关键词:
针刺内关+公孙穴
冠状动脉粥样硬化
循环外泌体circ_0001439S
钠离子通道和网格蛋白连接蛋白1
内皮素-1
血管内皮型一氧化氮合酶
摘要:
目的探讨针刺内关+公孙穴对冠状动脉粥样硬化大鼠钠离子通道和网格蛋白连接蛋白1(sodium channel and clathrin linker 1 gene,Sclt1)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、血管内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达的影响以及其对循环外泌体环状RNA(circRNAs)0001439S(circ_0001439S)表达的调控机制。方法提取并鉴定健康对照组受试者和冠状动脉粥样硬化心脏病组患者血清中的外泌体;通过芯片分析以及实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)验证外泌体中差异表达的circRNAs。通过高脂饲料持续喂养大鼠8周构建动物模型,以针刺内关+公孙穴进行干预,以circ_0001439S模拟物(circ_0001439S-mimic,mimic)进行功能挽救实验。脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸鸟苷原位末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling,TUNEL)检测大鼠冠状动脉组织中的细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色、二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)染色以及油红O染色检测大鼠冠状动脉组织中的线粒体膜电位、活性氧(reactive oxidative species,ROS)水平以及脂质沉积,免疫组化法检测初级纤毛标志物抗ADP核糖基化因子相似蛋白-13B(antiADP-ribosylation factor-like protein 13B,ARL13B)和纤毛内转运蛋白88(intraflagellar transport 88,IFT88)的表达;免疫荧光法检测乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-coA carboxylase,ACC)和固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding proteins,SREBP)的表达;蛋白质免疫印记(Western blot)法检测Sclt1、ET-1和eNOS的表达。结果经电镜以及Western blot鉴定后确为外泌体;经芯片分析以及qRT-PCR验证显示circ_0001439S在疾病中的表达明显升高;针灸内关+公孙穴能明显降低细胞凋亡率、ROS水平以及脂质沉积,升高冠状动脉组织中的线粒体膜电位以及冠状动脉组织中ARL13B和IFT88的表达;升高ACC和SPEBP表达;上调Sclt1和eNOS的表达,下调ET-1的表达,mimic能明显逆转针刺对冠状动脉组织的保护作用,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论针刺内关+公孙穴能明显升高大鼠冠状动脉组织中Sclt1和eNOS的表达,降低ET-1的表达,升高线粒体膜电位,降低冠状动脉组织中ROS和脂质沉积的水平,下调冠状动脉组织中的细胞凋亡率,这可能与针灸处理能调控冠状动脉粥样硬化心脏病大鼠循环外泌体中circ_0001439S的表达有关。