关键词:
动脉粥样硬化
自身抗原醛脱氢酶4家族成员A1
血管内皮细胞
摘要:
目的探讨动脉粥样硬化相关危险因素与自身抗原醛脱氢酶4家族成员A1(ALDH4A1)的关系。方法采用回顾性队列研究方法和实验研究方法。收集2023年1月至2023年3月常州市第四人民医院神经内科动脉粥样硬化患者(动脉粥样硬化组)和健康体检者(健康对照组)各40例的临床资料,并采集其血清样本。其中动脉粥样硬化组男性22例,女性18例,中位年龄66.50(61.00,72.50)岁;健康对照组男性20例,女性20例,中位年龄64.50(58.00,69.50)岁。动物实验中,空白组为野生型C57小鼠;模型组采用高脂饮食喂养APOE-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,应用ALDH4A1及ALDH4A1抗体干预模型组小鼠分别建立ALDH4A1组和Anti-ALDH4A1组,每组各10只。(1)应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人和小鼠血清中的ALDH4A1蛋白水平;(2)油红O染色检测小鼠心脏瓣膜区动脉粥样硬化病变情况;(3)细胞实验中模拟动脉粥样硬化相关危险因素(包括高血压、高血糖、高血脂、炎症)作用于血管内皮细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,ELISA及蛋白质印迹法检测ALDH4A1在细胞及培养基中的分布情况。正态分布的计量资料两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。偏态分布的计量资料组间比较采用Wilcoxon秩和检验。计数资料组间比较采用χ^(2)检验。多因素分析采用Logistic回归模型。结果(1)动脉粥样硬化组患者血清中ALDH4A1蛋白浓度高于健康对照组,差异有统计学意义[(1.209±0.720)μmol/L比(0.649±0.285)μmol/L,t=14.580,P<0.001]。模型组小鼠血清中ALDH4A1蛋白浓度高于空白组,差异有统计学意义[(0.139±0.025)μmol/L比(0.075±0.037)μmol/L,t=19.540,P<0.001]。Logistic回归分析显示,ALDH4A1为动脉粥样硬化的独立危险因素(OR=1.267,95%CI:1.023~1.678,P=0.027),而年龄增大(OR=3.421,95%CI:1.011~1.321,P=0.034)、高血压(OR=4.105,95%CI:1.843~7.878,P=0.015)、总胆固醇升高(OR=5.336,95%CI:1.334~10.785,P=0.033)是ALDH4A1升高的独立危险因素。(2)心脏瓣膜区油红O染色结果显示,ALDH4A1组染色面积大于模型组(t=3.938,P<0.001),Anti-ALDH4A1组染色面积小于模型组(t=5.647,P<0.001)和ALDH4A1组(t=8.653,P<0.001),差异均有统计学意义。(3)细胞实验中,与空白组[(0.130±0.010)%]相比,高血压组[(43.900±0.700)%]、葡萄糖组[(16.460±0.201)%]、氧化低密度脂蛋白组[(13.980±0.112)%]、脂多糖组[(34.100±0.150)%]HUVEC凋亡细胞比例均较高,且高血压组最高,差异均有统计学意义(空白组比高血压组:t=108.260;空白组比葡萄糖组:t=140.500;空白组比氧化低密度脂蛋白组:t=223.200;空白组比脂多糖组:t=391.400;高血压组比葡萄糖组:t=65.260;高血压组比氧化低密度脂蛋白组:t=73.170;高血压组比脂多糖组:t=23.710;均P<0.001)。免疫印迹法显示高血压组和脂多糖组平均灰度值下降明显,氧化低密度脂蛋白组和葡萄糖组下降较小。ELISA检测显示,高血压组[(13.003±1.051)μmol/L]、葡萄糖组[(5.310±0.407)μmol/L]、氧化低密度脂蛋白组[(4.003±0.867)μmol/L]、脂多糖组[(11.647±0.450)μmol/L]培氧基中ALDH4A1浓度均高于空白组[(0.015±0.010)μmol/L],且高血压组浓度最高,差异均有统计学意义(高血压组比空白组:t=30.260;葡萄糖比组空白组:t=31.880;氧化低密度脂蛋白组比空白组:t=11.270;脂多糖组比空白组:t=63.280;高血压组比葡萄糖组:t=16.720;高血压组比氧化低密度脂蛋白组:t=16.180;高血压组比脂多糖组:t=2.906;均P<0.001)。结论ALDH4A1为加重动脉粥样硬化的危险因素之一。动脉粥样硬化相关危险因素中高血压可导致内皮细胞凋亡显著上调,自身抗原ALDH4A1释放至细胞外最明显。