999）,一致性良好。本研究建立的时间分辨荧光试纸条方法可作为快速、准确检测转基因作物Bt Cry1Ab/Ac外源蛋白的定量方法。

摘要： 20年前,人类基因组计划(HGP)绘制了它的第一份测序草图,对生物医学研究——无论是在实验室、在计算机上还是在整个科学界——均产生了深远的影响。大数据集和遗传图谱现在已成为指导科学和临床研究、药物开发和医疗实践的宝贵资源。人类基因组计划还给我们留下了一项重大任务,即了解基因组信息是如何引发细胞和有机体的发育、功能和机能障碍的,并充分利用这一知识促进人类健康和疾病治疗,而这项任务在20年后仍未完成。