关键词：
胃癌前病变
健脾化瘀解毒方
SIRT1/FoxO1通路
自噬
摘要：
目的:基于沉默信息调节因子1(sirtuin 1,SIRT1)/叉头转录因子亚家族O1(forkhead box O1,FoxO1)通路探讨健脾化瘀解毒方(JPHY)逆转胃癌前病变(gastric precancerous lesions,GPL)的作用机制。方法:将7周龄Atp4a-/-小鼠随机分为Atp4a-/-组、JPHY高剂量组(9 g·kg^(-1),JPHY-H)及JPHY低剂量组(4.5 g·kg^(-1),JPHY-L),以同窝野生型小鼠为空白组(WT),连续灌胃8周。采用HE染色观察胃组织病理形态,Western blot法检测胃黏膜SIRT1、FoxO1、FoxO3A、Beclin1、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、MUC2蛋白表达水平。GES-1细胞使用N-甲基-N-亚硝基脲(500μmol·L-1)诱导4次建立GPL模型。将细胞分成正常组(GES-1)、模型组(MTCs)、氯喹组(5μmol·L-1 CQ)、雷帕霉素组(50 nmol·L-1 Rapa)、5%含药血清组(5%JPHY)、10%含药血清组(10%JPHY)、CQ+5%JPHY组、CQ+10%JPHY组、Rapa+5%JPHY组以及Rapa+10%JPHY组。采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,Western blot法检测细胞MUC2、CDX2、SIRT1、FoxO1、FoxO3A、Beclin1、自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR蛋白表达水平。结果:HE染色显示,WT组小鼠胃黏膜病理形态无明显异常;Atp4a-/-组小鼠胃黏膜固有层可见巨型空泡样变和异型增生。与Atp4a-/-组相比,JPHY-H组、JPHY-L组小鼠胃黏膜病变程度减轻。Western blot显示,与WT组比较,Atp4a-/-组小鼠胃黏膜MUC2、SIRT1、FoxO1、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);与Atp4a-/-组比较,JPHY-L组小鼠胃黏膜MUC2、FoxO1、Bcl-2/Bax水平降低(P<0.05)。与GES-1组比较,MTCs组细胞迁移和侵袭数量增加(P<0.05)。与MTCs组比较,CQ组、CQ+5%JPHY组、CQ+10%JPHY组细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.05)。与Rapa组比较,Rapa+5%JPHY组细胞迁移和侵袭数量减少(P<0.01)。与CQ组比较,CQ+5%JPHY组细胞迁移数量减少(P<0.01)。Western blot显示,与GES-1组比较,MTCs组细胞MUC2、SIRT1、FoxO1、FoxO3A、Beclin1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.01)。与MTCs组比较,Rapa组、5%JPHY组、10%JPHY组细胞MUC2、FoxO1、FoxO3A、Beclin1、ATG5蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:JPHY可延缓GPL恶性进展,其机制可能与调控SIRT1/FoxO1自噬通路有关。
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