关键词:
血管内皮损伤
动脉粥样硬化
NLRP3炎性小体
高糖高脂
Ca^(2+)
摘要:
目的 探讨Ca^(2+)/NLRP3/Caspase-1信号通路对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)内皮功能紊乱的调节作用。方法 将16只雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分为普通饮食组和高脂饮食组,每周空腹测量小鼠体质量;持续喂养20周,处死小鼠,收集动脉组织;生化分析仪检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)及高密度脂蛋白(HDL-C)水平;油红O染色评估主动脉管腔斑块及内膜厚度。将人脐静脉内皮融合细胞***926分为对照组、高糖高脂组和Ca^(2+)抑制剂组,流式细胞术检测不同时间段Ca^(2+)含量;免疫荧光法检测NLRP3表达;Western blot法检测主动脉组织和细胞中NLRP3、Caspase-1/p10/p20、VCAM-1、ICAM-1蛋白表达水平。结果 与普通饮食组相比,高脂饮食组小鼠体质量明显增高(F=3.333,P=0.026),血清TC、TG、LDL-C水平显著增高,HDL-C水平显著降低(F分别为1.852、2.410、1.920和2.917,P分别为0.000、0.004、0.002和0.003),小鼠主动脉斑块表面积/主动脉表面积显著增加(F=3.256,P=0.000),斑块横断面积/主动脉管腔面积明显增高(F=6.433,P=0.008),NLRP3、Caspase-1/p10/p20、VCAM-1和ICAM-1蛋白表达水平明显增高(F分别为8.997、4.664、4.486和9.949,P分别为0.036、0.022、0.005和0.018)。与对照组相比,高糖高脂处理6、12、24 h的***926细胞Ca^(2+)含量均显著增高(F分别为0.310、5.649和5.580,P分别为0.006、0.009和0.004),6 h组含量最高;高糖高脂组NLRP3表达显著增高,Caspase-1/p10/p20、VCAM-1及ICAM-1蛋白表达水平显著增高(F分别为10.476、5.310和9.306,P分别为0.029、0.030和0.018)。与高糖高脂组相比,Ca^(2+)抑制剂组***926细胞的NLRP3、Caspase-1/p10/p20蛋白表达水平显著降低(F分别为2.196、2.882和0.035,P分别<0.01、<0.05和<0.05)。结论 NLRP3炎性小体诱导血管内皮细胞功能紊乱,加重AS进展,其发生过程可能与Ca^(2+)及下游信号通路密切相关。