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关键词： 植物   耐盐   基因工程   研究进展  

摘要： 随着人口数量不断增加,可利用耕地面积逐年减少,土壤盐渍化日趋严重,作物种植范围不断缩小,土壤盐碱化已成为影响农作物产量提升的一个主要限制因素。本文综述了植物耐盐机理研究、耐盐相关基因克隆及其在基因工程中的应用等方面的最新研究进展,并对耐盐转基因植物应用前景进行了展望,为耐盐转基因植物育种提供参考依据。

关键词： EB病毒   纳米颗粒   外泌体   类病毒颗粒   铁蛋白自组装纳米颗粒  

摘要： EB(Epstein-Barr)病毒普遍性感染人类并引发多种病毒相关性癌症,其中鼻咽癌与EB病毒感染相关性最高,并在我国广东等地区发病率极高,是我国重点防治的十大恶性肿瘤之一。截至目前,没有任何一款上市可接种的EB病毒防治性疫苗,针对EB病毒相关疾病的免疫治疗手段在临床试验中也收效甚微。近年来,纳米颗粒基因改造技术的飞速发展为EB病毒的防治带来了新希望。新型功能化纳米颗粒疫苗载体具有高稳定性、高生物兼容性、高安全性及多功能联合等优势,已被各国团队用于EB病毒预防及治疗的研究中,并取得了一定的进展。该文介绍并评述了国内外研究小组利用功能化外泌体纳米颗粒、类病毒颗粒、铁蛋白自组装纳米颗粒以及一些其他类型的纳米颗粒所开展的EB病毒防治疫苗的研究进展,并对功能化纳米颗粒在EB病毒疫苗临床转化过程中可能面临的难题和挑战进行了展望。

关键词： 慢病毒转染   胚胎干细胞   诱导性多能干细胞   细胞筛选  

摘要： 目标:提供一种能够显著提高慢病毒稳定转染人多能干细胞的方法,并建立一种简便无损的转染细胞筛选方法。方法:在慢病毒转染人多能干细胞过程,分别比较添加与不添加Y-27632情况下细胞形态的动态变化规律,以及细胞不同形态下对慢病毒颗粒的摄入能力差异,优化建立高效的慢病毒转染方法。随后,设计并研制可视化的简便显微操作装置,探索在荧光显微镜辅助下挑取转染的阳性单克隆细胞建系的技术,建立较为简便的转染细胞纯化新方法。结果:正常培养的人多能干细胞(hESC、hiPSC),添加Y-27632后6 h集落形态发生明显变化,细胞呈现出明显长梭形,集落松弛,细胞表面积显著增加;去除后6 h集落恢复正常;常规培养的多能干细胞克隆,慢病毒主要倾向于进入集落外围或局部细胞;经Y-27632提前处理6 h,细胞集落松驰、表面积显著增加的多能干细胞,慢病毒能够较为均匀地感染集落外围与内部细胞,显著提高慢病毒转染效率。利用毛细玻璃管,自主设计制作了一款显微镜下可视化的细胞单集落挑选器件,在显微镜辅助下能够简便地进行阳性克隆细胞的挑选建系,从而在常规实验室即可完成,取代具有一定细胞损伤效应的嘌呤霉素筛选及需要专业设备的流式分选方法。结论:在慢病毒转染过程中,常规培养的hESC/i PSC集落较为致密,对慢病毒感染具有一定抵抗性;小分子化合物Y-27632使得hESC/i PSC克隆集落结构相对松散,表面积增加,显著提高了对慢病毒的易感性,提高了感染效率;成功设计了一种简便且对细胞无毒性的显微操作器件,在常规实验室条件下,可有效取代流式分选及药物筛选,实现细胞单克隆的挑选建系。

关键词： 基因敲除   综合实验   基因工程   实验教学  

摘要： 基因编辑技术是基因工程领域的最新发展和最基础的技术手段,常规的基因工程实验教学以基因克隆和表达实验为主,缺乏对基因编辑技术的训练。通过创新基因工程实验教学实践过程,优化基因克隆表达实验内容,结合成熟科研项目,开发了基因敲除实验内容,实施四年来效果良好,使学生对基因组编辑技术有所了解,在基因操作技能上有所提高。

关键词： 法医遗传学   亲子鉴定   DNA测序   线粒体DNA   单核苷酸多态性   高变区  

摘要： 1案例1.1简要案情因申报户口需要,养父母携养女来本所,要求对养父母与养女之间是否存在亲生血缘关系进行鉴定。鉴于养父母各有一个姐姐,还要求对养父母与养女是否来源于同一母系进行鉴定。

关键词： 肝硬化   肠道菌群   DNA测序   肠黏膜屏障  

摘要： 目的观察乙肝肝硬化患者肠道菌群对肝硬化小鼠肠黏膜屏障功能及肝硬化进程的影响。方法收集西安交通大学第二附属医院2017年9月至2018年6月入院的乙肝肝硬化患者和健康人的粪便样品各12例,16S rDNA测序分析肠道菌群结构并制备菌液。雄性C57BL/6小鼠采用随机数表法分为4组:正常对照组(HC组)、肝硬化模型组(LC组)、模型组+健康人菌液(FMT-HC组)、模型组+患者菌液(FMT-LC组)。造模同时用菌液灌胃处理小鼠,持续12周。苏木精-伊红染色观察结肠病理形态,酶联免疫吸附试验和荧光探针检测肠黏膜屏障损伤,实时定量聚合酶链反应和免疫荧光检测肠黏膜屏障和肝纤维化相关因子的表达。两组间比较采用t检验,多组间比较采用One-way ANOVA分析。结果FMT-LC组小鼠的结肠中黏蛋白-2和闭合蛋白-2的表达量低于FMT-HC组(0.36±0.21比1.00±0.36,t=4.659,P<0.01和0.61±0.42比1.00±0.17,t=2.596,P<0.05),外周血中异硫氰酸荧光素-葡聚糖和脂多糖的浓度高于FMT-HC组[(9.32±2.24)μg/ml比(5.23±1.34)μg/ml,F=15.118,P<0.01和(88.55±10.50)ng/ml比(76.48±10.13)ng/ml,F=5.473,P<0.05],差异均有统计学意义。FMT-LC组小鼠的肝脏中转化生长因子-β1(3.39±2.67比0.95±0.12,t=2.744,P<0.05)等多种促纤维化因子和α-平滑肌肌动蛋白的表达量高于FMT-HC组,肝损伤加重。结论乙肝肝硬化患者肠道菌群降低肝硬化小鼠肠黏膜屏障功能,促肝硬化发展。

关键词： 基因工程实验   混合式教学改革   实验教学   创新能力  

摘要： 生物学实验教学是生命科学类人才培养的重要环节。面向生物学学科的快速发展和研究型人才培养需求的增加,生物学实验教学应设立更加多元化的学习目标,即在实验技能训练的基础上,努力培养学生的实验设计与操作能力,提升学生的科学思维和创新意识。文中结合基因工程实验课程的混合式教学改革的过程,介绍基因工程实验在线资源建设方法、混合式教学理念设计和课堂实施细节,并对教学效果进行了初步分析。实践证明,基因工程实验的混合式教学模式能够有效促进学生的主动学习,形成以"学"为中心的教学模式,帮助学生提高实验技术的学习效果,并在此基础上培养严谨的科学态度、专业的研究素质及创新的学术能力。

关键词： 7SK截短体   胚胎干细胞   增殖   周期蛋白依赖激酶9   细胞分裂周期蛋白6  

摘要： 目的探讨小核非编码RNA 7SK在胚胎干细胞(ESCs)增殖中的作用,为原始侏儒症疾病的早期诊治提供靶点。方法利用CRISPR/Cas9系统转染ESCs,通过PCR产物测序和甘油梯度分析鉴定每个单克隆细胞系获得7SK 128-179突变体。使用慢病毒系统敲除CDK9,然后通过Western blotting分析敲除效率和相关通路蛋白的变化。结果CRISPR/Cas9系统转染后,ESCs中出现128-179 nt缺失突变的7SK,该突变导致ESCs增殖缺陷。7SK 128-179 nt突变的ESCs中LARP7和CDC6的蛋白水平显著下调,通过干预CDK9的活性发现7SK对ESCs增殖的调控作用依赖于CDK9的活性。结论7SK 128-179 nt截短体可通过下调CDC6严重影响ESCs的增殖,且这一过程依赖于CDK9活性,提示7SK截短突变可作为侏儒症的早期筛查和治疗靶点。

关键词： RHD基因   D变异体   基因测序  

摘要： 目的研究D变异的分子基础,探讨弱D新等位基因产生的分子遗传机制。方法采用血清学方法筛查D变异体,D变异体采用聚合酶连反应进行RHD基因的全编码区进行扩增并进行直接测序。杂交合子技术检测RHD的杂合性。结果血清学检测为弱D表型,DNA序列分析检测到2个新等位基因,1个是weak D 399C新等位基因,第3外显子有1个c.399G>C突变,导致编码133位氨基酸由赖氨酸变成天冬酰胺(p.K133N)。另1个是weak D 1102A新等位基因,在2个标本中检测到第8外显子c.1102G>A突变,导致编码368位氨基酸由甘氨酸变成精氨酸(p.G368R)。结论本研究采用基因测序技术检测和鉴定RHD变异体,并鉴定2个新等位基因。

关键词： 胚胎干细胞   CRISPR-Cas9   p53   Nanog   异质性  

摘要： 目的构建p53-EGFP、Nanog-mcherry双荧光标记细胞系,对小鼠胚胎干细胞内p53、Nanog蛋白表达水平进行实时、定量追踪。在此基础上,初步探讨p53在小鼠胚胎干细胞中的作用。方法利用CRISPR-Cas9基因敲入系统分别将外源荧光蛋白表达基因插入到p53、Nanog基因组终止密码子后方,实现p53-EGFP、Nanog-mcherry融合表达。通过荧光强度分析,克隆形成能力检测等方法探索p53在小鼠胚胎干细胞中的作用。结果本研究成功构建了小鼠胚胎干细胞p53-EGFP、Nanog-mcherry双荧光标记细胞系,进一步发现p53蛋白表达在小鼠胚胎干细胞间具有异质性,且能调控Nanog蛋白表达的异质性。此外,p53蛋白表达量与小鼠胚胎干细胞克隆形成能力有关。结论基于CRISPR-Cas9基因敲入技术构建的双荧光标记细胞系中荧光强度的变化可以在活细胞状态下代表小鼠胚胎干细胞内相应蛋白表达水平,p53可通过其在小鼠胚胎干细胞群体间异质性表达参与小鼠胚胎干细胞转录调控网络中,并一定程度影响其自我更新能力。