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关键词： 高校   转基因作物   田间试验   生物安全管理  

摘要： 近年来,我国农业转基因生物技术研究与产业化发展稳步推进,高速发展的转基因技术对转基因生物安全监管提出了新的要求和挑战。高校作为从事转基因技术研究的重要力量,做好转基因作物田间试验生物安全监管工作尤为重要。文章阐述了转基因作物田间试验生物安全管理的重要性,列举了转基因作物田间试验生物安全管理的相关依据,从切实提高三大责任主体的安全意识、加强转基因试验基地硬件设施建设、建立健全转基因作物田间试验生物安全管理制度等方面,提出了进一步加强高校转基因作物田间试验生物安全管理的相关措施。

关键词： 高光效育种   基因工程   C_(3)植物   Rubisco   C_(4)途径   油茶  

摘要： 光合作用是地球上最重要的生命活动之一,植物的90%生物学产量直接来自于光合作用产生的有机化合物。本文回顾了C_( 3)植物高光效基因工程育种研究工作,重点介绍了C_( 3)碳同化途径的特点和Rubisco的修饰与改造,以及利用C_( 4)途径关键酶基因提高C_( 3)植物光合效率方面的研究进展。油茶作为主要的木本油料作物之一,营养物质需求巨大,具有CO_( 2)饱和点较低、补偿点较高,光合效率不高的C_( 3)植物特性。综述C_( 3)植物高光效基因工程育种研究进展,可为油茶高光效基因工程育种提供参考。

关键词： 观赏植物   启动子   组成型   组织特异性   诱导型   应用  

摘要： 综述了近30年来观赏植物转基因研究中使用的主要启动子类型,并对3类启动子(组成型启动子、组织特异性启动子和诱导型启动子)在基因工程中的应用效果进行了对比分析,深入探讨了观赏植物启动子研究和应用中存在的问题,以期为观赏植物基因工程研究中实现基因的高效特异表达提供研究思路。

关键词： 胚胎干细胞   心肌分化   自噬   雷帕霉素  

摘要： 目的雷帕霉素是小分子mTOR抑制剂,可激活细胞自噬。本研究检测了雷帕霉素对胚胎干细胞(ES细胞)向心肌分化的影响。方法采用拟胚体(embryoid body,EB)加抗坏血酸诱导ES细胞向心肌分化。悬浮诱导阶段添加自噬激动剂雷帕霉素或抑制剂羟氯喹,通过免疫印迹检测LC3蛋白剪切以监测细胞自噬水平,通过检测EB球的心肌搏动百分比以及心肌分化标志物troponin-T和α-actinin的表达来评估细胞分化效率。采用real-time PCR检测心肌分化转录因子Mef2c和Isl1 mRNA表达,免疫印迹法检测Oct4表达,进一步阐释雷帕霉素的效应机制。结果雷帕霉素能够诱导自噬,促进LC3剪切,促进EB球产生自发搏动,增强心肌分化标志基因表达。机制研究发现,雷帕霉素促进心肌转录因子Mef2c和Isl1 mRNA的表达和Oct4在分化细胞的下调。而自噬抑制剂羟氯喹能拮抗雷帕霉素的上述效应。结论雷帕霉素诱导自噬可以促进心肌转录因子表达和促进干性因子Oct4水平下调,从而促进心肌分化。

关键词： 基因工程   情境化教学   核心素养   高中生物学  

摘要： 在基因工程的专题复习中,通过引入HPV疫苗的研制这一真实情境,引导学生设计疫苗研制的技术路线图,让学生在巩固知识点的同时,感悟生物工程技术在实际生产生活中的应用,达到培养学生的生命观念、科学思维、科学探究和社会责任等生物学核心素养的目的。

关键词： H9胚胎干细胞   心脏类器官   诱导分化  

摘要： 目的探索人胚胎干细胞H9诱导心脏类器官方法的研究。方法首先,我们从碱性磷酸酶以及干细胞干性标志物鉴定人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)的全能性。然后,采用U型孔诱导H9向中胚层(mesoderm,MES)分化,进而继续诱导向心脏类器官分化。在分化过程中,我们观察不同时间点的心脏类器官形态变化,并选取相应时间点,采用real-time PCR、western blotting、细胞免疫荧光化学技术鉴定诱导分化方法的合理性。结果光镜下,H9细胞呈克隆状生长,ALP显示呈蓝紫色且干细胞干性标志物OCT4在细胞核内表达呈强阳性(绿色)。Real-time PCR结果显示,随着时间的推移,心肌细胞标志基因ACTN2、cTnT和MYL2以及非心肌细胞标志物在一定的时间节点后呈爆发式上升;western blotting显示第5天后开始递增表达;细胞免疫荧光显示,分化18天的心脏类器官ACTN2阳性表达(绿色),肌节排列不规则且肌丝分布不均匀;而诱导40天时的心脏类器官中心肌细胞呈杆状,肌节排列整齐,肌丝分布于整体心肌细胞,CX43高表达,趋向于成熟。结论此方法成功诱导H9向心脏类器官分化。

关键词： 血液细菌DNA谱   重症急性胰腺炎   高通量测序  

摘要： 目的:感染及其并发症是重症急性胰腺炎(SAP)病人死亡的重要原因。然而,目前对SAP病人外周血微生物菌群的研究却十分有限。本研究旨在探讨SAP病人血液中细菌DNA谱图组成特征。方法:应用基于16S rDNA的高通量测序技术,对33名SAP病人进行了观察研究,以确定血液的细菌DNA谱图。结果:测序结果表明,在SAP病人的外周血,检测到由多种细菌DNA构成的微生物群,主要由变形菌门(Proteobacteria)(56.6±18.2)%、拟杆菌门(Bacteriodetes)(20.5±12.4)%、硬壁菌门(Firmicutes)(15.0±9.5)%和放线菌门(Actinobacteria)(5.2±3.1)%组成。这些细菌大多数(>80%)为肠道共生菌或条件致病菌。结论:本研究初步确定了SAP病人外周血细菌DNA谱图特征,外周血菌群形成可能是肠道菌群易位的结果,研究结果为SAP病人肠源性感染的诊断和防治提供了参考。

关键词： 重症肝病   肝向分化   胚胎干细胞   生理病理   类肝细胞   分化能力   力学微环境   体外分化  

摘要： 目的人胚胎干细胞(hESC)能在体外分化为类肝细胞(HLC),可作为成体肝细胞的替代在重症肝病治疗和研究中发挥重要作用。hESC分化能力及终末分化细胞功能受周围物理力学因素调控,尤以微环境中硬度和拓扑耦合调控为甚。基于肝脏生理病理背景制备不同硬度耦合拓扑结构基底探讨其对hESC肝向分化的影响及机制。

关键词： 胚胎干细胞   抗坏血酸   动态悬浮培养   细胞老化  

摘要： 在动态培养体系的培养过程中向培养基添加抗坏血酸后,可延迟小鼠胚胎干细胞(Mouse embryonic stem cells,mESCs)内与老化相关的β-半乳糖苷酶活性显著升高的时间,从培养6 d延迟至10 d;同时,实验组细胞内的活性氧水平均低于对照组,两组之间在培养8~9 d时呈显著性差异;在培养8 d时,实验组mESCs的总细胞扩增倍数和SSEA-1+细胞的扩增倍数分别为53.9±1.5和51.9±6.3,显著高于对照组的41.3±0.9和40.1±3.9。可见,抗坏血酸可显著降低细胞内活性氧水平,明显改善动态培养时mESCs的老化状态,促进mESCs的体外扩增。该结果为解决胚胎干细胞规模化培养过程中细胞老化问题提供了一种解决思路。

关键词： H9细胞   慢病毒   DPF2-RNAi   稳定细胞系  

摘要： 目的对DPF2干扰慢病毒感染H9细胞,获得稳定的人胚胎干细胞克隆细胞系的方法学探讨。方法将各型带有GFP荧光标签的DPF2-RNAi慢病毒导入H9细胞中,嘌呤霉素筛选前后,相差和荧光显微镜下观察细胞形态和细胞感染效率;Western blot鉴定感染后的各组H9细胞系内DPF2蛋白表达水平。结果成功获得慢病毒感染后的H9稳定细胞系,成功筛选出#25540 DPF2-RNAi慢病毒,其沉默或敲低H9细胞的效率更高,稳定性更好。结论应用携带DPF2-RNAi的慢病毒感染人胚胎干细胞,使目标基因沉默,探索建立稳定细胞系的方法,为进一步研究提供细胞模型。