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关键词： DNA测序   压缩感知   SAR ADC   稀疏信号重建  

摘要： DNA作为生物遗传信息的载体,在生命科学以及当代医学研究领域扮演着非常重要的角色。自上世纪七十年代以来,DNA测序经过多次的技术迭代,已逐渐从传统生物化学检测方法发展至利用其物理特性来进行检测。第四代DNA测序技术是基于碱基分子的电学特性不同,在微流控芯片中对纳米孔两侧施加电压,检测DNA分子中不同碱基流过纳米孔所产生变化的微弱电流进行检测。然而,在量化时为了减小检测单元中噪声的影响,采用的相关双采样技术,以及为了提高检测精度采用大通量甚至超大通量的检测阵列。这些都会使需要处理的数据量十分巨大,导致进行数据量化的ADC模块会有更严格的设计指标,也对后续数据的传输与处理提出了更高的要求。为了减小DNA测序系统量化电路的数据压力,本文基于压缩感知采样方式提出了一种将压缩算法嵌入SAR ADC的模拟信息转换器电路,通过对四通道信号片上压缩后量化、片外重建的方式,减小了量化电路中面积与功耗的开销、大幅减小了量化电路需要处理的数据量,缓解了后续数据处理的压力。 首先,本文对压缩感知采样算法的原理进行了详细描述与数学推导,研究了压缩感知硬件实现的多种方式,并不同的结构进行优势劣势分析,对压缩感知采样和传统采样进行了对比;其次,重点研究了基于非均匀采样的压缩感知硬件实现方式,创新性的提出了将压缩算法嵌入SAR ADC的方法,实现了减小所需要的辅助电路,降低电路设计复杂性的目的;设计了基于SAR ADC的模拟信息转换器,并以该电路为基础设计了所需要的采样保持调制电路、动态比较器、CDAC阵列以及数字控制逻辑;提出了针对多通道量化后信息重建的重建算法,搭建了适用于多通道并含有量化噪声的信号重建环境;最后,完成电路前仿真、版图绘制、电路后仿真以及联合重建仿真,实现了ADC在N次量化后通过片外重建得到4N个数字信号,减小了电路的数据处理压力。 本文电路的设计与仿真过程均基于Cadence平台,在TSMC 0.18μm CMOS工艺下,实现了一款4通道9位1.6 Msps的模拟信息转换器,同时基于matlab软件设计了重建算法。根据后仿真结果表明,在单通道模式下,ADC输出信噪比为53.1 d B,有效位数达到8.56位,微分非线性与积分非线性误差均小于0.5 LSB;多通道模式下,结合重建算法,在输入频域稀疏输入信号时,重建信噪比达到38 d B,重建误差小于10;4通道共用AIC面积为0.108 mm,信号压缩比为0.25,面积开销减小30%,数据处理次数减小至25%,说明了论文研究的正确性与有效性。

关键词： 基因工程   外膜囊泡   多抗原   SARS-CoV-2   特异性抗体   绿色荧光蛋白  

摘要： 外膜囊泡（OuterMembraneVesicle，OMV）是一种由革兰氏阴性菌分泌的包含生物活性物质的球形双层纳米结构，其直径为20-250nm。由于外膜囊泡兼具易被淋巴管摄取和激活机体免疫系统属性，使得其在肿瘤疾病治疗和感染性疾病预防等方面表展现出独特的优势。然而，随着应用需求的增加，外膜囊泡也被要求赋予更多新的功能。因此，外膜囊泡的工程化改造技术是目前的研究重点，尤其是如何在外膜囊泡上负载多抗原问题。　　为了获得稳定高效的工程化外膜囊泡抗原递送平台，我们采用红色荧光蛋白（mCherry）作为模型抗原，设计了3种融合表达模式，包括OmpA-SP-mCherry、LPP-SP-mCherry和OmpA（1-171aa）-mCherry。通过Red/ET方法将编码mCherry蛋白的基因整合到大肠杆菌Nissle1917（EcN）的基因组中，获得了三株能够稳定分泌内腔负载mCherry的外膜囊泡的工程菌。通过检测外膜囊泡的红色荧光强度发现OmpA（1-171aa）-mCherry表达模式（OLm-OMVs）的OMVs的荧光强度分别约为Lpp-SP-mCherry（LSm-OMVs）和OmpA-SP-mCherry（OSm-OMVs）的2倍和15倍。随后，我们以绿色荧光蛋白（GFP）作为模型抗原，与溶细胞素A蛋白（ClyA）融合表达将膜表面展示系统引入OLm-OMV，构建了可装载两种荧光蛋白（mG-OMVs）的工程化OMVs。通过Western-blot分析、荧光强度分析、蛋白酶K（PK）处理和透射电镜（TEM）观察等方法验证，我们成功构建了可在腔内装载mCherry、表面装载GFP的工程mG-OMVs。此外，为了提高外膜囊泡的产量，敲除了EcN的nIpl基因。　　基于此，本研究以新冠肺炎病毒表面棘突蛋白受体结合域（receptor-bindingdomain，RBD）及其关键肽段NG06为实例，构建了内腔负载RBD抗原，膜表面负载NG06抗原的外膜囊泡（NR-OMVs）。细胞实验表明，树突细胞可以高效摄取NR-OMVs，摄取NR-OMVs后树突细胞表面的MHCⅡ分子和CD86分子显著高表达，摄取NR-OMVs的树突细胞同时大量分泌IL-6和TNF-α细胞因子。将NR-OMVs免疫小鼠后，利用酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）方法检测血清RBD特异性抗体证明，用NR-OMVs单次免疫小鼠10天抗体滴度达到102，免疫3次后滴度可达到103，抗体滴度分别是负载单抗原外膜囊泡NG06-OMVs的2.2倍、RBD-OMVs的1.3倍及传统疫苗形式（RBD+Alum）的1.7倍，验证了多抗原负载型外膜囊泡平台的免疫效力以及作为新冠抗原候选递送载体的潜力。　　综上所述，本研究以mCherry和GFP作为模型抗原，建立了可在外膜囊泡膜表面和内腔负载多抗原的抗原递送平台。基于该多抗原递送平台，我们在外膜囊泡腔内引入RBD抗原，同时在外膜表面显示NG06抗原，制备得到纳米颗粒疫苗NR-OMV，通过细胞实验和小鼠实验，证明NR-OMV可诱导良好的保护性免疫反应，为新冠肺炎纳米颗粒疫苗的研制提供了新思路。我们提供了一种通用的方法使外膜囊泡可携带多抗原，尤其适合那些难以在外膜囊泡表面有效展示的蛋白，并验证了外膜囊泡在多抗原载体中的潜力。

关键词： 人胚胎干细胞(hESC)   肝细胞   极化   AMPK-YAP信号通路   肝功能  

摘要： 相比于人原代肝细胞(primary human hepatocytes,PHH)和肝细胞系,人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)源的肝细胞作为人终末期肝病的肝细胞移植、生物人工肝治疗以及新型药物的临床前研究的功能性肝细胞源,在个体稳定性、产业化潜力和肝功能完整性方面具有明显优势。然而,hESC源肝细胞在肝功能上和新鲜分离的PHH仍存在一定差距。正常生理状态下,成熟的肝细胞在体内处于多极化状态,其极化状态的维持也保证了正常的肝功能。相反地,通过传统分化方案获得的hESC源肝细胞极少表现出肝细胞的极化特征,这可能是制约其肝功能水平的重要原因。那么,极化的hESC源肝细胞是否有助于肝功能的提升?其中的作用机制是什么?亟待阐明。研究目的:在体外建立一套获得极化状态的hESC源肝细胞分化方案,以得到肝功能更强的体外分化肝细胞,并对得到的极化hESC源肝细胞的极化机制进行探究。研究内容及方法:1、结合Transwell培养方法和课题组前期的分化方案,建立一套在体外诱导hESC源肝细胞极化的分化方案,并通过流式细胞技术检测分化各阶段细胞的分化效率;2、通过酶联免疫吸附(ELISA)等方法检测白蛋白、尿素氮、甲胎蛋白和胆汁酸的方向性分泌情况以判断极化hESC源肝细胞是否构建成功;3、通过荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫荧光染色检测极化hESC源肝细胞中极化标志物的m RNA表达水平、蛋白表达水平和细胞定位情况;4、通过转录组测序和数据生信分析寻找极化hESC源肝细胞的体外极化机制;5、RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色验证AMPK-YAP信号通路在极化hESC源肝细胞中的调控作用;6、使用RT-qPCR和ELISA等方法检测极化hESC源肝细胞在成熟度、尿素合成、胆汁酸合成及调控和药物代谢等多方面的肝功能水平。研究结果:通过本研究中体外极化分化的方法,可成功获得高纯度的极化hESC源肝细胞。检测发现该极化hESC源肝细胞具有更接近新鲜分离的PHH的细胞形态,双核率明显增加,其肝细胞产物呈方向性分泌。该细胞顶膜标志物的表达显著上调且能正确定位在细胞膜处。转录组测序及数据生信分析显示极化hESC源肝细胞在细胞粘附、顶膜结构、物质转运和肝功能等多个方面发生了显著的改变。基于转录组学结果,在机制上本研究发现AMPK-YAP信号通路调控了hESC源肝细胞的体外极化过程。最后对肝功能进行检测发现,相比于非极化hESC源肝细胞,极化hESC源肝细胞在成熟度、尿素合成、胆汁酸动态合成和药物代谢能力等多方面均有明显提高。结论:本研究所分化得到的极化hESC源肝细胞具有相应的极化特征,其肝功能得到增强,并且发现AMPK-YAP信号通路在对其极化的发生起到重要的调控作用。

关键词： 铜绿假单胞菌   oprD基因   DNA疫苗   亚单位疫苗   免疫  

摘要： 铜绿假单胞菌是一种自然环境中常见的致病菌,当动物机体面对条件性的应激因素例如注射污染、疲劳运输、皮肤烧伤等时极易受到铜绿假单胞菌的感染。虽然长期以来,针对本病的控制手段一直以抗生素疗法为主,但由于铜绿假单胞菌广谱耐药的情况出现,因此亟待采用更为合理的防控与处理手段。人们一直期望能够找到预防和抑制该细菌侵染的有效手段,来遏制铜绿假单胞菌发病率上升的势头。因此研制出新型安全高效的铜绿假单胞菌疫苗具有重要的意义。***疫苗的构建:本研究选择铜绿假单胞菌外膜蛋白D基因和真核表达载体p CAGGS-HA构建DNA疫苗,首先设计特异性引物,通过PCR扩增出大小为1340 bp的目的基因oprD,将目的基因连接于p MD(?)19,通过限制酶SacⅠ和NheⅠ双酶切oprD基因和真核表达载体p CAGSS-HA,用T4连接酶连接后得到阳性重组子p OPRD,成功构建DNA疫苗。2.原核表达载体的构建及重组蛋白的表达与纯化:本研究选择铜绿假单胞菌外膜蛋白D基因和原核表达载体p ET32a构建基因工程亚单位疫苗。重新设计特异性引物,通过PCR扩增出大小为1340 bp的目的基因oprD,将目的基因连接与p MD(?)19,通过限制酶Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切oprD基因和原核表达载体p ET32a,T4连接酶连接后得到阳性重组子p ET32a-oprD,将构建成功的原核表达载体p ET32a-oprD转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG成功诱导出65k D大小的Opr D重组蛋白。探索了Opr D蛋白最佳诱导表达条件是菌液培养5 h时加入0.7 mmol/L的IPTG,37℃下诱导4.5 h。***疫苗与重组亚单位疫苗免疫效果的研究:根据试验设计准备了七组疫苗组对小鼠进行免疫试验,检测不同疫苗组的免疫应答效果,七组疫苗组分别是DNA疫苗组、重组亚单位疫苗组、初免-加强免疫组(p OPRD初次免疫-重组亚单位疫苗加强免疫组)、外膜蛋白疫苗组、灭活疫苗组、p CAGGS-HA组和PBS组。试验结果显示,随着免疫次数的增加,各疫苗诱导的小鼠血清抗体水平均呈现出明显的上升趋势,试验组疫苗均可产生较高水平的血清抗体,对小鼠产生较高水平免疫保护;脾淋巴细胞增殖试验显示初免-加强免疫组和外膜蛋白疫苗组小鼠三免后的SI值显著高于其他疫苗组(P<0.05);细胞因子IFN-γ分泌试验显示初免-加强免疫组小鼠脾淋巴细胞分泌的IFN-γ浓度显著高于其他各组(P<0.05),而细胞因子IL-4分泌试验也显示初免加强免疫组和外膜蛋白疫苗组的IL-4浓度显著高于其他疫苗组(P<0.05);攻毒试验结果初免-加强免疫组保护率73.3%较重组亚单位疫苗组和DNA疫苗组单独免疫时保护效果更好。本研究对铜绿假单胞菌外膜蛋白oprD基因的DNA疫苗(p OPRD)和基因工程亚单位疫苗(外膜蛋白Opr D)的免疫原性进行了研究。总体上本研究制备的各类疫苗均可诱导小鼠产生较强的体液免疫应答水平,产生较强的免疫应答,都能为铜绿假单胞菌感染提供良好的保护效果,且两者以初免-加强免疫的方式较其他疫苗组可诱导较好的Th1型免疫应答和Th2型免疫应答并有着不错的保护效果。本研究可以为铜绿假单胞菌感染治疗提供一定的参考。

摘要： 授课人：魏媛（良乡中学）班级：高二年级4班一、相关理论及教学资源的使用本节课对应的核心概念：阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测检测鉴定等步骤。本节课培养的能力和素养：能够基于基因工程应用的事实，运用基因工程的原理，参与有关推广和应用基因工程产品等社会行为的讨论，理性作出个人决策；

关键词： 无义介导的mRNA降解   Smg7   细胞分化   DNA损伤修复  

摘要： 作为真核生物细胞内一种保守的转录后调控机制,无义介导的mRNA降解机制(Nonsense-mediated mRNA decay,简称为NMD)不仅可以降解含有提前终止密码子(PTC)的mRNA,并且可以调控部分可翻译为正常功能蛋白的mRNA的稳定性,同时起到监控mRNA质量和数量的功能。在哺乳动物经典的NMD通路中,其降解功能是由SMG6介导的核酸内切酶途径以及SMG5/7异二聚体介导的核酸外切酶途径行使。值得注意的是,SMG7因子除了在NMD机制中起着降解靶标mRNA的功能外,还可能在DNA损伤修复途径中起着重要作用。在本课题中,我们通过基因打靶技术成功构建了Smg7条件性基因敲除小鼠,通过与Cre-ERT2小鼠进行交配,建立了 Smg7诱导型敲除小鼠,并以此为基础,我们成功分离和建立了 3株Smg7诱导型敲除小鼠胚胎干细胞系(mouse Embryonic Stem Cells-mESCs)。本课题具体研究内容和结果如下:(1)通过4-OHT诱导,我们成功建立了可稳定传代的Smg7敲除胚胎干细胞系。在Smg7敲除mESCs中,通过Western blotting和qPCR等实验策略,我们发现NMD因子如Smg5、Smg6、Upf1在蛋白水平以及mRNA水平均有显著升高,但这些NMD因子的代偿性升高并没有弥补Smg7基因敲除对NMD功能造成的抑制。此外,qPCR分析表明,经典的NMD标靶,如Atf4、Ddit3、Gas5、Snhg12等基因的转录本水平均有显著升高。半定量PCR分析表明,Smg7敲除mESCs中,由于选择性剪切造成的含有提前终止密码子的转录本也有显著积累。这些研究表明,Smg7是NMD的一个核心因子,并且Smg7的敲除造成mESC中NMD功能全面抑制。(2)我们实验室的早期研究表明,NMD因子,如Smg5与Smg6的敲降或敲除都会导致mESC的分化功能缺陷。在本研究中,我们通过拟胚体形成实验和自主分化实验探究了 Smg7基因在mESC分化中的作用。qPCR和Western blotting结果均表明,在两种不同的分化条件下,与对照组mESCs(Smg7F/F)相比,Smg7敲除型mESCs(Smg7Δ/Δ)中的干细胞转录因子Oct4A、Sox2以及c-Myc的蛋白表达水平均有明显升高。该结果提示Smg7是mESCs分化的调节者,证实了 NMD因子参与调控胚胎干细胞分化命运的科学假说。(3)人类肠癌肿瘤细胞系中的研究结果表明,在DNA双链受到损伤的情况下,Smg7可以调控肿瘤抑制因子p53的蛋白稳定性。为了探究Smg7基因在mESCs的DNA损伤修复中的功能,我们使用阿霉素(Doxorubicin;500ng/mL)诱导细胞DNA双链损伤。Western blotting 结果发现,(Smg7F/F)和(Smg7Δ/Δ)mESCs 中 p53 的蛋白表达水平没有明显差异。但qPCR结果显示,阿霉素处理前,Smg7敲除型细胞内p53及下游因子p21的mRNA表达水平出现上调趋势,而阿霉素处理后,两组细胞并未存在明显差异。这个研究结果表明,在mESCs受到DNA损伤的情况下,Smg7可能未参与调控p53信号通路。综上,在本研究中,我们构建了 Smg7条件性敲除小鼠以及Smg7敲除小鼠胚胎干细胞系,初步鉴定了 Smg7在mESC中的生物学功能,初步验证了“NMD是胚胎干细胞命运的调节者”这一科学假说。本研究所建立的小鼠和细胞模型将为后续全面揭示NMD的生物学功能提供重要的研究基础。

关键词： 胚胎干细胞   原始生殖细胞   基因敲入   蛋白纯化  

摘要： 胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)是一类具有无限增殖能力、多能性以及自我更新能力的细胞,可以分化成包括生殖细胞在内的多种细胞。由于其独特的特性,ESCs在早期发育研究、药物筛选、再生医学等诸多领域有着重要的作用和应用前景。原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)作为生殖细胞的前体细胞,是区分体细胞与生殖细胞的重要节点。研究表明小鼠的生殖细胞命运是由BMP信号和Wnt信号诱导近端外胚层细胞形成的,但是体内PGCs数量十分稀少,这极大影响了对于早期生殖细胞形成过程及相关分子机制的研究。为了解决这一问题,我们需要在体外构建PGCs报告基因系统用于ESCs向PGCs转变的分子机制研究。Prdm1(PR/SET Domain 1)是一种在不同发育环境中参与细胞命运决定的重要转录调节因子,Prdm1缺失的纯合突变体小鼠完全缺乏PGCs,同时Prdm1杂合胚胎也表现出PCGs数量减少。此外PGCs中还特异性表达Dppa3(Developmental pluripotency-associated 3),其表达始于小鼠胚胎发育中胚胎第7.5天(E7.5),并且持续存在直到E15.5,在PGCs分化中发挥了重要作用。在小鼠中Prdm1和Dppa3常作为PGCs的标志基因,可用于追踪小鼠体内外生殖细胞的发育情况。 我们利用CRISPR(Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats)基因编辑技术结合同源重组,在m ESCs(mouse ESCs)中实现基因敲入,在Prdm1和Dppa3基因翻译起始位点后分别插入e GFP和m Cherry荧光标签。首先我们根据实验目的设计了针对Prdm1和Dppa3基因翻译起始位点ATG附近的sg RNA,同时构建了对应的用于同源重组的供体质粒(Donor construct),Donor片段上主要包括了同源臂序列以及要插入的基因序列,将sg RNA和Donor质粒转入V6.5m ESCs中,用Puromycin和Neomycin抗性进行筛选,挑选单克隆提取基因组DNA进行基因型鉴定,PCR和Sanger测序结果显示我们成功构建了e GFP-Prdm1/m Cherry-Dppa3基因敲入的杂合(heterozygous)和纯合(homozygous)m ESCs细胞系。利用细胞因子诱导e GFP-Prdm1/m Cherry-Dppa3 m ESCs定向分化为m PGCs(mouse PGCs),流式细胞仪检测显示诱导分化的m PGCs特异表达e GFP和m Cherry荧光信号,进一步证实我们构建的报告基因系统能够真实准确地代表Prdm1和Dppa3的表达,可以用于后续m PGCs命运决定的分子机制研究。 MYCL是MYC原癌基因家族的三个成员(C-MYC、N-MYC、MYCL)之一,其结构主要由N端的包含Myc Box的转录调节域、中间的核定位信号以及C端b HLH-zip结构域构成。MYCL在小细胞肺癌、默克尔细胞癌中常有异常扩增或转录上调,并且与患者生存率低相关,研究MYCL在疾病发生发展中的分子机制对于靶向药物设计、疾病治疗等有十分积极的作用。我们在前期实验中发现MYCL可以抑制TAT诱导的HIV LTR转录,提示MYCL可能在HIV潜伏和再激活过程中发挥调控功能。为了后续研究MYCL调控HIV基因转录的分子机制,我们需要灵敏度好、特异性高的MYCL抗体。我们选取了人源MYCL蛋白一段特异性高、人鼠同源性高的肽段作为抗原,通过原核表达系统纯化出目的蛋白,并将其免疫动物,制备出了人源MYCL抗体,并且后续通过免疫印迹(Western blotting)、免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)、免疫荧光(Immunofluorescence,IF)等一系列实验证实该抗体在多种实验中都能够特异性地识别内源性MYCL蛋白,为我们后续研究MYCL蛋白在HIV基因转录中的调控功能和作用机制奠定了基础。

关键词： 竞争性互补配对的核酸恒温扩增技术   人乳头瘤病毒   病毒疣   DNA测序   分型检测  

摘要： 目的:人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一种以人为主要感染对象的环状双链DNA病毒,目前可分为200多个基因型。根据感染的部位不同,可分为嗜皮肤型HPV和嗜黏膜型HPV;根据致病良恶性可分为低危型HPV和高危型HPV。不同型别的HPV可以导致不同的疾病发生,所引起的疾病严重程度也不同。本研究主要通过一种新型核酸检测技术:竞争性互补配对的核酸恒温扩增(Competitive annealing mediated isothermal amplification of nucleic acids,CAMP)技术对临床感染病毒疣的患者进行HPV分型检测,通过实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)及DNA测序技术来对CAMP结果的准确性进行验证,并对得到的HPV分型检测结果进行分析,包括不同疣体类型感染的HPV型别差异,不同HPV型别对温热免疫疗法的治疗反应差异。研究方法:收集临床病毒疣患者的皮屑,对样本进行DNA提取并测定浓度。对临床样本的HPV型别进行检测,使用针对CAMP技术设计的引物于63℃反应一小时,并通过添加荧光试剂Eva Green观察扩增曲线。同时将DNA样本进行DNA测序,观察结果是否一致,从而对CAMP结果进行验证。最后,对检测出的HPV型别进行分析。结果:1、本研究使用了8种针对CAMP的HPV引物进行HPV分型检测,样本DNA经过63℃一小时反应后,肉眼观察,PCR管中阴性结果呈紫罗兰色,阳性结果呈天蓝色,颜色变化与荧光定量PCR仪中扩增曲线一致率为97.9%;与测序结果对比后,两种方法检测出的HPV型别高度吻合,符合率为96.3%。2、综合CAMP和DNA测序技术结果,病毒疣患者HPV阳性检出率为93.8%,共检测出18种HPV亚型。其中跖疣患者HPV阳性检出率为100%,以单一感染为主,共检出7种HPV亚型,以HPV-27为主;寻常疣患者HPV阳性检出率为77%,以单一感染为主,共检出4种HPV亚型,以HPV-2、HPV-27为主;尖锐湿疣患者HPV阳性检出率为100%,以单一感染为主,共检出9种HPV亚型,以低危型HPV-6,HPV-11为主,多重感染患者可为低危型和高危型混合感染。3、温热免疫疗法治疗皮肤疣患者总体治愈率为76.5%,感染HPV-27皮肤疣患者治愈率为80.0%,感染HPV-57皮肤疣患者治愈率为83.3%,感染HPV-2皮肤疣患者治愈率为40.0%;温热免疫疗法治疗尖锐湿疣患者治愈率为80.0%,感染HPV-6的患者例数相对较多,治愈率为66.7%。比较HPV-27、57、2之间的治愈率差异,两两之间无显著差异(P>0.05)。结论:CAMP技术用于HPV分型检测准确性良好,并可检测出多重感染的患者。综合CAMP和DNA测序技术结果,48例病毒疣患者HPV阳性检出率为93.8%,跖疣患者中最常见的HPV型别为HPV-27,寻常疣患者中最常见的HPV型别为HPV-2和HPV27,尖锐湿疣患者中最常见的HPV型别为HPV-11,尖锐湿疣患者多重感染较寻常疣及跖疣患者常见。暂时尚不能认为不同HPV型别的病毒疣对温热免疫疗法的治疗反应存在明显差异。

关键词： 胚胎干细胞   外泌体   非编码RNA   心肌保护  

摘要： 心肌梗死(Myocardial infarction,MI)是心血管疾病发病率和致死率的首位。心肌梗死后的缺血缺氧会导致心肌细胞死亡并伴有成纤维细胞增生形成瘢痕组织,导致心室重塑并最终发展至心力衰竭,给个人、家庭和社会造成了巨大的经济压力和医疗资源负担。目前临床主要的治疗方式是药物治疗或重建冠状动脉血运,这些措施虽然能减少急性期死亡率,但是仍有很多未解决的问题。所以寻找有效的治疗新靶点,对减少心肌梗死后死亡率、减轻病人生活和社区经济负担都有着重要意义。在近十五年的研究中,逐渐发现外泌体尤其是干细胞来源的外泌体对于心肌损伤有着优越的保护作用并且拥有着以往干细胞疗法不具备的优势,但目前关于干细胞来源的外泌体研究多集中在间充质干细胞并对其作用机制进行了相当多的探究,而对于胚胎干细胞来源的外泌体与心肌细胞的相互作用则少有研究。本研究选取人胚胎干细胞系H9来源的外泌体、人心肌细胞系AC16以及巴马小型猪心梗模型作为研究对象,从细胞实验和动物实验层面揭示人胚胎干细胞来源的外泌体对心肌的保护作用及其作用机制,最后通过对外泌体进行全转录组测序和生物信息学分析以探究其可能产生主要作用的非编码RNA及其可能的作用机制。成功获取H9来源的外泌体,发现其可以抑制线粒体自噬并减少心肌细胞凋亡发挥心肌保护作用,作用于巴马小型猪心梗模型上也证实外泌体明显改善其心功能。全转录组测序发现胚胎干细胞特异性表达的mi R-302簇中mi R-302a/b/d-3p不仅在其分泌的外泌体中高表达并且可以被心肌细胞吸收利用,通过生物信息学分析发现其与凋亡和自噬等病理生理机制密切相关。本研究有力支持了胚胎干细胞源外泌体对心肌的保护作用,并且发现这种保护机制与抑制心肌细胞线粒体自噬及细胞凋亡有关。本研究还获得了胚胎干细胞外泌体内含有的高丰度的转录谱,为后续治疗方法的研究提供了新思路。