关键词:
动脉粥样硬化
黄芪甲苷
血管平滑肌细胞
原代细胞培养
增殖
铁死亡
溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路
摘要:
目的:基于溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响。方法:组织贴块法培养原代大鼠胸主动脉的VSMCs,并通过免疫荧光法鉴定细胞类型。细胞增殖与活性检测法(CCK-8)确定AS-Ⅳ在AngⅡ刺激后的最佳作用浓度及时间。实验分为空白组、模型组、AS-Ⅳ组(40μmol·L^(-1))、铁死亡激动剂(Erastin)组(0.5μmol·L^(-1))、Erastin+AS-Ⅳ组(0.5μmol·L^(-1)+40μmol·L^(-1)),空白组给予正常培养基培养,模型组给予含AngⅡ(0.1μmol·L^(-1))的培养基培养,各给药组给予含AngⅡ(0.1μmol·L^(-1))与相应剂量药物的培养基培养。CCK-8与平板克隆形成实验检测各组细胞增殖情况;普鲁士蓝染色检测细胞铁沉积;荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)含量;硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中SLC7A11、GPX4蛋白含量。结果:组织贴块法成功培养原代大鼠胸主动脉VSMCs,免疫荧光检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性,波形蛋白(Vimentin)阴性表达,鉴定细胞为VSMCs。CCK-8确定AS-Ⅳ最佳作用浓度及时间分别为40μmol·L^(-1),24 h。药效学研究结果显示,与空白组比较,模型组细胞增殖增加,细胞中铁沉积增加,ROS、MDA含量升高,SLC7A11及GPX4蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,AS-Ⅳ组细胞增殖受到抑制,细胞中铁沉积减少,ROS、MDA含量降低,SLC7A11及GPX4蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);Erastin组细胞增殖增加,铁沉积增加、ROS、MDA含量升高,SLC7A11及GPX4蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与AS-Ⅳ组比较,Erastin+AS-Ⅳ组细胞增殖增加,细胞中铁沉积增加,ROS、MDA含量升高,SLC7A11及GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与Erastin组比较,Erastin+AS-Ⅳ组细胞中细胞增殖受到抑制,铁沉积减少,ROS、MDA含量降低,SLC7A11及GPX4蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:AS-Ⅳ可通过调控SLC7A11/GPX4通路,抑制铁死亡,以减弱VSMCs的增殖能力,进而发挥治疗动脉粥样硬化的作用。