关键词:
长链非编码RNA P53
长链非编码RNA P21
动脉粥样硬化
发病机制
摘要:
目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)-P53和lncRNA-P21在冠状动脉粥样硬化所致冠心病中的作用机制,为其诊断与治疗提供新分子靶点。方法选取2022年1月至2023年1月福建中医药大学附属第二人民医院收治的50例动脉粥样硬化患者作为研究组,另选取同期50例健康体检者作为参照组。选取60只雄性无特定病原体(specific pathogen free,SPF)Wistar大鼠作为实验对象,按照随机数字表法分为模型组(n=40)与对照组(n=20)。比较研究组与参照组lncRNA-P21和lncRNA-P53水平,比较模型组与对照组大鼠lncRNA-P21和lncRNA-P53水平,RNA Pulldown实验鉴定与lncRNA-P21结合的蛋白,ChIP实验计算目的蛋白与特定DNA区域的结合情况,观察大鼠脑组织及其周围动脉粥样硬化区域的病理学改变。结果研究组lncRNA-P21、lncRNA-P53水平均低于参照组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠血清lncRNA-P21、lncRNA-P53水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。通过SDS-PAGE电泳分离蛋白质及质谱分析,明确鉴定出与lncRNA-P21结合的蛋白质种类。质谱分析结果显示,lncRNA-P21结合的蛋白中,与MDM2蛋白的氨基酸序列匹配度>83%(采用Mascot评分系统,置信度阈值P<0.05),二者存在直接物理相互作用。通过ChIP实验,与阴性对照相比,结合片段组的蛋白结合DNA含量显著升高;利用甲醛交联蛋白质和DNA,经过裂解、孵育、洗涤、解交联等一系列步骤,对纯化后的DNA进行定量和实时定量PCR检测,以输入样本为参照,目的蛋白与lncRNA-P21启动子区域存在显著的靶向结合作用,验证ChIP实验lncRNA-P53与lncRNA-P21启动子在动脉粥样硬化中存在靶向结合关系。经HE染色观察大鼠脑组织,正常大鼠细胞较薄,而粥样硬化组呈现出明显的病理改变,内膜增厚,管腔变小且疏松。结论通过临床与动物实验,动脉粥样硬化会导致lncRNA-P21、lncRNA-P53水平降低,RNA pulldown等实验通过调控细胞周期等参与进程,HE染色显示相关病理改变。